嵌套式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别体系的建立

应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优化,以准确鉴定牛早期胚胎性别。结果表明,在优化了的PCR反应体系下,中国荷斯坦公牛DNA样品得到178bp和262bp的两个条带,而母牛仅得到262bp的1个条带;静脉血样DNA性别鉴定结果与实际性别相符率为100%,表明本试验建立的体系完全可以用于牛早期的胚胎性别鉴定。

巢式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别的研究

源于牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6进行巢式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样及牛胚胎样进行特异性条带鉴定。结果表明,中国荷斯坦公牛出现178bp和262bp2条带,而母牛仅出现262bp1条带;静脉血样与实际性别相符率为100%;巢式PCR胚胎性别鉴定技术方法准确、简便,具有很高的灵敏性及稳定性。

应用Sry-PCR扩增鉴定狍(Capreolus capreolus)的性别

根据人的SRY基因核心序列设计合成1对引物C1、C2,应用PCR技术对野生狍(Capreoluscapreolus)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增,结果在野生狍雄性样本扩增出1条带(221bp),而在雌性样本未见扩增带,显示了Sry基因的性别特异性。应用这1对引物对42个未知性别狍肌肉组织样本进行了性别鉴定,结果雄性22个,雌性20个。对Sry-PCR产物克隆测序,得到185bp的Sry基因部分核苷酸序列。本试验为狍种群性别比率及其种群动态变化机制研究提供了资料。

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明:使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段;而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段,其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果,而常规PCR则需要20～30个细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别,同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。

牦牛胚胎性别鉴定PCR反应体系的建立

研究旨在建立牦牛胚胎性别鉴定准确、可靠的PCR反应体系及研究切割取样对胚胎发育能力的影响。根据牦牛SRY和HSL基因序列分别设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物和2对引物作为内标引物,通过优化PCR反应条件,对已知性别牦牛血液基因组DNA和牦牛杂种胚胎DNA采用巢式PCR进行性别鉴定。结果表明,血液样本性别鉴定与实际性别完全相符,准确率100%。从早期胚胎取8个细胞进行性别鉴定,结果雄性为45.8%(11/24),雌性为54.2%(13/24),取样后胚胎发育率为56.7%。结果说明已成功建立牦牛胚胎性别鉴定的PCR体系。

水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率。结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24)。该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用。

应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

通过设计特异性引物,优化Mg2+浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素,确定了适合现场应用的PCR反应体系;46枚胚胎现场的鉴定率为87%,移植妊娠率为28%,准确率为85%,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定,鉴定率95%,移植妊娠率33%,准确率88%,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。

利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别

根据GenBank中已发表的山羊SRY基因和β-乳球蛋白基因序列设计2对PCR引物,对来自3个1月龄山羊胎儿成纤维细胞的基因组DNA进行PCR扩增,分别以公羊、母羊的基因组DNA为阳性和阴性对照,同时对PCR产物进行序列测定和同源性分析。结果表明,阳性对照和GFF1细胞系有2条扩增带,阴性对照、GFF2和GFF3细胞系只有1条扩增带;序列测定结果表明,PCR扩增产物为SRY基因,利用该方法准确鉴定出1个雄性细胞系和2个雌性细胞系。

应用巢式及复合PCR对小鼠早期胚胎进行性别鉴定

根据小鼠SRY基因,设计并合成内外两对巢式PCR引物;同时,根据ZFY—ZFX基因的同源性,设计 合成其共同的巢式PCR引物,对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定,雄性样品可扩增262bp的SRY基 因和137bp的ZFY-ZFX基因片断,而雌性样品只能扩增137bp的ZFY—ZFX基因片断,其鉴定结果与已知性别 一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增,通过常规PCR与巢式PCR、 复合PCR的比较,确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎,其中雄性12 枚,雌性8枚,鉴定准确率为95．2％。

扩增SRY基因鉴定牛、羊胚胎性别的初步研究

本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因,结果表明:第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带,而母牛、母羊基因组DNA无此扩增条带,说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定;

