棉铃虫Gq蛋白α亚基基因的克隆及组织特异性表达

目的了解棉铃虫体内Gqα的组织特异性表达情况。方法利用RACE技术获得了Gqα全长基因,利用半定量RT-PCR研究了该基因的时空表达情况。结果从棉铃虫Helicoverpaarmigera触角中克隆了一条全长1101bp的GqαcDNA序列,命名为GqαHarm;阅读框全长1062bp,编码353个氨基酸残基。GqαHarm与已报道的昆虫Gq蛋白α亚基同源性在90%以上,与近缘种甘蓝夜蛾MamestrabrassicaeGqα的同源性高达96.88%,与家蚕BombyxmoriGqα的同源性高达97.73%。半定量RT-PCR研究表明,GqαHarm在棉铃虫雌雄成虫触角中表达,在头、胸、腹、足和翅中也有表达,并且表达量差异不显著;此外,在喙、下颚须和下唇须中也有表达;在卵、幼虫、蛹和成虫体内也都有表达;在卵中的表达量最高,而在成虫中的表达量最低,在幼虫和蛹的前、中、后期的表达量差异不大。结论研究表明GqαHarm是一种在棉铃虫体内普遍存在的蛋白。

红螯螯虾感光器中Gq蛋白的鉴定及光波长对其含量的影响

用蛋白质常规提取方法分别提取红螯螯虾复眼视网膜的可溶性和膜结合蛋白质 ,用SDS PAGE和免疫印迹法进行G蛋白的分离和鉴定 ;在经光、暗适应及红、绿、蓝、黄 4种波长光照处理后 ,对其感光器中G蛋白分别进行SDS PAGE分析。暗适应、自然光及 4种波长光适应的感光器可溶性蛋白、膜结合蛋白条带数量和分子量大小基本相同 ,在 4 2kD处都出现一条清晰的蛋白条带。兔抗Gαq 11多克隆抗体能识别这一蛋白条带。表明红螯螯虾感光器中存在可溶性和膜结合Gq蛋白α亚基 ,分子量为 4 2kD。在不同光照条件下感光器中可溶性和膜结合Gqα亚基的含量有差异。可溶性Gqα蛋白占总蛋白的百分含量依次为 :日光 (7 71% ) >黄光(7 32 % ) >红光 (7 0 6 % ) >暗适应 (6 94 % ) >蓝光 (6 4 6 % ) >绿光 (5 74 % ) ;除暗适应与红光之间差异不显著外 ,红光与黄光差异显著 ,其余差异极显著。而膜结合Gqα亚基的百分含量则相反 ,依次为 :绿光(13 94 % ) >蓝光 (10 5 6 % ) >暗适应 (10 2 5 % ) >红光 (10 14 % ) >黄光 (9 76 % ) >日光 (9 4 4 % ) ;除暗适应与红光差异不显著外 ,红光与黄光差异显著 ,其余差异极显著。推测红螯螯虾感光器中Gq蛋白的激活与光照刺激的波长有关 ,其感光器对不同波长光刺激的敏感度有差别。

钙离子浓度对光暗适应罗氏沼虾感光细胞可溶性Gq蛋白α亚基的影响

以光适应和暗适应条件下的罗氏沼虾复眼视网膜为材料 ,分别用高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后 ,用蛋白质提取液提取可溶性Gq蛋白α亚基并SDS PAGE电泳 ,利用TanonGIS凝胶图像处理系统分析其含量。从光暗条件下 3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了 4 2kDa的可溶性Gq蛋白α亚基。高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中可溶性Gq蛋白α亚基的含量 ,光适应组分别是 3 13%、 3 0 9%、3 0 3% ;暗适应组分别是 3 17%、 3 0 6 %、 3 0 1%。在生理溶液和低钙溶液中 ,该蛋白含量光适应组大于暗适应组 ,但低钙溶液的光适应组与暗适应组无显著差异 ;在高钙溶液中 ,暗适应组显著大于光适应组 ,可能与钙离子反馈调节作用有关。

几种甲壳纲动物感光器中Gq蛋白α亚基的研究

报道了甲壳纲几种常见动物的视网膜为材料 ,用免疫印迹法验证了长尾类动物罗氏沼虾和日本沼虾的视网膜中具有 Gq蛋白的α亚基 ,Gqα抗体在 42 k Da处识别了一条蛋白条带 .短尾类动物中华绒螯蟹的视网膜中没有检测到 Gq蛋白的α亚基 .同样的方法在罗氏沼虾的眼柄蛋白中没有检测到 Gq蛋白的 α亚基 .不同光照处理罗氏沼虾的复眼 ,暗适应后视网膜中的 Gq蛋白的 α亚基含量明显少于光适应状态时其中的 Gq蛋白的

