灰树花水溶物对EV71病毒的抑制作用

【目的】探讨灰树花水溶物(GFWE)的化学成分及其对EV71病毒的抑制作用,为促进灰树花综合利用、提高其经济附加值,以及开发预防和治疗EV71病毒感染的功能性食品提供依据。【方法】采用色谱法测定了GFWE的主要化学成分组成、多糖组成和分子质量。基于体外细胞培养采用CCK-8法确定了GFWE的安全上样量;以EV71病毒感染Vero细胞为模型,探究GFWE对EV71病毒的抑制率及对Vero细胞形态的影响,并采用荧光定量PCR检测了EV71病毒衣壳蛋白(VP1)编码基因mRNA的表达水平,初步评价了GFWE对EV71病毒的抑制作用。【结果】GFWE主要由低分子质量多糖、氨基酸、肽及其衍生物组成。GFWE富含的13种氨基酸中包含7种必需氨基酸;其多糖由葡萄糖、半乳糖、盐酸氨基葡萄糖和古罗糖醛酸4种单糖组成,物质的量比为0.907∶0.038∶0.029∶0.026,重均分子质量分别为15.67、10.10、6.60 ku和<1.00 ku。GFWE表现出较高的抗EV71病毒活性,100、200μg·mL^(-1) GFWE对EV71病毒的抑制率分别为91.32%、91.83%,25~400μg·mL^(-1) GFWE能显著降低EV71 VP1 mRNA的表达水平。【结论】GFWE主要由低分子质量多糖、氨基酸、肽及其衍生物组成,具有较高的抗EV71病毒活性,能够抑制感染EV71病毒的Vero细胞中VP1的合成。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨灰树花提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织炎症反应的影响

目的:探讨灰树花提取物通过调控白细胞介素6(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和激活因子3(STAT3)信号通路,对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织炎症反应的影响及作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白对照组、UC模型组、灰树花治疗组、西药治疗组、联合治疗组,每组8只。采用3%DSS自由饮用法7 d建立UC大鼠模型后,治疗组分别灌胃灰树花提取物10 mg/(kg·d)、柳氮磺吡啶0.3 g/(kg·d)及等量两种药物,连续14 d。实验期间观察大鼠一般状态,计算疾病活动指数(DAI)评分;采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理改变;Western blot检测大鼠结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平;ELISA检测大鼠血清中IL-6含量;免疫组化法测定大鼠结肠组织中IL-6R、MPO蛋白含量及表达情况。结果:与空白对照组比较,UC模型组大鼠一般状态欠佳,DAI评分升高,HE染色可见明显的组织黏膜损伤与炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-6R、MPO含量均显著升高(P<0.01);血清中IL-6含量显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。与UC模型组比较,各治疗组大鼠的一般状态均有所改善,DAI评分降低,HE染色可见黏膜损伤有不同程度改善,偶见炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.01),结肠组织IL-6R和MPO含量及血清中IL-6含量均明显减少(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。结论:灰树花提取物可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路相关因子表达,减轻UC大鼠结肠组织炎症反应。

响应面法优化栗蘑多糖提取工艺及其抗氧化活性研究

为优化栗蘑多糖提取工艺,以栗蘑子实体为研究对象,通过硫酸-苯酚滴定法,结合紫外分光光度法测定栗蘑多糖提取率。在单因素多水平实验的基础上,采用响应面法,利用Design-Expert软件,选取提取时间、提取温度、提取液料比3个因素,设置三水平实验方案优化提取工艺。结果表明,栗蘑多糖最佳提取工艺为提取时间1.9 h、提取温度80℃、提取液料比37∶1(mL/g),此条件下栗蘑多糖提取率为14.45%。抗氧化活性研究结果表明,栗蘑多糖对DPPH自由基和羟基自由基都具有较好的清除能力,在一定范围内,抗氧化活性随着多糖浓度的增加而提高。

灰树花可溶固形物提取工艺探究

在热水提取条件下,研究灰树花可溶固形物提取工艺。通过考查子实体形态、干燥方式对灰树花可溶固形物提取率的影响,再以提取温度、提取时间、料液比、浸洗次数开展单因素试验及正交试验,筛选最佳热水提取工艺。结果表明灰树花菌盖部分的开片程度越高,越利于可溶固形物的溶出。影响灰树花可溶固形物提取率高低的干燥方式依次为鼓风干燥>冷冻干燥>微波干燥。灰树花可溶固形物的最佳热水提取工艺为,鼓风干燥预处理,提取温度70℃,料液比1∶20,提取时间2.5 h,pH自然,浸洗1次。最佳工艺下灰树花可溶固形物提取率达到54.74%。