应用PCR扩增Y染色体性别决定区序列鉴定山羊胚胎性别

在对山羊的Y染色体性别决定区(SRY)序列进行分析的基础上,设计出特异于山羊SRY序列的PCR引物,对山羊胚胎的分割胚的SRY序列进行扩增,以鉴定胚胎性别。胚胎移植后的妊娠及产羔情况证实,性别鉴定结果可靠。

应用巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别

为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。

PCR法鉴别牛早期胚胎性别的研究进展

对PCR法鉴别动物胚胎性别的机理进行了分析,综述了近10年来相关操作技术的进展,包括早期胚胎取样、胚胎细胞DNA的提取、引物的设计、扩增条件的优化、扩增产物的检测和性控胚胎的冷冻等,并提出PCR法鉴别牛早期胚胎性别的前景与展望。

不同妊娠状态下母体循环中胎儿游离DNA—SRY基因的定量检测

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论，从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定，预防X连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期及晚期共80名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA，采用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative polymerase chain—reaction，FQ—PCR）方法对不同妊娠状态下孕妇外周血中游离的胎儿DNA（fDNA）进行定量分析，初步探讨游离fDNA在不同妊娠状态下的浓度变化，为尽早应用于临床提供科学依据。结果早孕组28例血浆标本中有25例检测到SRY基因，其平均浓度为58．82copies／ml，实测浓度范围为33．7～126．2copies／ml；中孕组20例血浆标本中均检测到SRY基因，其平均浓度为152．08copies／ml，实测浓度范围为37．7～390．2copies／ml；晚孕组32例血浆标本中均检测到SRY基因，其平均浓度为212．34copies／ml，实测浓度范围为87．90～493．56copies／ml。组间两两比较，差异有统计学显著性意义（P〈0．01）。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕62d的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿sRY基因，随孕周的增加，母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创性产前诊断中有重要的价值。

常规PCR和巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别体系的建立和优化

试验利用牛Y染色体重复序列作为雄性特异性引物,以肿瘤坏死因子(TNFα)为内标引物建立多重PCR和多重巢式PCR体系,进行牛早期胚胎性别鉴定。共设计4对引物—Y染色体重复序列外引物和内引物,其扩增片段大小分别为534bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物,扩增片段大小分别为357bp和272bp。结果表明,4对引物均有很高的特异性和稳定性;多重PCR体系灵敏度为50pg(约8个细胞),多重巢式PCR体系灵敏度为10pg(约2个细胞),故多重巢式PCR体系更适合于牛胚胎性别鉴定。

SRY基因与性别鉴定技术

本文综述了性别决定基因 (SRY)研究历程 ,SRY基因的结构、功能、表达特性及其它对性别控制研究和性别鉴定技术发展的作用 ,在此基础上产生了相关的分子生物学性别鉴定方法 ,如PCR法、核酸杂交法、原位杂交法等 ,并讨论了这些方法在胚胎性别鉴定。

巢式PCR法鉴定猪早期胚胎性别的研究

根据猪SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据猪β-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了猪胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公猪可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母猪只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。

SRY基因的分子机制及其在奶牛性别控制中的应用

综述了性别决定的生物学机制和性别决定基因(SRY)的定位、结构、功能、表达特异性及其作用的分子机制,在此基础上阐述了SRY在奶牛精子性别控制与胚胎性别鉴定中的应用,着重介绍了用于胚胎鉴定的PCR扩增法和DNA探针法。

Sry基因和Y染色体重复序列在牛早期胚胎性别鉴定中应用效果的比较

本试验以牛Sry基因和Y染色体重复序列作为雄性特异性基因,分别设计引物,建立多重巢式PCR体系,比较二者在牛早期胚胎性别鉴定中的应用效果。试验结果表明,当扩增体系中的模板量为一个胚胎细胞的DNA量时,以Y染色体重复序列构建的扩增体系比Sry基因具有更高的灵敏度和稳定性,更适合用于牛早期胚胎性别鉴定。

PCR方法鉴定牛早期胚胎性别研究进展

对用于早期胚胎性别鉴定的多重PCR、巢式PCR、引物一扩展预扩增PCR、非电泳PCR和LAMP法等扩增技术进行了综述,并针对早期胚胎性别鉴定技术在养牛业生产中的应用现状和存在问题进行分析与讨论,展望了PCR性别鉴定技术在养牛业中广阔的商业应用前景。