间接测定生物组织中一氧化氮含量的Griess法的改良

通过锌粉还原反应使生物样品中的硝酸根变成亚硝酸根。研究确定还原反应的最佳条件。正了醇萃取去除生物样品中的干扰物质，然后进行Griess。显色反应，最终把显色物革取到正了醇相中进行比色测定。结果表明，改良后的Griess法在稳定性、准确性、广泛性和实用性等方面有明显改善，是一种间接测定生物组织中NO含量的理想方法。

唾液硝酸盐、亚硝酸盐检测方法的探讨

目的通过比较几种不同测定唾液硝酸盐、亚硝酸盐含量的方法来寻求最佳测定唾液微量硝酸盐、亚硝酸盐的标准方法。方法比较经典的Griess法、镉柱法和高压液相色谱法(HPLC)对含不同浓度的硝酸盐、亚硝酸盐标准品以及10位健康志愿者混合唾液样本中硝酸盐、亚硝酸盐含量的最低检出限和硝酸盐、亚硝酸盐回收率。结果Griess法和镉柱法测定唾液硝酸盐、亚硝酸盐的最低检出限NO3-为10ng/μl,NO2-为1ng/μl,回收率为91.2%;HPLC法测定唾液硝酸盐、亚硝酸盐的最低检出限为NO3-为0.8ng/μl,NO2-为0.1ng/μl,回收率达到97.6%。结论HPLC在微量硝酸盐、亚硝酸盐检测中的灵敏度明显高于经典的Griess法。

NO测定方法的原理和应用

ＮＯ是近年来发现的一个具有重要生物学意义的生物调质，在机体内发挥着广泛的生理学、病理学和药理学作用。这一领域研究的需要促进了ＮＯ测定方法的发展。本文综述了利用紫外－可见光谱、荧光光谱、化学发光、电化学以及ＥＳＲ波谱法进行ＮＯ测定的方法和原理。ＮＯ的ＳＥＲ波谱删定ＥＳＲ成像技术的结合，将有可能成为无创监测ＮＯ代谢变化的一个极为有价值的临床诊断技术。

血清一氧化氮含量测定方法的比较

目的寻找一种有效的血清一氧化氮含量测定方法。方法比较Griess试剂法、a-萘胺重氮法及硝酸根还原酶法检测血清NO的线性范围、精确度与准确度。结果硝酸根还原酶测定法具有较好准确度与精确度的血清NO测定方法;a-萘胺重氮法与常用的Griess试剂显色法具有相似的检测下限、准确度与精确度。结论硝酸根还原酶是一种有效的血清一氧化氮含量测定方法,但成本较高;而a-萘胺重氮法与Griess试剂法检测血清一氧化氮的准确度略低但成本较低。

桑枝总黄酮的抗氧化活性研究

目的研究桑枝总黄酮于无细胞系统中的直接抗氧化活性和干预细胞后的体外抗氧化活性。方法桑枝总黄酮经提取和D101大孔树脂纯化后获得,并用紫外分光光度法测定。采用DPPH法、ABTS法和FRAP法分析桑枝总黄酮的直接抗氧化活性且用trolox做阳性对照;采用ABTS法、FRAP法和Griess法分别测定桑枝总黄酮干预AngII诱导内皮细胞模型和LPS协同IFN-γ诱导巨噬细胞模型中的抗氧化活性。结果桑枝总黄酮于100μg/mL剂量对ABTS自由基清除能力>对DPPH自由基清除能力>对铁离子的还原能力;在AngII诱导内皮细胞ECV304模型中显示清除ABTS自由基的能力,且强于对铁离子的还原能力;同时能显著降低LPS协同IFN-γ诱导巨噬细胞中亚硝酸盐的量。结论桑枝总黄酮于体外直接测定或干预细胞后均显示具有抗氧化活性。

