噬菌体表面展示技术筛选抗血小板GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体

目的 用噬菌体表面展示技术 ,直接从抗血小板表面蛋白全套单链抗体噬菌体展示文库中筛选能与糖蛋白 (GP)Ⅱb/Ⅲa复合物高亲合力结合的单链抗体克隆 ,为开发有自主知识产权的抗栓药物奠定基础。方法 从活化血小板免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA ,反转录成cDNA后 ,用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因 ,经重叠延伸反应 ,装配成单链抗体 (ScFv)基因 ,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中 ,构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛选后 ,ELISA法鉴定抗GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体。结果 经过 4轮“吸附———竞争性洗脱———扩增”的富集过程 ,phage -ELISA得到一个ELISA活性较高的能与GPⅡb/Ⅲa结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗血小板表面蛋白单链抗体噬菌体展示文库 。

血小板糖蛋白受体Ⅱb～Ⅲa复合体基因多态性与冠心病的相关性

目的探索血小板糖蛋白（Gp）Ⅱb～Ⅲa复合体的基因多态性在浙江地区汉族人群中的分布及其与冠心病发生、发展的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法检测125例冠心病患者（冠心病组）和105例冠状动脉造影阴性者（对照组）GpⅡb～Ⅲa复合体基因的多态性，比较其差异并分析其相关性。结果浙江地区汉族人群中存在GPⅡb基因多态性；冠心病组ab、bb基因型的分布均显著多于对照组（P〈0.01）；b等位基因频率显著高于对照组（P〈0.01）；冠心病组病变支数越多b等位基因频率越高（P〈0．05）；ab和bb基因型在心肌梗死患者中的分布显著高于非心肌梗死患者（P〈0．01）。GpⅡb基因各基因型在冠心病危险因子中的分布并无明显差异（P〉0．05）。结论GPⅡb基因多态性可能与冠心病的病变支数及临床类型有关，b等位基因可能是冠心病发生、发展的易感基因，

冠心病患者阿司匹林抵抗与识别活化血小板GPⅡ bⅢ/a复合物单克隆抗体(PAC-1)的相关性研究

目的探讨冠心病患者阿司匹林抵抗现象(AR)与PAC-1的相关性。方法经冠脉造影确诊为冠心病患者80例,服用阿司匹林100 mg/d≥7d,以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)为诱导剂测定血小板聚集率,以ADP诱导的血小板聚集率≥70%定义为AR,<70%为阿司匹林敏感(aspirin sensitive,AS)。同时测定患者血小板PAC-1的表达阳性率。结果AR的发生率为20%,两组患者服药后血小板PAC-1表达有显著性差异,AR组患者服药后PAC-1水平显著高于AS组(P<0.05)。结论冠心病患者AR的发生率为20%,PAC-1可作为检测AR的有效指标。

原发免疫性血小板减少症GPⅡb/Ⅲa抗体检测的临床意义

目的:检测原发免疫性血小板减少症(ITP)患者GPIIb/IIIa抗体水平并探讨其临床意义。方法:应用流式微球技术(CBA)检测血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体,记录各个样本的平均荧光强度(MFI),计算样本的MFI与正常对照MFI均值的比率。结果:ITP组、非免疫性血小板减少组和正常对照组的MFI比率分别为(2.61±1.09)、(1.32±0.59)和(0.95±0.40),非参数检验得ITP组MFI比率高于非免疫性血小板减少组和正常对照组(P<0.01),而后两者MFI比率差异无统计学意义(P>0.05)。经统计学处理,CBA对ITP诊断的敏感性为71.88%,特异性为84.62%,由ROC曲线得CBA区分ITP患者与非免疫性血小板减少患者的能力为0.848。结论:CBA检测血小板GPIIb/IIIa抗体敏感性、特异性均较高,且操作简便,重复性好,对ITP的辅助诊断具有一定的实用价值。

