基于基因数据库分析GRB2在肾癌中的表达及其与患者预后的关系

目的探讨生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因在肾癌中的表达及其对患者预后的影响。方法挖掘ONCOMINE数据库中肾癌GRB2基因相关数据进行基因表达分析,结合在TCGA数据库中挖掘的GRB2基因在肾癌组织和正常组织中的表达差异,获得GRB2基因的表达与患者预后的关系。并通过STRING数据库,构建GRB2基因的蛋白质-蛋白质互作网络图。采取实时荧光定量PCR的方法检测6例肾癌组织及其癌旁正常组织中GRB2基因的相对表达量。结果与正常肾组织相比,GRB2基因在肾癌组织中的表达明显升高,差异具有统计学意义(t=8.21,P<0.05),GRB2基因在肾癌组织中的表达升高与肾癌患者预后相关(z=2.71,P<0.05)。进一步对GRB2相关的14个相互作用蛋白进行分析显示,GRB2主要参与了细胞的增殖和凋亡过程。肾癌组织中GRB2基因相对表达量显著高于其癌旁正常组织(t=6.98,P<0.001)。结论GRB2基因在肾癌组织中高表达,且其基因表达水平与肾癌患者的预后明显相关。

子宫内膜癌与胰岛素-Ras-MAPK信号通路的相关性研究

目的:探讨胰岛素-Ras-MAPK通路中主要调节蛋白生长因子受体结合蛋白2(Grb-2)、Ras、P-ERK、细胞周期素D1(CD-1)在子宫内膜癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法检测48例正常子宫内膜,10例非典型增生子宫内膜,51例子宫内膜癌组织中Grb-2、Ras、P-ERK及CD-1的表达情况,放免法检测内膜癌患者空腹血清胰岛素水平。结果:Grb-2、Ras、P-ERK、CD-1在正常子宫内膜组织、非典型增生子宫内膜、子宫内膜癌组织中阳性表达率依次升高,其中Grb-2、P-ERK、CD-1差别有统计学意义。不同病理分期的子宫内膜癌患者组织中Grb-2阳性表达情况比较差异有统计学意义,P-ERK阳性表达差异亦有统计学意义(均P<0.01),子宫内膜癌中Grb-2与Ras、Grb-2与P-ERK表达呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),在有无淋巴结转移的子宫内膜癌中Grb-2的表达差异有统计学意义有关(P<0.05)。血胰岛素水平与Grb-2、P-ERK表达呈正相关(P<0.05)。结论:胰岛素-Ras-MAPK信号传导通路在子宫内膜癌的发生发展过程中可能起重要作用。

生长因子受体结合蛋白2、基质金属蛋白酶3和9在胆管癌中的表达及其意义

目的探讨生长因子受体结合蛋白(Grb)2、基质金属蛋白酶(MMP)3和MMP-9在胆管癌组织中的表达及其意义。方法收集华中科技大学同济医学院附属荆州医院手术切除的47例胆管癌标本,采用免疫组化法检测胆管癌组织及相应正常胆管组织中Grb2、MMP-3和MMP-9的表达情况,并分析Grb2表达与临床病理的关系,以及Grb2表达量与MMP-3、MMP-9表达量之间的关系。计量资料采用t检验,Grb2和MMP-3、MMP-9表达量的相关性分析采用多元线性回归分析。结果 Grb2在胆管癌组织中的表达要明显高于正常胆管组织(t=5.935,P<0.001);Grb2在胆管癌和相应正常胆管组织的表达量与年龄、性别、分化水平无明显相关;在发生淋巴结或者远处转移的胆管癌组织中,Grb2表达量比不发生转移的胆管癌组织要高(t=3.882,P=0.003)。Grb2的表达量与MMP-3、MMP-9的表达量分别呈正相关(r2值分别为0.3667、0.5133,P值分别为0.018、0.007)。结论 Grb2在胆管癌组织的表达量要高于相应正常胆管组织,且Grb2的表达量与肿瘤的侵袭转移能力密切相关;进一步研究发现,Grb2的表达量与MMP-3、MMP-9的表达量呈正相关。