腺梗豨莶提取物对脂多糖活化巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用

用脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放一氧化氮(NO),Griess法测定培养上清中NO释放量并计算抑制率,MTT法测定细胞存活率评价药物的细胞毒性,以检测腺梗豨莶不同溶剂萃取部位对活化巨噬细胞释放炎症介质NO的抑制作用.结果表明,石油醚及乙酸乙酯部位对活化巨噬细胞释放NO的抑制作用明显强于正丁醇部位及水层,即石油醚及乙酸乙酯部位为腺梗豨莶抑制活化巨噬细胞释放NO的主要活性部位,半数抑制浓度(IC50)值分别为6.0和6.5μg.mL-1,其作用强度优于该植物的主要活性成分奇壬醇(IC50为37.5μg.mL-1),推断该活性部位中应含有奇壬醇以外的其他活性化合物.以上结果为进一步阐明腺梗豨莶的抗炎作用物质基础提供了一定的理论基础.

AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本实验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和非免疫状态下外周血、胸腺和脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的增殖反应能力和诱导巨噬细胞NO分泌量的变化。结果表明,非免疫状态下,AA肉鸡外周血CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量在7日龄时均为最低,脾脏中CD4+T淋巴细胞相对百分含量在整个试验期一直呈下降趋势,免疫后外周血、脾脏和胸腺中CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量均明显高于非免疫组,且脾脏CD4+T淋巴细胞呈阶段性上升状态;各时期淋巴细胞刺激指数(SI)值和巨噬细胞NO分泌量检测结果表明,免疫组均高于同期对照组(p<0.05)。研究结果还表明:肉鸡在7日龄时细胞免疫水平最低,灭活疫苗可以激发肉鸡产生较强的细胞免疫应答。

石松属植物化学成分抗炎活性的筛选

为研究2种石松属植物化学成分的抗炎活性,筛选具有较强抗炎活性的化合物,用LPS诱导RAW264.7细胞建立了体外炎症模型,采用MTT法检测了化合物对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞增殖的影响.在安全浓度范围内(细胞存活率大于80%)给予药物干预,用Griess法检测了培养上清液中一氧化氮(NO)水平,以各化合物抑制NO释放的能力为筛选指标,评价了化合物的抗炎活性.结果表明:乙酰基二氢石松生物碱(16)、对香豆酸甲酯(21)、豆甾烷-3-酮-21-酸(22)具有较好的NO抑制率,并呈一定剂量依赖关系,提示它们具有一定的抗炎活性.

恒磁场对糖基化终产物作用下内皮细胞一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性的影响

目的观察不同强度恒磁场对糖基化终产物作用下人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成及一氧化氮合酶活性的影响。方法采用体外培养第3代人脐静脉内皮细胞,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白。实验分为6组,即对照组、糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(100μg/L)组及糖基化终产物修饰牛血清白蛋白+不同强度(1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T2、0×10-4T)磁场组。各组细胞于培养及磁场作用24 h后收集标本,用Griess法检测培养上清中一氧化氮水平,并测定人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性。结果糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性较对照组明显降低(P<0.05)。1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T和20×10-4T恒磁场组一氧化氮生成、一氧化氮合酶活性显著高于糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组(P<0.05)。结论糖基化终产物修饰牛血清白蛋白可抑制人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性和一氧化氮产生;1×10-4T^20×10-4T的恒磁场可呈强度依赖性拮抗糖基化终产物修饰牛血清白蛋白对一氧化氮生成的抑制效应。

蛋白酪氨酸激酶对吸烟大鼠肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

【目的】探讨蛋白酪氨酸激酶(PTK)在吸烟大鼠肺泡巨噬细胞(AM)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白表达中的作用。【方法】选用Wistar大鼠30只随机分为对照组,被动吸烟组和PTK抑制剂Genistein干预组。用RTPCR检测iNOSmRNA的表达,用Westernblot检测iNOS蛋白的表达,用Griess法测定NO2-/NO3-含量。【结果】吸烟大鼠AM中iNOSmRNA和蛋白的表达与对照组相比显著增加(P<0.01),吸烟组AM培养上清液中的NO2-/NO3-含量较对照组显著增加(P<0.01)。在体实验发现,Genistein显著降低AM中iNOSmRNA及其蛋白的表达,同时使培养上清液中NO2-/NO3-含量下降(P<0.01)。【结论】蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein显著抑制了吸烟所致的AM中iNOS的表达,说明蛋白酪氨酸激酶参与吸烟诱导的AM中iNOS表达的信号传导。