灰树花不同浓度醇提物的活性成分分析及抗氧化、抗EV71病毒的作用研究

【目的】探究灰树花适宜的乙醇提取浓度,分析不同乙醇浓度提取对灰树花活性成分及抗氧化、抗EV71病毒活性的影响,促进灰树花的开发利用。【方法】分别采用55%、70%和95%的乙醇溶液作为提取溶剂对灰树花子实体进行超声波辅助提取,测定不同浓度乙醇提取物主要活性成分含量并对其抗氧化、抗EV71病毒能力进行相关性分析。【结果】不同乙醇浓度提取物活性成分含量存在差异,灰树花95%乙醇提取物(GFE95)中多酚和三萜含量最高分别为0.042%和1.82%,灰树花55%乙醇提取物(GFE55)中多糖和蛋白质含量最高,分别为33.08%和17.45%。GFE55、灰树花70%乙醇提取物(GFE70)和GFE95具有不同程度的抗氧化和EV71病毒抑制作用。其中,GFE95的抗氧化能力最好,对2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)、2,2′-联氨双二胺盐(ABTS+)、超氧阴离子(O_(2)^(-))和过氧化氢(H_(2)O_(2))自由基的清除能力的IC50值分别为0.7427、0.7414、0.902、0.4146mg·mL^(-1)。GFE95的抗病毒作用较强,当样品质量浓度为200μg·mL^(-1)时,GFE95对EV71病毒的抑制率最高,达88.18%,其对EV71病毒抑制率的IC50值为194.80μg·mL^(-1),TI值为9.65。皮尔逊相关性分析结果表明DPPH、ABTS^(+)、O_(2)^(-)自由基清除率与三萜类成分含量呈极显著正相关,相关系数分别为0.992、0.971和0.613(P<0.01)。O_(2)^(-)、H_(2)O_(2)自由基清除率与多酚类成分含量呈极显著正相关,相关系数分别为0.921和0.997(P<0.01)。EV71病毒抑制作用与多酚、三萜类成分含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数分别为0.536和0.954。灰树花中三萜和多酚的含量与抗氧化、抗病毒活性具有较强的相关性。【结论】以体积分数为95%的乙醇溶液为提取剂,可有效提取灰树花中具有抗氧化、抗病毒活性的多酚、三萜、多糖等活性物质,提高灰树花的生物活性,是进一步促进灰树花的高值化应用开发的关键。研究结果为灰树花的提取溶剂选择及活性作用的研究奠定基础。

灰树花水上清液中不同极性提取物的功能成分及其抗氧化活性

分别采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水不同极性溶剂提取灰树花水提上清液,比较不同极性提取物的主要功能成分及利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)、羟基(OH)自由基3种方法比较抗氧化活性。结果表明,正丁醇提取物的多酚和蛋白质含量最高,分别为0.36%和38.75%;石油醚和乙酸乙酯提取物中黄酮含量最高,均为0.05%;石油醚提取物的三萜、甾醇含量最高,分别为6.32%和15.88%;水提取物中多糖含量最高,为30.11%。正丁醇提取物具有最强的抗氧化活性,多酚是主要起抗氧化活性的成分。通过高效液相色谱质谱联用法(LC-MS)鉴定了13个多酚及其衍生物。本研究为灰树花功能性食品或保健品的开发提供了理论依据。

太子参乙醇提取物对灰树花菌体生长及胞外多糖的影响机理初步研究

为探讨太子参乙醇提取物参与灰树花发酵及其促胞外多糖增加的机理。本试验开展太子参乙醇提取物对灰树花生物量、胞外多糖的影响研究;动态分析灰树花发酵期间多糖合成关键酶活性的变化,同时,从氧化应激角度探讨太子参乙醇提取物的添加对菌丝体生长及胞外多糖的影响。试验表明:太子参85%乙醇提取物添加量为9 g/L,发酵7 d,生物量和胞外多糖含量均达到峰值(P<0.01),与未添加太子参乙醇提取物的相比,分别增加了53.20%和50.71%;动态分析灰树花多糖合成关键酶的变化,发现在灰树花发酵体系中添加太子参85%乙醇提取物后,发酵7d,灰树花胞内磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDPG)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)活性达到最高,与未添加太子参乙醇提取物相比,PGM、UDPG活性分别提高9.44%、18.57%,GPI活性降低19.46%(P<0.05);添加太子参乙醇提取物的灰树花胞内活性氧水平(ROS)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)含量变高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化氢酶活性(CAT)增强,与未添加太子参乙醇提取物相比,其含量或酶活性均显著提高(P<0.05)。该研究表明太子参85%乙醇提取物参与灰树花发酵时,通过调节多糖合成酶活性促胞外多糖增加,同时,太子参乙醇提取物对灰树花生长有胁迫作用,初步推测太子参乙醇提取物对胞外多糖合成有调节作用。