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞[Ca^(2+)]_i和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预

目的 :观察脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVECs) [Ca2 + ]i 和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预作用。方法 :分离、培养并鉴定Wistar大鼠RPMVECs;应用Fura - 2 /AM法测定RPMVECs[Ca2 + ]i;流式细胞仪技术测定RPMVECsGq蛋白。结果 :①LPS作用于RPMVECs 30min和 90min后 ,[Ca2 + ]i 显著高于对照组 ;Gq蛋白显著低于对照组。②山莨菪碱可抑制LPS的上述作用。结论 :①LPS致RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降 ;②山莨菪碱通过抑制LPS诱导RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降的作用而保护其内皮屏障功能。

心力衰竭大鼠左室组织Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化及苯那普利的干预作用

目的:观察慢性心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化,以阐明该信号转导通路在心力衰竭发病中的作用。方法:SD大鼠分为3组:对照组、心衰组和苯那普利干预组。心衰组大鼠腹腔注射阿霉素累积剂量达20mg.kg-1BW制作慢性心力衰竭模型,苯那普利组大鼠腹腔注射阿霉素同时给予苯那普利10mg.kg-1.d-1。4周后大鼠经颈内动脉插管至左心室行血流动力学测定,心肌组织中Gαq/11蛋白表达采用Western印迹法,磷脂酶C活性测定采用酶水解同位素底物法。结果:心衰组大鼠左室压力最大上升速率(+dp/dtmax)和最大下降速率(-dp/dtmax)均显著低于对照组,其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著高于对照组(P<0.01)。苯那普利组大鼠±dp/dtmax均显著低于对照组但高于心衰组(P<0.05),其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著低于心衰组但高于对照组(P<0.01)。结论:心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径活性显著升高,该信号通路的过度活化可能在心衰的发生中起到一定的作用,ACEI类药物苯那普利可部分逆转心衰大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的激活。

小牛胸腺素的提取及其对哮喘豚鼠肺组织Gq蛋白的表达影响

目的：从小牛胸腺中提取胸腺素并检测药物指标，观察其对哮喘豚鼠肺组织 Gqα表达的影响。方法：酸碱沉淀加离心法制备胸腺素，经多肽定量、活性鉴定、细菌培养、毒性试验和热原实验检测其药物指标。卵蛋白雾化吸入致敏法复制哮喘模型， Western blot(蛋白免疫印迹 )分析法测定 Gqα水平。结果：所制胸腺素符合中国药典标准。其治疗哮喘豚鼠后，肺组织 Gqα水平显著降低 (P<0.5）。结论：采用酸碱沉淀加离心法可制备胸腺素，其治疗哮喘的机理可能是通过改变肺组织Gqα水平来达到。

钙离子对光暗适应罗氏沼虾感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的影响

用蛋白质提取液提取膜结合Gq蛋白α亚基并SDS-PAGE电泳,利用Tanon G IS凝胶图像处理系统分析其含量.光暗条件下,在3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了42 kDa的膜结合Gq蛋白α亚基.高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的含量,光适应组分别是4.58%、4.63%、5.05%;暗适应组分别是4.56%、4.94%、5.13%.

钙离子浓度对日本沼虾感光细胞内可溶性Gq蛋白α亚基含量的影响

研究了钙离子浓度对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)感光细胞中可溶性Gq蛋白α亚基含量的影响。以暗适应状态日本沼虾的复眼视网膜为材料,分别用高钙溶液、生理溶液、低钙溶液进行孵育,应用SDS-PAGE及免疫印迹技术对其可溶性蛋白粗提取液进行分离和鉴定,并利用Tanon GIS凝胶图像处理系统对蛋白条带的含量进行分析,结果显示:不同钙离子浓度中孵育的日本沼虾感光细胞蛋白的条带数量和分子量大小基本相同。兔抗Gqα多克隆抗体在高钙溶液、生理溶液及低钙溶液处理的日本沼虾感光细胞中均识别了可溶性Gq蛋白α亚基,分子量为42 ku,可溶性Gq蛋白α亚基的含量分别是8.6%、8.4%和7.2%。在暗适应条件下,细胞中可溶性Gq蛋白α亚基的含量与钙离子浓度成正比,这表明钙离子浓度的升高可促进膜结合的Gq蛋白α亚基转化为可溶性的Gq蛋白α亚基。