苦竹枝总黄酮提取工艺的优化及其体外抗炎活性

目的优化苦竹Pleioblastus amarus(Keng)Keng f.枝总黄酮提取工艺,并评价其体外抗炎活性。方法在单因素实验基础上,以乙醇体积分数、提取时间、料液比、提取温度为影响因素,总黄酮含有量为评价指标,BoxBenhnken设计优化提取工艺。采用LPS诱导小鼠RAW 264.7细胞炎症反应模型,Griess法测定总黄酮对一氧化氮(NO)的抑制作用。结果最佳条件为乙醇体积分数83%,提取时间2 h,料液比1∶16,提取温度70℃,总黄酮含有量8.874 mg/g。该成分可明显抑制NO释放,并呈剂量依赖性。结论该方法稳定可靠,操作简单,可用于提取苦竹枝总黄酮,并且该成分具有较强的体外抗炎活性。

SN38与呋咱氮氧化物偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

SN38为喜树碱类拓扑异构酶抑制剂。本研究以羧基呋咱氮氧化物与SN38的酚羟基成酯合成制备SN38与呋咱氮氧化物的偶联物,采用griess法、MTT法及划痕实验分别测定了该偶联物的体外NO释放、抗肿瘤活性及抗肿瘤转移活性。结果显示合成的SN38与呋咱氮氧化物偶联物24 h体外释放NO达32.4%,抗肿瘤活性比SN38及SN38与呋咱氮氧化合物的混合物更强,且具有一定的抗转移活性。可见SN38与呋咱氮氧化物的偶联物表现出显著的协同效应。

当归对高脂喂养兔内皮素和一氧化氮的影响

研究当归对高脂喂养家兔内皮素和一氧化氮水平的影响。取健康家兔随机分为正常对照组(普通饲料喂养);高脂组(高脂饲料喂养)和当归组(高脂饲料+当归注射液)。喂养10周末处死动物取血和主动脉,检测血浆内皮素浓度,并用Griess反应法检测主动脉条一氧化氮(NO)的含量。当归组主动脉NO含量高于高脂组而接近于正常组;当归组血浆内皮素(ET)含量明显低于高脂组而接近正常组。当归能够拮抗高脂饮食所致家兔主动脉NO水平的降低以及血浆ET水平的升高,从而推测该药有可能具有抗动脉粥样硬化作用。

一氧化氮在全肠外营养所致胆汁淤积中的作用

目的:研究一氧化氮(NO)在全肠外营养(TPN)所致胆汁淤积中的作用。 方法:将24只新生兔分为三组:正常对照组、TPN1周组和TPN2周组。第7或14天后,分别取血及肝组织,以全自动生化仪检测血清肝功能,分别以Griess反应法、分光光度法和原位杂交法测定血清和肝组织中NO水平,肝组织NOS活性和iNOSmRNA表达。 结果:TPN第7天和14天后,血清和肝组织NO水平、肝组织NOS活性和iNOSmRNA表达较正常对照组明显增高(P<0. 05,P<0. 01),TPN2周组较TPN1周组有进一步增高(P<0. 05)。 结论:iNOS产生的NO在TPN引起的淤胆中发挥重要作用。

普通人群中,一氧化氮代谢物与高血压的相关性

在高血压患者中会出现内皮功能障碍以及导致内皮型一氧化氮释放受损。该研究试图在一般人群中确定一氧化氮代谢物（nitric oxide metabolites,NOx）的浓度与血压水平之间的关系。方法：在一项横截面研究中。