灰树花提取成分对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:以NK细胞杀伤活性,巨噬细胞吞噬功能及TNFα,IL-1的产生水平为指标,对灰树花乙醇沉淀物（ET-Pre）和RNA提取物影响小鼠非特异性免疫功能及其抗肿瘤机制作初步探讨。方法:以常规生物学测定的乳酸脱氢酶法,吞噬中性红法,结晶紫染色法,MTT生物活性测定法进行检测。结果:灰树花ET-Pre和RNA提取物处理组小鼠脾NK细胞杀伤活性,巨噬细胞吞噬功能及TNF-α,IL-1的产生水平均较对照组呈现有显著意义的增高或增强。并且灰树花RNA提取物提高NK细胞杀伤活性和巨噬细胞吞噬功能的程度大于灰树花ET-Pre的作用。结论:灰树花两种提取物可增强机体非特异性免疫功能,间接发挥抗肿瘤作用。

灰树花浸膏粉的生产及其化学成分分析

采用热水提取、真空浓缩和喷雾干燥等工艺生产灰树花浸膏粉。分析结果表明 :灰树花浸膏粉中的水分、粗蛋白、粗脂肪、总糖、粗多糖和灰分等的含量分别为 7.6 4% ,2 3.96 % ,0 .2 7% ,48.0 5 % ,2 4.5 5 %和 6 .95 % ,而粗纤维成分含量小于 0 .4% ;灰树花浸膏粉含有丰富的矿质元素磷 (2 .1 6mg/g) ,钙、镁、锌、铁、锰、铜等人体必需营养素分别为 430 μg/g ,970 μg/g ,5 6 μg/g ,83.1 μg/g ,7.3μg/g和 9.7μg/g ;其 1 8种氨基酸总量每百克为1 2 .6 6mg ,其中必需氨基酸约占全氨基酸含量的 41 % ,此外还含有每百克为 2 6 6 .83mg的牛磺酸。检验结果还表明

响应面法提取灰树花多糖研究

利用试验设计软件Design-Expert,通过二次回归设计得到灰树花多糖提取量与提取温度、提取时间、乙醇浓度关系的回归模型,该模型能够较好地预测灰树花多糖提取量。在对影响多糖提取量的关键因素及其相互作用进行探讨后,得到的优化提取工艺参数为:提取温度11℃、提取时间10.35h、乙醇浓度96%,此条件下,多糖的提取量为1.72g/L。

灰树花胞外多糖提取工艺优化

通过对乙醇浓度、醇沉时间、醇沉温度3个单因素试验对灰树花胞外多糖提取过程中的变化规律进行研究,并且通过正交试验法,以灰树花EPS提取量为考察指标,对灰树花胞外多糖提取工艺条件进行优化。结果表明:灰树花胞外多糖的最佳提取条件为乙醇浓度95%、醇沉时间10h、醇沉温度4℃。在此条件下灰树花胞外多糖的提取量为321.94mg·L-1,较未优化的灰树花胞外多糖提取条件提高了57.79%。

灰树花液体发酵及多糖提取工艺的优化研究

为了优化灰树花液体发酵及多糖提取工艺,根据试验数据建立了以菌丝生物量为响应值的响应面方程,优化发酵工艺为通气量1.4∶1(V/V)和pH值6.0,应用径向基函数(RBF)神经网络的方法,对菌丝生物量进行了拟合;采用正交试验方法,研究了醇析浓度、浸提次数、浸提温度等因子对多糖提取量的影响,结果表明:最佳提取工艺为料液比为1∶20,浸提3次,浸提温度为60℃,醇析浓度为85%,并拟合了多糖提取量响应面方程。

响应面法优化灰树花中多糖超声波提取工艺的研究

通过响应面法分析优化了超声提取灰树花中多糖的工艺条件,并与传统水提法进行了比较分析。结果表明,超声提取灰树花中多糖的最佳工艺条件为:提取时间171 s,提取功率352.4 W,液料比47.9∶1(mL∶g),提取率预测值为14.23%,验证值为14.26%,与预测值的相对误差为0.21%,多糖得率比传统水提法有所提高,且提取时间大大减少。

微波辅助提取灰树花多糖工艺研究

采用提取时间、微波功率、液料比的单因素试验和正交试验法优化微波辅助提取灰树花多糖条件。结果表明,以净多糖得率为指标,影响微波辅助提取灰树花多糖的主次因素为:提取时间>微波功率>液料比,并且提取时间和微波功率的影响达到了极显著水平。灰树花多糖最佳提取工艺条件为:提取时间为10 min,微波功率为80%(全功率为800 W),液料比为25:1。创立了一种用苯酚-硫酸法测定多糖时排除蛋白质干扰的方法。

