基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨灰树花提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织炎症反应的影响

目的:探讨灰树花提取物通过调控白细胞介素6(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和激活因子3(STAT3)信号通路,对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织炎症反应的影响及作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白对照组、UC模型组、灰树花治疗组、西药治疗组、联合治疗组,每组8只。采用3%DSS自由饮用法7 d建立UC大鼠模型后,治疗组分别灌胃灰树花提取物10 mg/(kg·d)、柳氮磺吡啶0.3 g/(kg·d)及等量两种药物,连续14 d。实验期间观察大鼠一般状态,计算疾病活动指数(DAI)评分;采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理改变;Western blot检测大鼠结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平;ELISA检测大鼠血清中IL-6含量;免疫组化法测定大鼠结肠组织中IL-6R、MPO蛋白含量及表达情况。结果:与空白对照组比较,UC模型组大鼠一般状态欠佳,DAI评分升高,HE染色可见明显的组织黏膜损伤与炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-6R、MPO含量均显著升高(P<0.01);血清中IL-6含量显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。与UC模型组比较,各治疗组大鼠的一般状态均有所改善,DAI评分降低,HE染色可见黏膜损伤有不同程度改善,偶见炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.01),结肠组织IL-6R和MPO含量及血清中IL-6含量均明显减少(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。结论:灰树花提取物可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路相关因子表达,减轻UC大鼠结肠组织炎症反应。

灰树花子实体多糖提取物对2型糖尿病小鼠的治疗作用

目的分离纯化灰树花子实体多糖并进行药理研究。方法用水提醇沉的方法制得灰树花粗品,并进一步除色素、蛋白;并考察其对遗传型2型糖尿病Kkay小鼠和高能量饮食加链脲佐菌素诱导的2型糖尿病小鼠模型的治疗作用。结果多糖的含量为82.2%,蛋白含量为1.28%。灰树花子实体多糖对2型糖尿病Kkay小鼠和链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠具有治疗和免疫调节作用。结论灰树花多糖具有较好的降血糖作用,可被开发成降血糖类辅助性药物。

灰树花菌丝体糖肽GFPS1b体内抗肿瘤作用的研究

采用移植型小鼠黑色素瘤B_(16)模型进行试验,研究灰树花菌丝体糖肽GFPS1b的体内抗肿瘤作用。结果表明,灰树花菌丝体糖肽GFPS1b对移植型小鼠黑色素瘤B_(16)有显著的抑制作用,抑瘤率在30%以上;样品作用组瘤体积生长速率比阴性对照组慢,且瘤体积小;同时能延长荷瘤小鼠的存活期;HE染色结果表明,GFPS1b中、高剂量组能使B16肿瘤细胞呈团索状实性排列或弥漫性分布,并有肿瘤细胞大片坏死,坏死区周围可见凋亡细胞;免疫组化技术进一步显示,GFPS1b能诱导瘤组织中Bax基因蛋白表达,同时也能显著下调Bcl-2蛋白的表达。研究表明,GFPS1b对小鼠移植性肿瘤有显著的抑瘤作用。

灰树花多肽-钙螯合物对小鼠衰老性骨质疏松的改善作用

通过建立D-半乳糖致衰老性骨质疏松(SOP)小鼠模型,探讨灰树花多肽-钙螯合物(GPs-Ca)对SOP的改善作用;通过体外Caco-2单细胞层模型模拟研究灰树花多肽-钙螯合物的促钙吸收能力。将50只雄性ICR小鼠随机分为5组,除了空白对照组外,其它4组均给予腹腔注射D-半乳糖;空白对照组给予腹腔注射同等剂量的生理盐水。8周后造模成功,空白对照组、模型对照组均给予去离子水灌胃;试验组给予灰树花多肽-钙螯合物高剂量(Hgps-Ca)灌胃。各组连续灌胃4周后,采血检测其血液生化指标及剥离股骨、胫骨后的骨指标。建立Caco-2单细胞层,用Fluo-3-Am钙离子探针测定细胞内钙摄取情况。结果表明:灰树花多肽-钙螯合物组血清钙、磷水平显著上升,具有统计学意义(P<0.05)。试验组血清碱性磷酸酶(ALP)数值较模型组降低,且灰树花多肽-钙螯合物组血清ALP水平接近对照组。灰树花多肽-钙螯合物在细胞内相较无机钙、葡萄糖酸钙更易吸收转运。结论:灰树花多肽-钙螯合物能够提高血清钙、磷、过氧化氢酶(CAT)水平,降低ALP活性,促进钙盐沉积,提高钙的吸收利用率,有利于改善SOP。

