一起输入性小鹅瘟疫情的紧急流行病学调查

2023年9月30日,云南省腾冲市某肉鹅养殖场购入的雏鹅发生疫情,表现精神萎靡、食欲不振、腹泻、流鼻涕,并大量死亡。为查明病因,开展了紧急流行病学调查。结果显示:雏鹅累计发病2 567只、死亡2 450只,袭击率为98.7%(2 567/2 600),病死率为95.4%(2 450/2 567)。综合流行病学调查结果、雏鹅临床症状、剖检变化和实验室检测结果,确诊本起疫情为鹅细小病毒感染引起的小鹅瘟。不规范引种、长途运输应激和育雏不当等是引起疫情的主要原因。本起疫情提示,养殖场应规范引种,加强饲养管理,相关部门需加大检疫监管力度,尽可能避免输入性疫情发生。

GPS在鼠疫监测中应用的研究

目的将“3S”技术引入到鼠疫防治工作。方法建立GPS工作站,利用GPS设备采集带有地理属性的鼠疫专业数据。结果获取的鼠疫监测、疫情信息可以灵活的生成各种需要的统计图、表和分析结果及截取相关的专题地图。结论通过“3S”技术与鼠疫专业数据有机的结合,提高鼠疫防治工作的科学化、信息化水平和管理水平。

利用小鹅瘟病毒增殖制备GPV沉淀抗原

将小鹅瘟病毒 (GPV)通过家禽胚胎传代增殖 ,取感染胚尿囊液制备了GPV沉淀抗原。其抗原在琼脂扩散反应和对流免疫电泳的试验中能够与小鹅瘟阳性血清出现沉淀线 ,而且与小鹅瘟标准抗原的沉淀线相吻合。所形成的沉淀反应能够被小鹅瘟阳性血清特异性地抑制 ,与其它常见的禽病血清不发生交叉反应。

小鹅瘟、鸭病毒性肝炎卵黄抗体高免蛋免疫程序的研究

试验旨在研究小鹅瘟、鸭病毒性肝炎(1型+3型)二联灭活疫苗免疫商品蛋鸡的效果,测定蛋黄中小鹅瘟琼扩抗体和鸭肝炎中和抗体,筛选最佳高免蛋制备免疫程序。试验随机将2500只产蛋鸡分成5组,每组500只鸡。A组~D组进行3次免疫(A组、B组首免和第2次免疫间隔14 d,C组、D组首免和第2次免疫间隔21 d,各组第2次免疫和第3次免疫间隔21 d),首次免疫剂量均为1.0 mL/只,第3次免疫均剂量为1.5 mL/只;A组、C组第2次免疫剂量为1.0 mL/只,B组、D组第2次免疫剂量为1.5 mL/只。E组不接种作为非免疫对照组。结果显示,第3次免疫后21 d,各组小鹅瘟抗体效价达1∶200,鸭肝炎中和抗体效价达1∶1024,均达到高免蛋使用标准。研究表明,采用首次免疫剂量1.0 mL/只,接种后21 d进行第2次免疫(剂量为1.5 mL/只),第2次免疫后21 d进行第3次免疫(剂量为1.5 mL/只)的免疫程序可获得较高的小鹅瘟和鸭肝炎抗体。

鹅细小病毒研究进展

小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种急性、亚急性烈性传染病,是目前危害养鹅业的重要传染病之一。近年来关于鹅细小病毒的研究又有了新的发展和新的观点,作者从鹅细小病毒分子生物学、检测方法、致病机理和抗原位点的定位等方面进行了阐述。

鹅常见病毒性疾病的快速诊断技术的建立及其应用

根据 3种病原基因组相关基因的序列特征设计了三对 PCR引物 ,用于鹅常见的病毒性疾病包括鹅副粘病毒病、鸭瘟、小鹅瘟的鉴别诊断 .三对引物均能从各自的参考毒株扩增出与预计片段大小一致的产物 ,而对其它的病原的扩增结果均为阴性 ;应用建立的 PCR方法对来自广西不同地方的 3 8份临床可疑病例分别进行诊断 ,DPV、APMV-1和 GPV的检测阳性率分别为 66.6% ( 1 0 /1 5 )、5 5 .6% ( 1 5 /2 7)和 75 % ( 6/8) ,二重及三重混合感染的占 42 .8% ( 9/2 1 ) .研究结果表明建立的 PCR方法具有快速、敏感、特异的特点 。

