脑源性神经营养因子及其受体在人卵巢的表达与卵泡发育的关系

目的 :研究脑源性神经营养因子 (BDNF)及其受体———酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)在人卵巢中的表达。初步探讨其与卵泡发育的关系。方法 :取排卵前期人卵巢组织和来自体外受精 胚胎移植 (IVF ET)周期的取卵日卵泡液、人卵巢黄素化壁层颗粒细胞 (hMGLCs)、人卵巢黄素化卵丘颗粒细胞 (hCGLCs)、未受精卵母细胞或未成熟卵母细胞。用免疫组织化学SABC法研究BDNF在人卵巢组织中不同发育阶段卵泡的表达 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)方法检测BDNF在人卵泡液 ,hMGLCs和hCGLCs无血清培养上清液中的表达。用免疫组织化学SABC法研究TrkB在人卵巢组织不同发育阶段卵泡的表达 ,免疫细胞化学SABC法研究TrkB在hMGLCs,hCGLCs和未受精或未成熟卵母细胞的表达 ,Westernblotting方法检测TrkB在hMGLCs和hCGLCs的表达及其差异。结果 :人卵泡液中存在BDNF ,BDNF表达于初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞及窦状卵泡的卵丘颗粒细胞。TrkB表达于初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞、窦状细胞的卵丘颗粒细胞、壁层颗粒细胞及卵母细胞 ,壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论 :在人卵巢BDNF及其受体TrkB可能 (通过旁分泌和自分泌的方式 )参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。

心房钠尿肽(ANP)对大鼠卵巢细胞生成雌激素与孕激素的影响

应用大鼠卵巢黄体细胞、颗粒细胞培养以及放射免疫分析法,观察了α型心房钠尿肽(α-ANP)对性甾体激素孕酮(P)和雌二醇(E_2)分泌的影响,结果发现,0.1—10ng/ml 浓度的α-ANP 促进离体培养的大鼠黄体细胞分泌孕酮,并呈量效关系。α-ANP 也促进大鼠卵泡颗粒细胞分泌孕酮,但对分泌雌二醇没有影响。说明α-ANP 也影响卵巢分泌功能。

肿瘤坏死因子及前列腺素对卵巢颗粒细胞增殖及雌、孕激素分泌的影响

应用来自体外授精(IVF)或配子移植(GIFT)患者的卵巢颗粒黄体细胞(GL细胞),纯化后培养10日,观察在肿瘤坏死因子α(TNF_α)作用下,对细胞增殖及雌、孕激素分泌的影响。加入重组人TNF_α0.1～10ng/ml后,GL细胞增殖加快,以第0～2日最显著,TNF_α10ng组较对照组增殖一倍。在培养第4～10日TNF10ng组孕激素(P_4)和雌激素(E_2)分泌量增加。若按细胞计每细胞P_4分泌量并无增加而E_2在第8～10日分泌量增加,在培养的GL细胞中加入前列腺素E_2(PGE_2)时,显示PGE_2抑制TNF使GL细胞增殖的作用。提示TNF可促进GL细胞增殖及P_4、E_2分泌增加,并对黄体形成起一定作用。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对卵巢的影响

目的通过实验观察TNF-α对妇女卵巢颗粒细胞和黄体细胞的直接作用以及与某些妇科疾病的关系。方法用放射免疫方法观察了不孕症和功能性子宫出血患者血清中TNF-α浓度,用细胞培养方法观察了TNF-α对人黄体细胞和颗粒细胞cAMP和孕酮生成的影响。结果与正常人相比不孕症和功能性子官出血患者血清中TNF-α浓度显著增高;TNF-α剂量依赖性刺激人颗粒细胞cAMP生成;TNF-α抑制人离体黄体细胞基础孕酮生成,具有剂量依赖性和时间依赖性特征;TNF-α预处理24h对hCG诱导人黄体细胞孕酮分泌和cAMP生成均有显著的抑制作用。结论 TNF-α对女性生殖能力有显著影响。

（＋），（－）和（±）棉酚在雌大鼠抗早孕作用的研究

妊娠第６～９天大鼠，分别ｉｇ（±）和（－）棉酚８０ｍｇ·ｋｇ^(－１)·ｄ^(－１)和４０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，结果有明显的抗早孕作用。然而（＋）棉酚４０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ^(－１)对大鼠生育无明显影响。（－）棉酚３０μｇ·ｍｌ^(－１)能抑制体外培养黄体细胞孕酮的分泌。（＋）棉酚１０μｇ·ｍｌ^(－１)，能促进黄体细胞分泌孕酮。ｈＣＧ１ＩＵ·ｍｌ^(－１)能明显刺激体外培养颗粒细胞孕酮的分泌。（±）棉酚１０和３０μｇ·ｍｌ^(－1)皆能明显降低颗粒细胞对ｈＣＧ的反应性。