Grb2-SH3抑制剂peptidimer-c对K562细胞凋亡相关基因表达的影响

目的分析peptidimer-c对K562细胞基因表达谱的影响，初步探讨peptidimer-c诱导K562细胞凋亡和抑制生长的可能机制。方法应用锥虫蓝染色法计数经不同浓度peptidimer-c分别作用不同时间后的K562活细胞数；通过透射电子显微镜观察peptidimer-c作用前后K562细胞的超微结构；应用HumanU133Plus3．0基因表达谱芯片检测peptidimer-c作用前后K562细胞的差异表达基因；并用反转录聚合酶链反应（RT．PCR）验证芯片结果。结果peptidimer-c能诱导K562细胞凋亡和抑制生长，peptidimer-c作用于K562细胞后引起大量基因表达的变化，差异表达基因有529个，其中上调455个，下调74个，影响细胞凋亡的基因包括JUN、AXUDl、TNFRSFIOB等表达明显上调；RT-PCR验证选取的15个基因的表达差异与芯片结果一致。结论peptidimer-c可通过上调肿瘤坏死因子及其受体家族成员和JUN家族，启动K562细胞凋亡。

Grb2在胰腺癌中的表达及其意义

目的:探讨生长因子受体结合蛋白2(Grb2)在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别采用real-time PCR和Western blot方法检测6种胰腺癌细胞株中Grb2基因和蛋白表达水平;采用组织芯片检测80例胰腺癌组织及癌旁胰腺组织中Grb2的表达情况,并分析Grb2表达状态与胰腺癌患者临床病理特征的关系。结果:Grb2的mRNA与蛋白在高侵袭力、低分化细胞株PANC-1、MIA-PaCa-2、AsPC-1中呈相对高表达,而在低侵袭力、高分化细胞株BxPC-3、SW1990、capan-2中呈相对低表达;Grb2在胰腺癌组织中均有表达,而在癌旁胰腺组织中不表达或低表达,统计分析显示,Grb2的高表达与肿瘤低分化以及淋巴结或者远处转移有关(均P<0.05)。结论:Grb2的表达与胰腺癌的分化程度和侵袭转移力密切相关,高表达者肿瘤恶性程度高,预后差。

生长因子受体结合蛋白2在人类真核翻译延长因子1A2促进胰腺癌发生发展中的作用

目的明确生长因子受体结合蛋白2（GRB2）在人类真核翻译延长因子1A2（EEFIA2）促进胰腺癌发生发展中的作用。方法用腺病毒质粒Ad5／F35-EEFIA2转染胰腺癌细胞株SW-990（EEF-A2低表达），应用小干扰RNA（siRNA）技术下调胰腺癌细胞BxPC-3（EEF-A2高表达）中EEF-A2的表达水平，用RT—PCR及Western印迹方法检测SW-990和BxPC-3细胞株处理前后GRB2的表达。化学合成GRB2特异高效的siRNA干扰片段，干预胰腺癌细胞BxPC-3后通过MTT和Transwe--实验观察BxPC-3细胞增殖和运动能力的变化。统计学处理采用单因素方差分析。结果腺病毒Ad5／F35-EEF-A2转染人胰腺癌细胞株SW-990后，GRB2的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（F-5．67和6．39，P均〈O．05）。EEF-A2-siRNA抑制BxPC-3胰腺癌细胞EEF-A2表达后，GRB2的mRNA和蛋白表达水平均明显下调（F-6．59和4．69，P均〈0．05）。BxPC-3在被转染siRNA—GRB2后，MTT结果显示72h时，siRNA-GRB2组吸光度值为1．22±0．14，与阴性对照组和空白对照组（1．42±0．15和1．39±0．15）相比，差异有统计学意义（F-6．63，P〈0．05）。Transwe--实验结果显示siRNA—GRB2组细胞侵袭能力减弱，24h后穿膜细胞数为（24．10±4．25）个，与阴性对照组[（54．72±5．24）个]及空白对照组E（51．26±6．23）个]相比，差异有统计学意义（F-55．00，P〈0．05）。结论GRB2是EEF-A2促进胰腺癌发生发展的关键分子。

重组腺病毒Ad5/F35-HF2S在白血病K562细胞的定位及与Bcr-Abl的相互作用

目的:研究重组腺病毒载体Ad5/F35-HF2S在慢性粒细胞白血病K562细胞中的定位及与融合蛋白BcrAbl的相互作用。方法:将Ad5/F35-HF2S腺病毒载体感染K562细胞,然后RT-PCR和蛋白质印迹法鉴定其表达情况,采用免疫荧光和蛋白质印迹法鉴定融合蛋白HF2S在K562细胞中的定位,免疫荧光法检测HF2S与Bcr-Abl在细胞质中的共定位情况,免疫共沉淀技术验证二者之间是否存在相互作用。结果:重组腺病毒Ad5/F35-HF2S能高效感染白血病K562细胞,并进行了正确表达。重组蛋白HF2S与Bcr-Abl共定位于细胞质,并能相互结合。结论:在K562细胞质中成功表达能与Bcr-Abl相互作用的HF2S蛋白,为后续靶向转运Bcr-Abl入核并治疗慢性粒细胞白血病奠定了基础。