急诊介入治疗前后AMI患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达研究

目的观察急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)患者急诊经皮冠状动脉介入治疗(简称介入治疗)前后血小板活化指标P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达的变化,探讨介入治疗对AMI患者血小板活化的影响。方法选取疑似冠心病且冠脉造影正常的21例患者为对照组,行急诊介入治疗的AMI患者24例(AMI组),应用流式细胞技术检测对照组及AMI组患者行介入治疗前后的P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率。结果与对照组比较,AMI组患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);介入治疗后3dAMI组患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率较术前下降,但与对照组比较仍有较高水平表达,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论AMI患者急诊介入治疗前后体内血小板均处于高度活化状态,AMI患者术后抗血小板聚集治疗极其重要。

GP Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征经皮介入治疗中的应用

急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）包括急性心肌梗死和不稳定心绞痛，经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervetion，PCI）是治疗ACS的最有效、最常用的方法之一。有报道称，早期PCI可明显改善患者6个月及12个月的预后，但ACS发病过程及行PCI的术中、术后都有冠状动脉内皮的破坏，容易发生附壁血栓或血栓，以至导致冠状动脉血管栓塞以至心肌梗死。

脑梗死急性期患者血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素的表达

目的观察血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素在脑梗死急性期患者体内的表达。方法对比脑梗死急性期患者(脑梗组)及健康对照者(对照组)血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素的表达水平。观察脑梗组中高危组、高血压组、糖尿病组、高血脂组和无危组的血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素表达水平。结果脑梗组血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物及血小板膜P-选择素表达高于对照组(P<0.01);高危组、高血压组、糖尿病组、高血脂组的血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素均高于无危组(P<0.05)。结论血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素可作为表明血小板活化的敏感指标。高血压、糖尿病、高血脂等危险因素可促进血小板活化。

冠脉内应用血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂在急诊PCI中的疗效评价

目的:观察在急诊PCI中冠脉内直接应用替罗非班(Tirophiban)的疗效。方法:将急诊PCI的患者随机分为两组,单纯血栓抽吸术(PT)组和PT+Tirophiban组,比较两组支架术后TIMI血流恢复情况。结果:PT+Tirophiban组比单纯PT组TIMI血流恢复好,P<0.05有显著性。结论:在急诊PCI中,冠脉内直接应用Tirophiban能更好地改善支架术后慢血流、无复流的情况。

红花注射液对急性冠状动脉综合征患者血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体影响的随机对照研究

背景:血小板表面糖蛋白(glycoprotein,GP)Ⅱb/Ⅲa受体是评价血小板活化的重要指标,具有活血化瘀作用的中成药红花注射液对该指标的影响对于探讨其抗血小板凝集作用机制及疗效有重要意义。目的:观察红花注射液对急性冠状动脉综合征患者血小板表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体的影响,探讨红花注射液在抗血小板凝集治疗中的作用及其机制。设计、场所、对象和干预措施:选择2008年9月至2009年5月在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院心血管内科住院的急性冠状动脉综合征患者64例,用随机数字表法分为红花注射液治疗组(32例,常规西药加红花注射液)与对照组(32例,常规西药),两组疗程均为14 d。主要结局指标:采用免疫荧光标记法和流式细胞仪检测治疗前后血小板活化标志物GPⅡb/Ⅲa复合物(CD41)、P选择素(CD62p)和溶酶体膜糖蛋白(CD63)的表达,同时观察红花注射液对急性冠状动脉综合征患者心绞痛症状及近期预后的影响。结果:对照组中有4例患者因提前出院而退出试验。对照组和治疗组的CD41比例、CD41抗体荧光量治疗后比治疗前均有所降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗后治疗组CD41比例、CD41抗体荧光量低于对照组(P<0.05);两组CD62p比例和CD63比例治疗后均呈现出一定的下降趋势,但与治疗前比较差异无统计学意义。两组患者在住院14 d中均未发生死亡、心肌梗死、脑卒中事件,红花注射液治疗组患者心绞痛症状缓解和心电图表现均明显好于对照组。结论:红花注射液具有抑制血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体表达的作用,对急性冠状动脉综合征患者心绞痛具有很好的缓解作用,可增强常规西药抗血小板活化的作用。

