布鲁氏菌L7/L12和GroES真核表达载体的构建及免疫效果分析

利用Overlap PCR方法连接基因L7/L12和GroES,分别利用pET32a和pcDNA3.1构建原核和真核表达质粒,分别命名为pET32a-LG和pcDNA3.1-LG。原核表达并纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,用于验证真核表达载体目的基因的表达;重组真核表达质粒pcDNA3.1-LG转染293T细胞,经间接免疫荧光和Western blot验证蛋白成功表达。真核质粒免疫小鼠后,利用ELISA方法检测血清抗体水平,淋巴细胞转化试验检测细胞免疫水平,结果显示,该重组质粒具有良好的免疫效果。

沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆,测序和特性分析

利用原核微生物GroE基因特定区域高保守性设计了简并引物 ,以RhodopseudomonaspalustrisY6的染色体为模板进行PCR扩增 ,得到片段 5 94bp的产物 .将该DNA片段连接到pUC -T载体多克隆位点上 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,得到阳性重组子 .经Southern杂交验证 ,已克隆的 5 94bpDNA片段来自Rhodopseudomonaspalustris.测序结果分析表明该片段是细菌groE基因高保守区 .