天麻醇提物对灰树花胞外多糖单糖组成和生物活性的影响

天麻醇提物参与灰树花液体发酵体系,检测所得胞外多糖的单糖组成变化,研究天麻醇提物对灰树花胞外多糖生物活性的影响。利用高效液相色谱对4种胞外多糖样品进行单糖组成分析,采用小鼠巨噬细胞(RAW264.7)活化模型、人肝癌细胞(HepG 2)模型对灰树花胞外多糖生物活性进行检测。实验结果表明灰树花粗多糖样品主要由葡萄糖、甘露糖及少量的半乳糖等单糖构成;经纯化的胞外精多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖等单糖构成,单糖物质的量比依次为13.8∶3.9∶5∶3.7:1∶1.7,而添加天麻醇提物的胞外精多糖单糖组分物质的量比为12.7∶3.2∶5.6∶3.5∶1∶1.6。通过灰树花胞外多糖对小鼠巨噬细胞活化实验的结果可知,添加天麻醇提物的胞外精多糖对巨噬细胞有明显的活化作用,胞外精多糖、添加天麻醇提物制备的胞外粗多糖对巨噬细胞有一定的活化作用,胞外粗多糖对巨噬细胞无明确的活化作用。通过体外实验检测,4种多糖样品对人肝癌细胞HepG 2无抑制作用。添加天麻醇提物对灰树花胞外多糖单糖组分含量产生明显变化,但并未使灰树花多糖产生新单糖;添加天麻醇提物能提高灰树花胞外多糖对巨噬细胞的活化作用。

灰树花原生质体高温胁迫条件研究及其再生菌株的胞外酶活性分析

以胁迫温度和胁迫时间为参数设置梯度胁迫条件,对菌株灰树花2#原生质体进行高温胁迫,研究高温致死胁迫条件,分析不同胁迫条件下再生菌株的胞外酶活性。结果表明,灰树花2#原生质体高温胁迫的最适温度为48℃,对原生质体致死发生响应的最短时间为0.5 min,使原生质体全部致死的最长时间为7.5 min,胁迫条件为48℃、0.5 min~7.5 min。不同高温胁迫条件下的再生菌株之间、再生菌株与出发菌株之间的胞外酶活性存在个体差异。再生菌株T_(48)M_(7)-1、T_(48)M_(5)-19和T_(48)M_(3)-36的羧甲基纤维素酶活性及漆酶活性极显著高于出发菌株灰树花2#(P<0.01)。再生菌株T_(48)M_(7)-1的羧甲基纤维素酶活性及固体培养基漆酶活性显著高于T_(48)M_(5)-19和T_(48)M_(3)-36菌株(P<0.05)。研究结果可为灰树花及其他食用菌原生质体育种技术提供科学参考。

灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏凋亡相关基因Bcl-2和Bax的影响。方法:健康雄性清洁级昆明种小鼠48只随机分为6组,即空白组、脾虚组、阳性药组(香菇多糖,2 mg.kg-1)、灰树花提取物低、中、高剂量组(5,10,20 mg.kg-1),每组8只。采用番泻叶-劳倦过度复合因素法造模14 d,之后灰树花提取物和香菇多糖溶液滤菌后ip 10 d,第11天处死动物。免疫组化法观察脾脏凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定脾细胞凋亡相关基因Bcl-2,Bax mRNA的表达情况。结果:给予灰树花提取物后,Bcl-2阳性产物平均灰度值比脾虚组明显降低(P<0.01),Bax阳性产物平均灰度值比脾虚组明显升高(P<0.01)。给予灰树花提取物后,Bcl-2 mRNA表达显著升高(P<0.01),Bax mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:灰树花提取物可以通过促进Bc1-2蛋白与mRNA的表达、抑制Bax蛋白与mRNA的表达,提高Bcl-2/Bax的比值,可以通过影响线粒体途径来抑制脾淋巴细胞凋亡的发生。

灰树花多糖抗荷瘤小鼠S180肉瘤的实验研究

目的研究灰树花多糖(GFP)抗实验性肉瘤作用的效果及其对肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)的影响,探讨其作用机制。方法将瘤细胞悬液接种于小鼠右前肢腋皮下制备荷瘤小鼠动物模型,分为GFP高、中、低剂量组和环磷酰胺(Cy)组、生理盐水组。以高、中、低剂量GFP溶液和环磷酰胺分别灌胃10d,检测小鼠肿瘤的抑制率,小鼠血清中TNF-α、IL-2的水平变化。结果3种剂量的GFP、环磷酰胺对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为34.37%、42.67%、47.92%和41.5%,GFP组荷瘤小鼠血清内TNF-α、IL-2含量明显高于Cy组和生理盐水组(P<0.05)。结论GFP具有抗肿瘤作用,TNF-α、IL-2的释放可能是其抗肿瘤作用的机制之一。

灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF)(1、10、20、50、100和200μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF20、50和100μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。