金鱼(Carassius auratus)咽部寄生洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)的分子鉴定和系统发育分析

在福州地区开展金鱼病害监测调查中,发现一种寄生于金鱼(Carassius auratus)咽部的粘孢子虫。为了明确虫株,本文以该粘孢子虫为研究对象,使用18S rDNA和ITS-5.8S基因对其进行分子鉴定及系统发育树的构建和分析。结果表明,虫株形态与洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)相似,18S rDNA基因测序结果与已报道的洪湖碘泡虫对应基因序列相似性为98.08%,使用洪湖碘泡虫特异性检测引物可扩增该碘泡虫ITS-5.8S基因片段,结合虫株寄生部位、形态和2个基因的系统发育树分析,可鉴定本文碘泡虫为洪湖碘泡虫。本研究首次发现洪湖碘泡虫除了会危害异育银鲫[C.auratus gibelio(Bloch)]外,还可寄生于金鱼咽部,丰富了对洪湖碘泡虫寄主和寄生部位的认识,对该碘泡虫病害的早期诊断具有一定的参考价值。

L-苹果酸对湘云鲫生长性能、体组成、消化和抗氧化能力的影响

本试验旨在研究L-苹果酸对湘云鲫生长性能、体组成、消化和抗氧化能力的影响.选取均重为（16.25±0.03）g的湘云鲫450尾,随机分为6组（每组3个重复,每个重复25尾）,分别饲喂在基础饲料中添加0（对照组）、1、2、4、8和16 g/kg L-苹果酸的试验饲料,试验期90 d.结果表明：饲料中添加L-苹果酸可显著降低饲料pH和系酸力（P＜0.05）.饲料中添加L-苹果酸可提高湘云鲫的摄食量和增重率,降低饲料系数,并在添加水平为4 g/kg时达到最佳生长性能.饲料中L-苹果酸添加水平为0 ～8 g/kg时,全鱼水分含量逐渐下降,粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量逐渐增加,且4和8 g/kg组均与对照组差异显著（P＜0.05）.饲料蛋白质沉积率在4 g/kg组达到最高,脂肪和灰分沉积率则在8 g/kg组最高,并均与对照组差异显著（P＜0.05）.肠道淀粉酶活性在4g/kg组达到最高,脂肪酶、胰蛋白酶和Na＋/K＋-ATP酶活性均在8 g/kg组达到最高,并均与对照组差异显著（P＜0.05）.饲料中添加L-苹果酸可提高肝脏超氧化物歧化酶和苹果酸脱氢酶活性,降低丙二醛含量,且上述指标均在4 g/kg组达到最佳值,并与对照组差异显著（P＜0.05）.由此得出,饲料中适量添加L-苹果酸可促进湘云鲫的生长,降低饲料系数,增加鱼体营养物质沉积,提高消化和抗氧化能力;L-苹果酸在湘云鲫饲料中的适宜添加量为4～8 g/kg.

鲫TLR9基因克隆及生殖因素对其在肠道表达的影响

为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明,CaTLR9 cDNA全长3 509 bp,包含3 195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1 064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化分析表明,CaTLR9与其他鲤科鱼类同源性较高,与鲤(Cyprinus carpio)相似度为92%,其次是草鱼(Ctenopharyngodon idella)和斑马鱼(Danio rerio),分别为83%和79%。实时荧光定量PCR结果表明,CaTLR9在鲫脾中表达量最高,其次为肾和鳃,其他组织的表达量均较低。鲫肠道TLR9在非繁殖期的表达水平明显低于繁殖期,注射适当剂量的外源hCG可显著上调鲫肠道TLR9的表达。本研究对揭示鲫非特异性免疫能力调节机制,提高鲫健康养殖水平具有一定参考价值。