Gq蛋白α亚单位在原发性高血压发病机制中的作用探讨

目的：了解Ｇｑ 蛋白α亚单位（Ｇαｑ）与原发性高血压的相关性。方法：以Ｇαｑ的多克隆抗体为探针，用免疫印迹（Ｉｍ ｍ ｕｎｏｂｌｏｔ）方法测定人动脉平滑肌层中Ｇαｑ的相对含量。结果：大肠癌患者中原发性高血压病人组（ｎ＝ ９）与对照组（ｎ＝ １５）相比较，血管平滑肌层中Ｇαｑ含量无显著性差异。结论：这可能是由于抗高血压药物作用的结果，也可能是另一条信号传导途径——酪氨酸激酶介导的磷脂酶Ｃ途径的异常。

日本沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基的鉴定与亚细胞定位

Gq蛋白是大多数无脊椎动物感光器中光信号传导中酶反应链的第二信使[1].本文用免疫印迹的方法研究了日本沼虾感光器中Gqa的存在,并应用免疫电镜技术观察了Gq蛋白在其感光器中亚细胞的分布,为研究Gq蛋白在光信号传导中的作用提供新的依据.

Ca^(2+)浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响

采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同Ca2+浓度对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergi)感光细胞中Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响。结果表明,对于光适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.51、2.13和0.93。对于暗适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.01、1.08和0.47。这些表明了罗氏沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基在暗适应条件下同时分配在感杆束和细胞质中。在光照和细胞质内Ca2+浓度适度升高的条件下,膜结合的Gq蛋白α亚基进而转化为可溶性的Gq蛋白α亚基。

罗氏沼虾溞状幼体早期复眼中的Gq蛋白α亚基

Gqα proteins of one thousand pairs of compound eyes of Macrobrachium rosnbergii in zoaea I～IV were isolated with SDS-PAGE electrophoresis , gel and protein maps photoed and the percent of protein was analyzed by Tanon GIS gel image disposal system. The results showed that the amount of Gqα protein of compound eyes increased gradually from zoaea I to IV, the percent of the Gqαin zoaea I～IV was 3.499%,3.540%,3.558% and 3.565% respectively. However, the percent of the protein in zoae IV and zoae I was significantly different (pair t test p <0.05). Our research verified that the function of compound eyes perfected gradually with individual development in zoaea of Macrobrachium rosnbergii.

罗氏沼虾蚤状幼体复眼中Gq蛋白α亚基的含量

Gq蛋白是最近几年发现的一种G蛋白,存在于章鱼[2]、乌贼、螯虾、罗氏沼虾和日本沼虾[3]等无脊椎动物的感光细胞中.Gq蛋白又称异源三聚体嘌呤核苷酸结合蛋白,它由α,β,γ3个亚基组成,Gq蛋白α亚基在光信号传导酶反应链中起分子开关和级联放大作用.

实验性急性呼吸窘迫综合征大鼠脑组织Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化

目的:探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠脑组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化及其作用。方法:健康雄性40只Wistar大鼠随机分为油酸组(OA组)和对照组。OA组由大鼠尾静脉注射OA 0.2 mL/kg(2 min内)复制ARDS模型,根据不同观测时点分为30 min、60 min、90 min和120 min 4个亚组。检测各组大鼠平均动脉血压(MABP),血气,血浆和脑组织丙二醛含量及乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中的Gq/11蛋白α活性亚基以及磷脂酶C(PLC)含量。结果:与对照组相比,OA组MABP、PaO2明显降低(P<0.05)。OA90 min和120 min组血浆和脑组织的MDA含量和LDH活性明显升高(P<0.05)。OA组血浆CK活性较对照组明显升高(P<0.05),脑组织CK活性在OA 60 min组升高(P<0.05),随后在90 min和120 min组降低(P<0.05)。脑组织Gαq/11蛋白在OA60 min、90 min和120 min组明显升高(P<0.05)。OA组脑组织PLC表达明显上调(P<0.05)。脑组织Gαq/11蛋白表达与PaO2的改变呈负相关(r=-0.579,P<0.05),与脑组织MDA变化呈正相关(r=0.538,P<0.05),与脑组织LDH的变化亦呈正相关(r=0.624,P<0.05)。结论:ARDS时Gq蛋白-肌醇磷脂信号通路活性增强可能参与了脑组织的损伤。