血小板膜GPⅡb/Ⅲa活性与缺血性心脑血管疾病

目的:探讨血小板膜GPⅡb/Ⅲa与心脑血管病之间的关系以及GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂在心脑血管病治疗中的地位。资料来源:应用计算机检索Medline1993-01/2005-12关于血小板膜GPⅡb/Ⅲa与心脑血管病关系的文章。检索词“platelet,GPⅡb/Ⅲa,ischemicheartdisease,ischmicstroke”,并限定文章的语种类为English。同时利用计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2005-12的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“血小板,血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物,冠心病,缺血性脑卒中”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①血小板膜GPⅡb/Ⅲa活性与血小板激活机制。②血小板膜GPⅡb/Ⅲa活性与心脑血管病相关性。③血小板膜GPⅡb/Ⅲa拮抗剂的作用特点。排除标准:排除重复性研究。资料提炼:共收集到符合上述要求的文献41篇,排除28篇重复性研究。13篇符合纳入标准。其中7篇关于血小板膜GPⅡb/Ⅲa活性与血小板激活机制及与心脑血管病相关性研究,6篇关于血小板膜GPⅡb/Ⅲa拮抗剂作用特点。资料综合:血小板活化在缺血性心、脑血管病的发生、发展中起重要作用,而血小板膜GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原等黏附蛋白结合,是多种因素引起血小板活化的最终共同通路,因此,血小板GPⅡb/Ⅲa与缺血性心脑血管病密切相关。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂是一类新的非常有前途的抗血小板药。结论:血小板GPⅡb/Ⅲa与缺血性心脑血管病密切相关。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂是一类新的非常有前途的抗血小板药。

GpⅡb/Ⅲa基因多态性与冠心病关系的研究

目的探讨血小板膜糖蛋白(Gp)Ⅱb/Ⅲa基因多态性与冠心病的关系。方法选择冠心病患者86例(A组)和健康体检者80例(B组),运用聚合酶链—序列特异性引物技术进行GpⅡb人类血小板抗原3(HPA-3)及GpⅢa HPA-1多态性检测。结果A组和B组中GpⅡb HPA-3 aa、ab、bb基因型分布有统计学差异,A组ab、bb基因型的分布较B组高,A组b等位基因频率高于B组。GpⅡb HPA-3 ab和bb基因型在心肌梗死组中的分布、b等位基因频率高于非心肌梗死组。结论GpⅡb HPA-3b等位基因可能是冠心病的遗传易患因子,GpⅡb HPA-3可能为心肌梗死发生的遗传易感性标志,GpⅢa HPA-1基因可能与冠心病发生无关联。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠脉综合征应用研究的进展

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂(GPI)通过占据GP Ⅱb/Ⅲa受体的结合位点,阻碍纤维蛋白原与其结合,进而抑制血小板聚集,是迄今最强、最具应用价值的抗血小板药物。本文综述其在ACS应用的安全性和有效性研究进展。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征中的应用

冠状动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,在其漫长的病程中,常会由于斑块破裂或糜烂导致局部血栓形成,从而导致冠状动脉的完全或部分阻塞,临床上表现为急性冠状动脉综合征。近年来,随着对动脉粥样硬化性疾病认识的进展,抗血小板治疗已成为冠心病治疗中的重要环节。

Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠脉综合征患者介入治疗中疗效及安全性的探讨

目的:探讨国产血小板糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂替罗非班(欣维宁)在非ST段抬高急性冠状动脉综合征(ACS)患者冠状动脉介入治疗(PCI)中应用的安全性和近期疗效。方法:247例行PCI的非ST段抬高ACS患者随机分成两组:冠状动脉内置入支架加用国产替罗非班组(n=125),冠状动脉内置入支架加用低分子肝素组(n=122),替罗非班组于PCI术前给予常规量低分子肝素,术后在半量低分子肝素基础上给予替罗非班0.1μg/(kg.min)共24 h,对照组于PCI术前、术后只给予常规量低分子肝素。观察两组患者用药后TIMI血流分级、血小板聚集率及出血情况。记录住院期间及随访3个月时的主要心血管事件(心源性死亡、非致死性心肌梗死及再发心绞痛)的发生率。结果:用国产替罗非班组达到TIMI 3级血流的患者为96.0%(120/125);用低分子肝素组达到3级血流的患者为86.9%(106/122),两组差异有统计学意义(P<0.05)。术后血小板聚集率:两组患者均较术前明显下降,替罗非班组较低分子肝素组下降更为明显,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。国产替罗非班组患者住院期间和随访3个月无主要心血管事件发生。结论:特异性血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂国产替罗非班对改善非ST段抬高ACS患者血流再灌注及临床预后具有积极作用。