L-苹果酸和柠檬酸联合对异育银鲫生长性能、抗氧化能力、血液和血清生化相关指标的影响

试验旨在研究柠檬酸(CA)和L-苹果酸(MA)联合对异育银鲫幼鱼生长性能、血清学指标、血液学指标和抗氧化指标的影响。选取7.5 g重复,每个重复16尾鱼。这5个组分别饲喂基础饲料(Ⅰ组),以及基础饲料中分别添加0.2%CA(Ⅱ组)、0.2%CA+0.1%MA(Ⅲ组)、0.2%CA+0.2%MA(Ⅳ组)、0.2%CA+0.4%MA(Ⅴ组),试验周期为60 d。结果表明:相比Ⅱ组,Ⅲ、Ⅳ组增重率和特定生长率显著升高(P<0.05),最高值均出现在Ⅳ组,Ⅳ组白细胞总数(WBC)显著提高(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ组红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)含量均显著升高(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组平均血红蛋白浓度(MCH)显著升高(P<0.05);但是相比于Ⅰ组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组血小板(PLT)浓度均显著降低(P<0.05);相比于Ⅱ组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组ALT、AST显著升高(P<0.05),Ⅳ、Ⅴ组乳酸脱氢酶(LDH)活性显著提高(P<0.05),Ⅳ组碱性磷酸酶(AKP)活性显著升高(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ组总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)浓度显著升高(P<0.05),AKP、ALB、TP最高值均出现在第Ⅳ组;与Ⅱ组相比,随着L-苹果酸浓度增高,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组异育银鲫超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性均出现先上升后下降的趋势,最高值均出现在第Ⅲ组;结果证明适量添加柠檬酸和L-苹果酸可以显著提高异育银鲫的生长性能和抗氧化能力,但可能诱导肝损伤和引起血小板降低症。

银鲫与普通鲫群体遗传结构的比较分析

利用15个微卫星多态性分子标记,对黑龙江省方正县双龙水库和双凤水库两个水体的雌核发育银鲫(Car-assius auratus gibelio)和二倍体普通鲫(Carassius auratus(L))的群体遗传多样性进行比较分析。结果显示:平均每个多态性位点获得银鲫10.39个有效等位基因,普通鲫11.82个有效等位基因;双龙水库三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度分别为0.6035和0.6300,双凤水库中的三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度为0.5311和0.5885;相似性与遗传距离分析结果显示:相似性最大的是双凤水体内的银鲫和普通鲫(0.8127),远大于两个水体间的银鲫群体间的相似性。结果表明,银鲫与普通鲫存在着明显的遗传物质交流,较高的遗传相似性不仅与传统的银鲫起源于普通鲫的观点一致,也暗示银鲫与普通鲫存在经常性地遗传物质交流。

饲料中添加叶黄素对金鱼体色的影响

为考察饲料中添加叶黄素对金鱼体色的影响，在基础饲料中分别添加0、50、100、150、200和300mg·kg^-1叶黄素，饲喂平均体质量（7．8±0．3）g文种金鱼10周，用色差计（WSC-S）对金鱼体表三刺激值进行测定．结果表明：饲料中添加叶黄素对金鱼增质量率无显著影响，但添加300mg·kg^-1叶黄素显著增大了饲料系数（P〈0．05）；饲料中添加叶黄素0～150mg·kg^-1时，金鱼体表＋a^＊值（红色）随叶黄素添加量的增加而增加，L^＊值（亮度）随叶黄素添加量的增加而降低；当叶黄素添加量大于150mg·kg^-1时，＋a^＊和L^＊值基本保持稳定；与对照组相比，叶黄素添加量为200和300mg·kg^-1时，＋b^＊值（黄色）显著增加（P〈0．05）；随叶黄素添加量从0增加到150mg·kg^-1，金鱼鳞片、皮肤、肌肉和尾鳍中的叶黄素含量也增加，当添加量大于150mg·kg^-1时，上述各部位叶黄素含量达到最高并基本稳定；添加100、150、200和300mg．kg。叶黄素均可显著提高金鱼血清酪氨酸酶活力（P〈0．05）．上述结果表明，在金鱼饲料中添加叶黄素150mg·kg^-1可有效改善金鱼体色．

盐酸沙拉沙星在鲫体内的残留及消除规律研究

采用高效液相色谱法测定鲫组织中沙拉沙星并初步研究了盐酸沙拉沙星在鲫组织中的残留及消除规律。在21±2℃下,以20mg/kg的剂量单次口灌给药,取血浆和肌肉、皮肤、肝胰脏、肾脏、卵巢5种组织,各样品中加入甲磺酸达氟沙星作内标,用二氯甲烷提取组织中的药物,正己烷去脂,反相高效液相色谱法测定其中盐酸沙拉沙星的浓度。此方法平均回收率均大于82.97%,日间变异系数小于8.41%,最低检测限可达0.0125μg/g。研究结果表明盐酸沙拉沙星在血浆和5种组织中消除速率快慢不一,肾脏为盐酸沙拉沙星残留的靶组织。若规定可食用组织中的盐酸沙拉沙星在最大残留限量为30μg/kg,由休药期(WDT)公式可得出盐酸沙拉沙星在鲫体内的WDT为14d。