小鹅瘟的诊断及其病理组织学观察

对3例疑似小鹅瘟感染病禽进行临床观察和病理解剖,结果均发现小肠中后段膨大,小肠末端形成特征性的"肠栓"。针对鹅细小病毒VP3基因设计1对引物,对3例病死鹅的肝脏组织进行PCR检测,结果均扩增出与预想结果一致的331 bp鹅细小病毒特异片段;取病死禽的十二指肠、回肠、心、肝、脾、肾等组织制作石蜡切片,HE染色,进行病理组织学观察,结果显示其十二指肠肠绒毛脱落,回肠粘膜大片坏死脱落并与纤维素性渗出物混杂形成栓子,其他部位病变不明显。皖西白鹅还表现肝组织淤血、肝细胞脂肪变性,肾脏肾上皮细胞变性、坏死,淋巴细胞浸润。

应用胶乳凝集技术诊断番鸭小鹅瘟病

为建立番鸭源小鹅瘟病毒(GPV)快速检测方法,本研究采用GPV单克隆抗体(MAb)标记聚苯乙烯胶乳,建立了检测GPV抗原的胶乳凝集试验(LPA)。结果显示:LPA具有较好的敏感性,可以检出GPV最低毒价为1 000 TCI50/10μL;特异性强,仅与GPV产生特异性凝集反应,与其他相关鸭源病毒均无交叉反应;重复性和稳定性好,在4℃保存期达11个月;对人工感染病例的LPA检测结果与PCR符合率为93.3%;对临床18份疑似GPV病例进行检测,LPA和PCR符合率为94.5%。表明LPA具有简便、快速、特异、准确等优点,适用于基层快速诊断番鸭小鹅瘟病。

小鹅瘟病毒荧光抗体的制备与应用

将小鹅瘟病毒 (GPV )分离毒xw株接种健康兔获得兔抗GPV超免疫血清 ,由此制备兔抗GPV荧光抗体。采用直接荧光抗体试验对人工感染雏鹅、鹅胚及自然病例进行了检测。结果表明 ,该方法可检出患病组织中的病毒抗原 ,且肠和肝的含毒量高于尿囊细胞。

小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较

【目的】比较小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著(P<0.01)高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63天时极显著(P<0.01)高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P<0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。

小鹅瘟的PCR诊断及病理观察

取长春某鹅场2份疑似小鹅瘟感染病死鹅的肝脏组织进行PCR检测,结果均扩增出与预想结果一致的375 bp特异片段。取病死鹅肺脏、脾脏、肠道等组织,用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,进行病理组织学观察,结果显示,肠道呈纤维素性-坏死性肠炎病变,肺脏、肝脏、肾脏、脑等器官实质细胞均出现不同程度的损伤。

小鹅瘟的研究——弱毒在雏鹅和成年鹅体内分布和排泄

本文首次报道了将小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）弱毒株注射鹅（成年鹅和雏鹅）后，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测了不同时间病毒在鹅体各组织器官的分布和由粪便排出的情况，以及同群饲养但不注射ＧＰＶ的雏鹅和成年鹅感染ＧＰＶ弱毒的情况。实验结果表明，ＧＰＶ弱毒经肌肉注射到１日龄雏鹅体内后８小时即可在心血中检测到ＧＰＶ的存在，ＧＰＶ弱毒经肌肉注射到成年鹅体内后８小时即可在心血中检测ＧＰＶ的存在；弱毒注射到雏鹅体内后用ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测到ＧＰＶ的时间顺序是：心、肝、脾、肺、肾，而胸肌和脑未检测到ＧＰＶ弱毒的存在，而同居感染雏鹅各个组织、器官未检测ＧＰＶ的存在；弱毒注射到成年鹅体内后检测到ＧＰＶ的时间顺序均为：心、肝、肾、脾、肺，同样胸肌和脑均未检测到ＧＰＶ的存在，而同居成年鹅的各个组织、器官未检测到ＧＰＶ的存在。为临床上更好地应用ＧＰ弱毒疫苗预防ＧＰ提供了理论依据。

小鹅瘟血清学诊断方法研究进展

主要从血清学和分子生物学两方面对小鹅瘟病的诊断研究进展作了综述

抗小鹅瘟异源高免血清的研制和应用

用小鹅瘟病毒弱毒抗原加福氏完全佐剂后，分二次皮内多点注射免疫山羊、奶山羊，皮下注射免疫黄牛，结合二次静脉注射免疫小鹅瘟强毒，用琼扩进行效价测定，可获得琼扩抗体平均效价为１：１６—１：６４的抗小鹅瘟高免血清。将制备的三种动物的高免血清混合稀释至琼扩效价１：４、１：８，分别用于预防免疫１－１０日龄的雏鹅，获得保护率为９０％和９６．３％；用于治疗发病鹅群，治愈率达８４％和９２％。牛、羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低。

鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立

为建立检测鹅细小病毒(GPV)的间接ELISA方法,本研究表达了GPV重组NS2蛋白,并以Ni-NTA亲和层析柱纯化的蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA检测方法,并进行抗体消长规律的检测。用该方法检测阴性血清样本30份,确定检测临界值为0.281。与琼脂扩散试验结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为86.67%。与抗鹅H5、H7、H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗鹅副粘病毒阳性血清无交叉反应。在此基础上组装检测试剂盒,试剂盒批内变异系数为4.2%,批间变异系数为8.3%,包被抗原的酶标板在4℃可保存6个月。该方法对人工感染GPV血清检测结果表明,接种病毒后第8周,NS2蛋白的抗体水平达到峰值。本研究为GPV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。

雏鹅新型病毒性肠炎的初步分离和鉴定

从南京某地具典型雏鹅新型病毒性肠炎病变的死亡雏鹅体内分离到一株病毒。用12日龄鹅胚增殖病毒,通过电镜观察到腺病毒样粒子,直径70-120 nm;经与小鹅瘟阳性血清进行中和作用后,接种鹅胚后仍出现死亡。人工感染4日龄健康易感雏鹅,引起发病和死亡,并具有典型雏鹅新型病毒性肠炎的临床症状和剖检特征。用此株病毒感染的鹅胚尿囊液制备的沉淀抗原,经琼脂扩散试验,不能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性沉淀反应。

小鹅瘟病原学与检测方法的研究

从患病雏鹅的病料样本中分离鉴定出一株小鹅瘟野生强毒。采用鹅胚增殖病毒,以琼脂扩散试验从感染鹅胚尿囊液中检出小鹅瘟病毒抗原;以感染鹅胚尿囊液人工接种5日龄健康雏鹅,复制出与自然感染病例相类似的病变;通过电镜观察到典型的小鹅瘟病毒粒子。该分离毒株核酸分子量为5000bp。制备的小鹅瘟沉淀抗原可以检测患病雏鹅血清中的抗体,监测治疗血清的滴度和疫苗接种的效果。标记的小鹅瘟荧光抗体能直接检测患病雏鹅组织中的病毒抗原。针对编码主要结构蛋白VP3的基因设计合成一对引物,扩增出与预期长度相符的特异性DNA片段。

雏鹅新型病毒性肠炎的研究进展

对雏鹅新型病毒性肠炎的临床症状、危害、病原学、疾病的诊断和防制等方面的最新进展进行了综述,重点介绍了该病的特征和病原的生物学特性,并提出了一些有待进一步研究的问题。

雏鹅新型病毒性肠炎病原快速检测技术的建立及应用

根据小鹅瘟病毒(GPV)和鹅源禽腺病毒(FAV)基因组序列特征分别设计了各自的PCR引物,经对反应条件的优化建立了能同时检测两种病毒的二重PCR方法.该法能从雏鹅新型病毒性肠炎和小鹅瘟疫苗株以及分离的鹅源腺病毒蚀斑克隆株分别扩增出相应的特异性产物,而对其它常见鹅病的病原及正常鹅胚肝组织的扩增结果均为阴性;对来自广西不同地方的36份临床病例样品的检测发现,其中具有雏鹅新型病毒性肠炎典型病变的22份样品均可检出GPV和FAV两种病毒,其它的有4份只检出GPV,3份只检出FAV;12份健康雏鹅肝组织中仅有一份检测到GPV;健康成鹅泄殖腔中GPV和FAV的检出率分别达44.29%、37.14%二者都有的占1.43%.结果表明,雏鹅新型病毒性肠炎的病原可能包括GPV和FAV两种病毒;建立的PCR诊断技术具有快速、敏感、特异的特点,可用于该病征的临床快速鉴别诊断以及流行病学的调查研究.

种鹅免疫小鹅瘟疫苗抗体消长规律的研究

通过应用小鹅瘟油乳剂疫苗和成鹅弱毒疫苗联合免疫种鹅(设为试验A组)并采用成鹅弱毒疫苗进行二次免疫种鹅的方法(设为试验B组)建立了种鹅小鹅瘟抗体消长规律的监测试验。试验结果表明:B组的免疫抗体效价整体高于A组免疫抗体效价,并且通过对后代雏鹅的攻毒试验表明B组保护力强于A组。