血栓抽吸联合GPⅡb/Ⅲa治疗血栓负荷过重心肌梗死患者的疗效

目的:探讨直接经皮冠状动脉介入治疗﹙PCI﹚中血栓抽吸导管(ZEEK导管)联合血小板Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂﹙GPⅡb/Ⅲa﹚治疗血栓负荷过重的急性ST段抬高型心肌梗死﹙STEMI﹚的效果。方法:入选STEMI患者136例,随机分为常规PCI组﹙44例﹚、GPⅡb/Ⅲa组﹙45例﹚和GPⅡb/Ⅲa+TA(血栓抽吸)组﹙47例﹚,分析三组PCI术后即刻梗死相关血管﹙IRA﹚的TIMI血流分级、梗死部位心肌灌注水平﹙TMP﹚分级、术后72h内出血、输血比例及术后30d、1年内主要心脏不良事件﹙MACE﹚等。结果:与常规PCI组比较,GPⅡb/Ⅲa组和GPⅡb/Ⅲa+TA组术后即刻IRA的TIMI血流分级[(2.31±0.50)比(2.52±0.48)比(2.69±0.47)]、TMP分级[(2.03±0.65)比(2.31±0.48)比(2.51±0.54)]明显提高,且GPⅡb/Ⅲa+TA组明显高于GPⅡb/Ⅲa组,P均<0.05;GPⅡb/Ⅲa组和GPⅡb/Ⅲa+TA组术后30d、1年MACE发生率均明显低于常规PCI组[30d:(9.6±28.4)%、(7.1±21.7)%比(16.2±37.4)%,1年:(16.3±35.5)%、(12.4±39.3)%比(29.7±46.3)%],P均<0.01。术后72h内出血、输血比例三组间差异无显著性。结论:冠状动脉血栓负荷过重的急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊PCI中联合使用血栓抽吸导管和血小板Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂安全、有效,即刻获得的TIMI血流和心肌灌注优于常规PCI组及单用血小板Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂组。

血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa、CD62p、CD63诊断妊高征的临床价值

目的 :检测妊娠高血压综合征患者血小板活化膜表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达 ,探讨其在妊高征诊断中的临床价值。方法 :采用流式细胞术检测不同程度妊高征患者及正常孕妇血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p及CD6 3的表达 ,并比较重度妊高征患者治疗前后各项指标的变化。结果 :轻、中、重度妊高征患者血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达率分别为 (14 .5± 6 .3) %、(11.8± 4 .9) %、(10 .2± 3.9) % ;(2 0 .7± 9.1) %、(15 .6± 5 .8) %、(13.7± 4 .8) % ;(5 0 .4± 2 0 .9) %、(35 .2± 13.6 ) %、(31.7± 10 .3) % ,均显著高于正常孕妇组。重度妊高征患者显著高于轻中度患者 ,治疗后GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达率均显著低于治疗前。结论 :妊高征患者血小板明显活化 ,随病情加重血小板活化增强。

国产血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂替罗非班在急性心肌梗死支架置入术中的应用

目的 探讨国产血小板糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂替罗非班（欣维宁）在急性心肌梗死支架置入中的应用效果.方法 64例急性心肌梗死患者按入院先后顺序分成两组：冠状动脉内置入支架加用国产替罗非班组34例,冠状动脉内置入支架加用普通肝素组30例,观察两组患者用药后对冠状动脉再灌注的影响,并随访主要心脑血管事件和出血并发症.结果 用国产替罗非班组达到TIMI 2～3级血流的患者为97.1%（33/34）,达到3级血流的患者为91.2%（31/34）;用普通肝素组达到2～3级血流的患者为76.7%（23/30）,达到3级血流的患者为70.0%（21/30）,两组差异有统计学意义.国产替罗非班组的患者住院期间无主要心血管事件发生.结论 特异性血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂国产替罗非班对改善急性心肌梗死后血流再灌注及临床预后具有积极作用.