坏死性凋亡对卵巢生殖细胞影响的研究进展

坏死性凋亡作为一种程序性死亡方式,参与卵泡发育、黄体分解等生殖过程,但其在哺乳动物卵巢生殖细胞上的具体机制尚未阐明。本文综述了坏死性凋亡具体分子机制、鉴定手段及其对哺乳动物卵巢生殖细胞发育影响的研究进展,以期为坏死性凋亡在哺乳动物卵巢生殖细胞上的深入研究提供理论参考。

大鼠卵泡颗粒细胞条件培养液对精子顶体反应的影响

使用 McCoy's 5A 无血清培养液培养未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,取颗粒细胞条件培养液与大鼠精子共同孵育后,以 FITC-ConA 标记精子顶体内膜,用荧光显微镜观察对精子顶体反应率的影响。结果表明:几种颗粒细胞条件培养液均可增加精子的顶体反应率,只是程度有所不同。提示在哺乳动物的精卵相遇时,随卵排出的颗粒细胞可能释放了某种因子,刺激了精子发生顶体反应而完成获能,是受精的关键步骤之一。

牛黄体细胞与卵泡颗粒细胞差异基因的筛选

旨在探究牛卵巢大黄体细胞(LLCs)和颗粒细胞(GCs)之间的差异表达基因,筛选颗粒细胞黄体化密切相关的基因。在GEO数据库获得GSE83524芯片数据,通过R软件limma包中的DESeq2来筛选牛优势卵泡GCs和卵巢黄体LLCs中的差异表达基因;通过DAVID软件对获得的差异表达基因进行GO分析和KEGG信号通路分析;使用String软件构建差异表达基因之间的蛋白互作网络(PPI);将互作数据导入Cytoscape软件对差异表达基因进行可视化分析,同时利用软件自带Cyto-Hubba插件的MCC算法筛选连通度最大的前10位的关键基因;最后通过实时荧光定量PCR对筛选出的与GCs增殖及其黄体化相关基因进行验证。通过R软件limma包中的DESeq2分析后,在2种细胞中共获得242个差异表达基因,其中上调表达基因156个,下调表达基因86个;GO功能富集分析显示,生物学过程占46.97%,细胞组分占31.82%,分子功能占21.21%;KEGG共发现16条通路,其中FOXO信号通路与GCs的增殖、卵泡的发育、闭锁和黄体化密切相关。PPI网络互作分析,筛选出了10个连通度最大的关键基因;实时荧光定量PCR结果表明,PRLR、SPARCL1、INHA、GREB1、CYP19A1在LLCs和GCs中的表达趋势与GEO芯片数据结果一致,且PRLR在LLCs中的表达量极显著地高于GCs(P<0.01),SPARCL1在LLCs中的表达量显著高于GCs(P<0.05);GREB1、CYP19A1在GCs中的表达量极显著地高于LLCs(P<0.01),INHA在GCs中的表达量显著高于LLCs(P<0.05)。本研究推测这些基因在牛卵巢中对GCs黄体化起重要作用,为深入研究细胞特异性及GCs细胞向LLCs的分化机制奠定基础。

湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达谱分析

卵泡颗粒细胞对卵母细胞的营养支持、保护以及卵泡生长发育、成熟、闭锁、维持黄体功能等起着至关重要的作用。为研究湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达及其信号网络,提取湖羊黄体期卵泡颗粒细胞RNA,采用Illumina测序技术进行测序,并结合GO分析和KEGG通路分析对基因功能分类、参与的生物过程及信号网络进行了研究。试验共获得了17 627个可匹配基因的表达情况,发现了多个与繁殖、消化吸收及代谢相关基因的高表达,如CYP19A1、IL1A、IL1B、UCP2、STAR等基因。经过GO分析和KEGG通路分析,15 278个基因分别注释到三大类60个功能组,在biological process这一大类中发现了与繁殖、发育、代谢、调节和免疫等相关的功能组,有6 361个基因注释到了312个KEGG通路,发现了与生殖生物学、消化吸收、代谢等过程相关的信号通路,并对相关功能组和通路进行了分析。本试验揭示了湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达特点及其参与的信号通路,为深入研究绵羊卵泡发育的调控机制及湖羊高繁性状关键基因的挖掘提供了参考。