灰树花发酵液提取多糖的比较研究

以灰树花发酵液为原材料 ,采用酸法、碱法、盐法和中性热水法提取灰树花发酵液纯多糖 ,提取量分别为 0 8%、 1 0 9%、 1 96 %和 1 34%。

灰树花提取物清除氧自由基的研究

采用化学发光法比较了灰树花各提取物对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除效果。研究结果表明,灰树花子实体和菌丝体的提取物对羟基自由基均有很好的清除作用,灰树花菌丝体水提物(GFME)、灰树花子实体水提物(GFE)、灰树花子实体水提多糖(GFP)、灰树花子实体碱提多糖(GFAP)清除羟基自由基的IC50均小于1.0 mg/mL,其他提取物清除羟基自由基的IC50也均小于3.0 mg/mL。而对超氧阴离子自由基仅GFME、GFMP、GFE有清除作用,其他的提取物清除作用很弱。

超声波提取灰树花菌丝体蛋白工艺优化

为了获得提取率高的灰树花菌丝体蛋白,以灰树花菌丝体为原料,采用超声波提取灰树花菌丝体蛋白。在单因素试验基础上,采用正交试验设计,以蛋白提取率为评价指标,对提取工艺条件进行优化。结果表明,最佳提取条件为液料比95∶1(m L∶g),超声功率600 W,超声温度35℃,超声时间3 min,p H 10.5,在该条件下,灰树花菌丝体蛋白提取率为(5.10±0.04)%。

复合酶-微波辅助萃取结合超滤纯化的灰树花子实体多糖的免疫活性研究

目的:研究经酶解-微波辅助萃取、超滤分级纯化的灰树花子实体多糖的免疫活性。方法:采用复合酶解结合微波辅助萃取方法提取灰树花子实体多糖,采用超滤工艺对提取多糖进行分级纯化;采用MTT法研究多糖对小鼠脾淋巴细胞、ConA/LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;建立荷瘤小鼠模型,研究灰树花多糖对肿瘤的抑制作用。结果:获得分子质量范围为<50kD的GFP-I、50～100kD的GFP-II和100～200kD的GFP-III;与RPMI-1640对照组相比,GFP-I、GFP-II和GFP-III对淋巴细胞增殖率分别增加26.558%～74.167%(P<0.001)、20.175%～152.075%(P<0.001)和26.473%～334.797%(P<0.001);对ConA诱导的淋巴细胞增殖率分别增加31.408%～122.894%(P<0.001)、53.075%～235.693%(P<0.001)和83.347%～367.241%(P<0.001);对LPS诱导的淋巴细胞增殖率分别增加20.526%～97.075%(P<0.001)、38.288%～211.348%(P<0.001)和54.454%～344.883%(P<0.001);相对于生理盐水(NS)组,在实验剂量范围内,GFP-I、GFP-II和GFP-III对S180肿瘤的抑制率分别达到10.15%～22.94%(P<0.001)、12.79%～30.10%(P<0.001),23.86%～51.65%(P<0.001)。结论:经复合酶-微波辅助萃取、超滤分级纯化后多糖具有显著免疫活性和抗肿瘤活性,其中GFP-III具有比GFP-I和GFP-II更强的免疫活性和抗肿瘤活性,而且活性与其浓度正相关,多糖可能以对T淋巴细胞增殖的促进作用为主。

天麻影响灰树花深层发酵产胞外多糖的动力学模型及应用

灰树花多糖是灰树花中最具生物活性的成分之一,通过在灰树花发酵体系中添加一定量的天麻,可以提高灰树花胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)的产量。基于Logistic和Luedeking-Piret方程,采用MATLAB软件分别得到了天麻醇提液浓度为7%(v/v)时,灰树花菌体生长、EPS合成、基质消耗的动力学模型和模型参数。结果表明模型与实验数据能较好地拟合,基本上反映了天麻醇提液浓度为7%(v/v)时,灰树花发酵产胞外多糖过程的动力学特征。

灰树花不同极性多酚组分的抗氧化活性研究

采用40%丙酮提取灰树花子实体中的多酚类物质,经NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂纯化,然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取制备不同极性的多酚组分。通过分析总还原力、DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、亚铁离子螯合能力,从而研究不同极性多酚组分的抗氧化活性。结果表明,不同多酚质量浓度的乙酸乙酯相总还原力均高于正丁醇相和水相;乙酸乙酯相的DPPH自由基清除率IC50值为12.192μg/m L,且羟自由基清除率IC50值为66.040μg/m L,说明乙酸乙酯萃取相中所含的多酚组分抗氧化活性较强。