肝硬化大鼠血管平滑肌细胞Gq蛋白信号转导功能的研究

目的 为观察肝硬化大鼠动脉血管平滑肌细胞对血管紧张素Ⅱ (AT Ⅱ )是否存在受体后Gq蛋白信号转导通路的异常。方法 采用总胆管结扎制备大鼠肝硬化模型 ,分离主动脉血管平滑肌细胞后进行细胞培养 ,并予免疫组化鉴定。分别采用细胞感应微生理探测系统、三磷酸肌醇(IP3)分析法、Western印迹法检测血管平滑肌细胞AT Ⅱ受体介导的细胞外液酸化速率 (ECAR)、IP3生成、P42 / 44丝裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)磷酸化功能。结果 大鼠胆管结扎后 4 5周肝硬化形成。AT Ⅱ可剂量依赖性增强假手术组ECAR及IP3生成 ,但肝硬化组的ECAR和IP3形成明显降低 ,肝硬化组中AT Ⅱ刺激P42 / 44MAPK的磷酸化亦显著减少 ,但 2组的表达总量不变。结论 肝硬化时 ,动脉血管平滑肌细胞对AT Ⅱ受体介导的Gq蛋白信号转导功能发生障碍 。

异丙酚预处理对ARDS大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用的研究

目的探讨异丙酚预处理对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为油酸组、预处理组和对照组。油酸组由大鼠尾静脉注射油酸0.2 ml/kg(2 min内)复制ARDS模型。预处理组经左颈静脉输注异丙酚80 mg.kg-1.h-1,30 min后再以相同方式注射油酸。对照组从尾静脉注射同剂量的生理盐水。测定各组大鼠平均动脉压(MABP)、血气、血浆和各器官乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)含量。免疫印迹法检测各器官Gq/11蛋白含量。结果油酸组和预处理组的pH、PaO2较对照组下降(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆与肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组心、肾、小肠LDH活性明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝LDH活性较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组血浆、心、肾MDA含量明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠MDA含量较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组和预处理组血浆、肺脏ACE活性明显降低(P<0.05),而肾脏、小肠ACE活性升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组血浆ACE活性升高(P<0.05),肺脏、小肠ACE活性降低(P<0.05)。油酸组肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组肺、脑、心、肾、小肠中Gαq/11蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组肺、脑、肾、肝中的Gαq/11蛋白表达有所降低(P<0.05),心、小肠的变化无明显差异(P>0.05)。结论异丙酚预处理能减轻ARDS时多器官损伤程度,其抑制Gq/11蛋白高表达变化可能是其保护途径之一。

异丙酚预处理对Gq蛋白在ARDS时肝脏表达的影响

目的观察异丙酚预处理后Gq蛋白在ARDS时肝脏中的动态变化,以探讨其对肝脏的保护作用。方法油酸法复制大鼠ARDS模型,实验组经异丙酚预处理,免疫印迹法检测肝脏Gq蛋白的含量。结果异丙酚预处理后肝脏Gq蛋白的表达显著下降。结论异丙酚预处理能降低Gq蛋白在ARDS时肝脏的表达,对肝脏有一定的保护作用。

异丙酚对急性呼吸窘迫综合征时肾Gq/11蛋白的干预作用

目的探讨异丙酚是否通过影响Gq/11蛋白的表达对肾脏起保护作用。方法采用尾静脉注射油酸(OA)法复制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠模型。将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C组)、OA组和异丙酚预处理组(P组),并观察血压及相关酶的变化。用蛋白质免疫印迹法检测肾脏中Gq/11蛋白含量。结果P组Gq/11蛋白含量(124.68±19.38)%较C组(100.00±0)%增加了(24.68±19.38)%(P<0.01),但明显低于OA组(149.34±20.04)%(P<0.01)。P组肾组织血管紧张素转换酶(16.52±1.37)μmol·min-·g-1、乳酸脱氢酶(1.20±0.16)kU/g活性和丙二醛(1.51±0.35)μmol/g含量也均明显低于OA组分别为(17.56±1.02)μmol·min-1·g-1,(1.41±0.16)kU/g,(1.94±0.16)μmol/g,P均<0.01。结论预先注射异丙酚能降低Gq/11蛋白在肾脏中的含量,并减轻ARDS时肾损害的程度。

实验性ARDS大鼠小肠Gq／11蛋白的动态变化

目的:观察Gq/11蛋白在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)大鼠肠损伤中的变化. 方法:采用尾静脉注射油酸法复制大鼠ARDS模型,根据观测时限再将油酸组分为30 min,60min,901min,120 min 4个组,免疫印迹法检测小肠粘膜中Gq/11蛋白含量,测定血浆、小肠组织匀浆ACE、LDH活性和MDA含量.