老年高血压合并2型糖尿病患者血小板表面P-选择素及糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的变化

探讨老年高血压合并 2型糖尿病患者血小板膜上P 选择素 (CD6 2 )及糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(PAC 1 )的变化 ,采用流式细胞术 (FCM)以单克隆抗体分子作为探针检测健康老年人及高血压合并 2型糖尿病患者血小板膜上CD6 2的阳性百分率 (CD6 2 % )、CD6 2的几何荧光强度 (CD6 2MFI)、PAC 1的阳性百分率及PAC 1的几何荧光强度的表达量。结果显示 ,老年高血压合并 2型糖尿病患者血小板膜上CD6 2 %、CD6 2MFI、PAC 1 %及PAC 1MFI的表达量明显升高 ,但与当日血压、血糖及血脂无相关关系。研究表明 ,CD6 2及PAC 1是血小板活化的敏感指标 ,高血压合并 2型糖尿病患者有血小板活化现象 ,为高血压合并 2型糖尿病患者除了充分降压、降脂及降糖治疗外 。

免疫性血小板减少患者血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表达及意义

目的检测免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板表面糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa的表达情况并探讨其临床意义。方法应用流式细胞术检测ITP、非免疫性血小板减少患者及健康对照血小板表面GPⅡb/Ⅲa的阳性表达率。结果ITP、非免疫性血小板减少患者血小板数较健康对照明显减少(P<0.01),ITP组与非免疫性血小板减少患者血小板数差异无统计学意义(P>0.05);ITP、非免疫性血小板减少患者血小板表面GPⅡb/Ⅲa的阳性表达率较健康对照明显减少(P<0.01),ITP较非免疫性血小板减少患者的血小板GPⅡb/Ⅲa低,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论流式细胞术检测血小板GPⅡb/Ⅲa对ITP的诊断、鉴别诊断指导用药有一定意义。

急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋内Ⅱb/Ⅲa的表达及意义

目的 探讨急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa的表达情况。方法 健康对照组、急性心肌梗死组和急性心肌梗死组伴血小板减少组间血小板数值及CD41/CD61检测。急性心肌梗死组伴血小板减少组数值分层分为三组。应用流式细胞术检测急性心肌梗死患者,急性心肌梗死伴血小板减少患者及健康对照血小板表面GPⅡb/Ⅲa的阳性表达率。应用SPSS 15.0软件,所获数据采用方差分析和t检验。结果 各组血小板数比较：急性心肌梗死组明显高于健康对照组。急性心肌梗死伴血小板减少组明显少于健康对照组。各组间PLT、CD41＋/CD61-、CD41-/CD61＋、CD41＋/CD61＋比较,PLT P均〈0.0005;CD41＋/CD61-,P均〈0.0005;CD41-/CD61＋,P均〈0.0005,均有非常显著性差异。CD41＋/CD61＋,急性心肌梗死组Y与急性心肌梗死伴血小板减少组比较,P〈0.05,有显著性差异。AMI伴PLT减少组与对照组、急性心肌梗死与对照组比较,P均〈0.0005,均有非常显著性差异。血小板数值分层后三组与健康对照组CD41/CD61值比较,CD41＋/CD61-比较,血小板,（80~100）×10^9/L∶（50~80）×10^9/L、（80~100）×10^9/L∶（30~50）×10^9/L、（50~80）×10^9/L∶（30~50）×10^9/L,,P均〈0.0005,有非常显著性差异。CD41-/CD61＋比较血小板,（80~100）×10^9/L∶（50~80）×10^9/L,P〉0.05,无显著性差异。其,P均〈0.0005,均有非常显著性差异。CD41＋/CD61＋比较,血小板,（80~100）×10^9/L∶（50~80）×10^9/L,P〉0.05。其余P均〈0.0005,均有非常显著性差异。结论 流式细胞术检测血小板GPⅡb/Ⅲa对采用抗血小板聚集治疗急性心肌梗死具有重要指导意义。