金鱼hAT家族转座子Tgf2的克隆及其结构

hAT家族转座子以果蝇hobo、玉米Ac和金鱼草(Ceratophyllum demersum L.)Tam3为代表,以"剪切-粘帖"方式进行DNA转座。1996年,日本学者首次在白化青鳉(Oryzias latipes)中发现具有天然活性的脊椎动物hAT家族转座子,即青鳉Tol2转座子,该转座子已在模式生物斑马鱼转基因、基因和启动子捕获方面进行了广泛应用。文章根据玉米Ac与青鳉Tol2转座子序列保守区设计一对引物,在19种不同鱼类物种或品系中进行PCR筛选,最后发现此类hAT家族转座子在我国不同品系金鱼中存在,命名为金鱼Tgf2转座子。金鱼Tgf2转座子全长4720bp,由4个阅读框组成,与青鳉Tol2转座子的相似度为97%。金鱼Tgf2与青鳉Tol2转座子在末端倒位重复和亚末端重复上存在一定差异,此外,金鱼Tgf2转座子的中间反向重复序列(1453bp到2091bp)可形成一种"十"字结构,明显有别于青鳉Tol2转座子形成的茎环结构,这些区域与转座活性密切相关。文章预示金鱼Tgf2转座子可能具有更高的天然转座活性,构建高效金鱼Tgf2转基因元件可供鱼类转基因和基因捕获研究。

网湖鲫鱼的生长与资源评估

根据1984—1986年在湖北省网湖进行渔业资源调查的资料,应用Von Bertalanffy生长方程描述该湖鲫鱼的生长模式,同时按照Joneo体长股分析模型和Thompson-Bell体长预测模型分别推算鲫鱼资源量和不同捕捞强度下资源量和渔获量的理论值,并求得最大持续渔获量。据此,对该湖鲫鱼资源的合理开发和利用进行了分析和讨论,并提出渔业对策。

普通鲫鱼的RAPD标记及其遗传多样性

采用了 387个引物对普通鲫鱼进行了 RAPD( random am plified polym orphic DNA)分析 ,筛选出了 31个重复性好、可用于普通鲫鱼 RAPD标记的引物 .另用 8个引物对普通鲫鱼 ( 2 0尾 )进行了遗传多样性分析 :这 8个引物共检出 45个位点 ,其中多态性位点数 2 4个 ,占总位点数的 5 3.33% ;据个体间共有带数和 Nei′s遗传相似率计算公式 ,计算出普通鲫鱼平均遗传相似率为 88.6 8% .上述两项指标的初步分析表明 。

用团头鲂精子诱导金鱼雌核发育研究

用紫外灭活的团头鲂(Megalobrama amblycephala)精子激活金鱼(Carassius auratus Goldfish)卵子,用0—4℃冷水冷休克处理卵子使其染色体加倍,得到成活的雌核发育金鱼。使用与金鱼不同亚科的团头鲂精子作为激活源能极大提高雌核发育后代的鉴定效率,只需依据外形特征、染色体数目和性腺发育程度,就能容易地将雌核发育金鱼和与团头鲂杂交后代区分开。雌核发育金鱼有两种体色不同的后代,但都为双尾,体形似金鱼,染色体数目为2n=100,全雌,性腺发育正常;而杂交后代为单尾,体形似鲫鱼,染色体数目为3n=124,性腺发育滞后。本实验为证明金鱼的性别决定方式为XX/XY型提供了细胞遗传学证据。得到两种体色皆不同于母本体色的后代,可能是基因座位纯化导致后代性状分化,也可能是异精效应导致。

甲磺酸达氟沙星在鲫体内药物动力学及残留研究

【目的】研究甲磺酸达氟沙星(Danofloxacinmesylate,DFM)在鲫体内的药物动力学和残留消除规律。【方法】在试验水温20℃时,鲫以10mg·kg-1b.w的剂量单次经口灌服甲磺酸达氟沙星后,用液-液提取、反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定血浆和组织中DFM的浓度。盐酸氧氟沙星做为内标。房室模型分析表明,其药物时间数据符合有吸收二室模型,吸收、分布迅速,但消除缓慢,半衰期(T1/2Ka、T1/2α、T1/2β)分别为0.63、4.96、47.79h,最大血药浓度(Cmax)为3.23μg·ml-1,达峰时间(TP)为2.73h,药时曲线下面积(AUC)为154μg·h·ml-1。非房室模型分析表明,平均滞留时间(MeanResidenceTime,MRT)为58.56h。【结果】组织中药物浓度在测定时间里均显著高于血浆(P<s0.05),消除快慢依次为肾脏、肝胰脏、血浆、肌肉和皮肤,其消除半衰期分别为33、44、48、51、177h。与其它组织相比皮肤消除最慢,建议其作为DFM在鲫体内的残留靶组织。在20℃时,皮肤以100μg·kg-1为最高残留限量(maximumresiduelimit,MRL)建议休药期不低于23d。

jnk3基因在金鱼和斑马鱼不同发育时期胚胎与成体不同组织中的分化表达

JNKs是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族重要成员,参与应激反应和动物体轴的构建。为了进一步了解JNK家族在动物发育中的功能,首次分离和克隆了金鱼jnk3基因,研究了jnk3在金鱼和斑马鱼组织特异性和胚胎发育特异性表达状况。金鱼jnk3基因cDNA总长1 794 bp,其中阅读框1 293 bp,编码430个氨基酸。对jnk3基因序列及其推导的氨基酸序列进行同源性分析,结果显示,jnk3基因在脊椎动物较为保守,金鱼jnk3基因核苷酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为94.1%和80.7%,金鱼jnk3基因氨基酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为99.7%和93.4%。jnk3基因在鱼类成体中的表达存在着显著的组织差异,在金鱼和斑马鱼脑和精巢组织的表达具专一性,此外在斑马鱼心脏中也检测到jnk3的表达。RT-PCR检测结果显示,在鱼类胚胎发育中,神经胚期开始检测到jnk3基因mRNA表达,从神经胚到心跳期胚胎,jnk3基因表达水平逐渐增高,此后直至出膜一直保持较高的表达水平。研究表明,jnk3基因可能在鱼类后期的胚胎发育和成体脑、精巢与心脏发育中具有重要作用。

金鱼不同组织器官及胚胎发育不同时期蛋白水解酶的种类和活性变化

采用复性电泳方法研究了金鱼组织器官蛋白水解酶及个体发生过程中蛋白水解酶的种类和活性变化，主要结果表明：（1）金鱼各组织器官蛋白水解酶种类差异不大，大多数组织器官都具有113、69、20、16kD四条带，但不同组织器官常具有其特异性蛋白水解酶；肠道蛋白水解酶种类最多、活性最强。（2）蛋白水解酶的活性受pH值影响和制约，大多数组织器官蛋白水解酶活性最适pH值为8．5。（3）在金鱼胚胎发有早期（从卵裂到心跳期）多数种类蛋白水解酶不表达，从孵化期开始表达；幼鱼蛋白水解酶种类相似于成鱼组织器官蛋白水解酶。（4）金鱼组织器官蛋白水解酶发生于胚胎发育后期（孵化期），多数蛋白水解酶在胚后发育阶段（仔鱼、幼鱼）逐渐出现。

野生鲫鱼和五个金鱼代表品种的肌肉蛋白电泳分析

本工作用琼脂糖等电聚焦（Ａｇａｒｏｓｅ－ＩＥＦ）、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）以及将两者结合起来的双向电泳技术，对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）和５个金鱼品种（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓｖａｒ．）的亲缘关系进行了种内分化的比较研究。其结果是：（１）鲫鱼和金鱼各品种的肌肉蛋白的大量组分是相似的，验证了金鱼由野生鲫鱼演化而来的推断；（２）在鲫鱼演化到金鱼的过程中，出现了一些新的蛋白质成分，但也有些蛋白组分消失了，并且有从野生鲫鱼经过金鲫鱼这个中间环节演化到各品种金鱼的趋势；（３）从３种电泳结果的聚类分析和电泳图谱上可以看出，野生鲫鱼首先演化为金鲫，再演化为草金鱼，通过金鲫、草金鱼两个环节后发展为文种鱼，最后演化成龙种鱼（如红龙睛）和蛋种鱼（如红头蛋鱼）两个关系很近的类型。

草金鱼总色素稳定性研究(I)——日光、空气、温度和金属离子对草金鱼总色素稳定性的影响

草金鱼总色素光谱吸收峰为400～600nm,是类胡萝卜素色素。在日光、高温和某些金属离子作用下,破坏程度严重;在避光、低温和相关离子作用条件下,色素受到保护或具有增色作用。研究结果提示:在提取、保存该色素以及配制增色饵料时,要特别注意避免有关不良因素的影响,确保试验结论的正确和增色效果的良好。

非离子态氨对金鱼鱼种的急性毒性试验

采用常规生物急性毒性试验方法,研究了非离子态氨对体长（5.0±0.61）cm,质量为（12.17±1.57）g的金鱼鱼种的急性毒性试验。结果表明,非离子态氨对金鱼鱼种24、48 h的半致死质量浓度（LC50）及95%置信区间分别为0.454（0.393~0.515）mg/L和0.267（0.213~0.322）mg/L,安全质量浓度为0.028 mg/L。非离子氨对金鱼鱼种具有较低的耐受力。

6种水产药物对金鱼苗的急性毒性试验

常温静水条件下,用水生生物毒性试验方法研究了氯氰菊酯、高锰酸钾、强氯精、戊二醛、二氧化氯和亚甲基蓝对金鱼稚鱼(体长1.4～1.6cm)的急性毒性。结果表明,6种水产药物对金鱼苗的24h半致死质量浓度(LC50)分别为0.009 8mg/L、2.4mg/L、2.3mg/L、3.5mg/L、5.8mg/L和26.8 mg/L,对金鱼苗的安全质量浓度分别为0.002 6 mg/L、0.26 mg/L、0.53 mg/L、0.88mg/L、1.4mg/L和2.36mg/L。结果分析显示,高锰酸钾不宜在金鱼苗种培育中使用,氯氰菊酯和强氯精应谨慎使用,而二氧化氯、亚甲基蓝和戊二醛可以安全使用。

野生鲫和五个金鱼品种的判别分析和聚类分析

对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）和五个金鱼品种（Ｃａｒａｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．）的亲缘关系进行了比较研究。（１）两组判别分析表明，以１７个形态变异性状的指标衡量野生鲫鱼和金鱼以及金鱼各品种之间的差异，说明金鱼的种下分化是明显的（Ｆ〉〉Ｆ０．０１）。（２）对６个品种（包括鲫鱼）各２０尾鱼（计１２０个个体）进行１７个指标的聚类分析，结果大部分个体（占各品种的５０￣１００％）

稀土壳聚糖螯合盐对鲫肠道发育的影响

通过在鲫日粮中添加稀土壳聚糖螯合盐(rareearth-chitosan chelate,RECC),研究其对鲫(Carassius auratus L.)肠道发育的影响。试验分为1个空白对照组和3个试验组,日粮中稀土壳聚糖螯合盐的添加量分别为0.00%、0.08%、0.16%和0.24%。每组设3个重复,每个重复放养30尾鲫。试验鲫初始平均体重为(5.04±0.08)g。每日投喂2次(9:00,16:00),每次投喂量为每池鱼总重的0.5%～1.0%(投喂量据具体情况调节),养殖期60d。试验期间水温(26.7±2.5)℃,自然光照,水体pH为7.1～7.8,溶氧>4mg/L。研究结果表明:添加RECC能改善鲫肠道形态结构。添加RECC后肠道粘膜褶变细长,形状较均一,数目增多。与空白对照组相比,0.08%RECC组粘膜褶数目显著增加(P<0.05)、粘膜褶宽度显著降低(P<0.05)、杯状细胞数目显著增多(P<0.05);0.16%RECC组杯状细胞数目极显著增多(P<0.01)。超显微观察发现,空白对照组肠道微绒毛分块,分布较稀疏且不均匀;而RECC添加组微绒毛较空白对照组明显密集,且分布均匀。