提高Grocott六胺银染色质量的几点细节

真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,部分真菌感染病灶和炎症、结核、肿瘤病灶难以鉴别,常用Grocott六胺银染色检测组织中的真菌来确诊。近年来由于环境恶化和广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂的广泛使用,以及临床上侵入性操作的普遍开展,使人体抵抗力下降,导致真菌感染性疾病日益增多[1-2]。因此,Grocott六胺银染色检测真菌的应用越来越广泛,这就需要更高质量的染色效果。为提高染色质量,本文对传统方法进行了改良,在实践工作中取得了比较满意的效果,现介绍如下。

抗酸染色联合PAS染色和六胺银染色在感染性疾病病理学实验教学中的应用

为配合医学整合课程体系改革,结合临床病理诊断常用的感染性疾病的辅助诊断方法,将抗酸染色、高碘酸-Schiff(periodic acid-Schiff,PAS)染色和六胺银染色阳性病例切片引入病理学感染性疾病章节的实验教学,显示出病变组织致病微生物。通过对不同班级进行问卷调研,绝大多数同学认可特殊染色在感染性疾病章节中的应用,认为不仅丰富了课堂内容,学习了结核杆菌和真菌在病变组织中的形态学特征及其导致的组织病理变化,而且加深了对感染性疾病理论知识的理解,深刻认识到病理学研究内容除了疾病的病理变化之外,还要探讨疾病发生的病因以及好发部位。同时,这些增加的特殊染色切片改变了本章节实验教学切片普通光学显微镜下色彩的单调性——单一的“红-蓝”色调,丰富了镜下色彩,提高了学生的学习兴趣,活跃了课堂气氛。

六胺银真菌染色使用不同复染剂的选择

目的 探讨不同复染剂在六胺银真菌染色中的应用价值。方法 A组为对照组,使用Harris'苏木素伊红染色;B、C、D组为实验组,使用六胺银特殊染色法,分别复染亮绿、核固红、Mayer苏木素,于显微镜下观察染色情况,对比优劣。结果 在孢子染成紫黑色的前提下,亮绿复染背景清晰,对比明显,优于核固红、Mayer苏木素复染。结论不同色系的复染剂反衬效果优于相邻色系的复染剂,亮绿应用价值及染色结果最优。

改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用

目的探讨改良六胺银染色方法在肾组织活检病理中的应用价值。方法随机选取2020年9月至2022年3月80例确诊的肾活检病理穿刺标本(IgA肾病20例,膜性肾病20例,糖尿病肾病20例,微小病变20例)。采用硫代氨基脲改良六胺银染色法,并与常规六胺银染色法进行比较。结果采用改良六胺银染色法,肾小球基底膜及肾小管基底膜的染色强度均提升;且不同疾病、不同部位染色强度差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良六胺银染色法,能提升染色的敏感性和特异性,具有方便、快捷、可靠等特点,适合临床应用。

浅析六胺银染色的注意事项

六胺银染色作为一种经典的特殊染色方法,常用于观察肾小球基底膜的改变和真菌的判别。它的基本原理是组织经过氧化,肾小球的基底膜或者真菌等微生物壁内的黏多糖暴露醛基,醛基将六胺银还原为黑色的金属银而被观察到。虽六胺银染色已应用许久,但制作出颜色分明的优质特染片一直都是个病理技术难题。我们科自开展这个业务以来,通过不断摸索改进,总结出几项关键点,取得了满意的效果。现介绍如下。

一种节约六胺银染液单片染色的简易方法介绍

目的探讨一种能节约六胺银染液单片染色方法的可行性。方法收集湖北省中西医结合医院病理科2022年1月至2024年4月病理诊断为真菌感染阳性的组织标本20例。每个标本蜡块切片二片,分为传统六胺银染色组和改良六胺银染色组,同时进行六胺银染色。在显微镜下观察2组切片,对比2种不同的染色方法对结果的影响。结果镜下见改良六胺银染色组切片染色呈阳性。真菌呈黑色或黑褐色,组织结构清晰,形态完整。与传统六胺银染色组染色效果及诊断准确率相比较,结果均无明显差异。结论改良后的单片六胺银染色方法既能保证染色效果,亦能有效地节约试剂,适合在基层实验室广泛推广使用。

真菌六胺银染色技术的优化

目的探索真菌六胺银染色的优化方案,寻求染色效果佳且环保简便的染色试剂。方法选取已知真菌感染的阳性病理组织,分别制作成蜡块,通过对比试验,比较不同氧化剂、六胺银染液不同配制方法、不同衬染试剂对六胺银染色质量的影响。结果真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液氧化,染色步骤较使用三氧化铬溶液氧化简便,且三氧化铬为高毒致癌物,高碘酸毒性较低,故选择2%高碘酸溶液作为氧化剂更优;六胺银改良配制重复利用法配制六胺银液较传统配制法简便,对染液的利用率高,可以重复回收使用,较节约成本;1%亮绿染液与苏木素染液均是教材推荐的衬染剂,但亮绿染液的染色效果显著优于苏木素染液。结论真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液作为氧化剂、六胺银改良配制重复利用法配制的六胺银液染色、1%亮绿染液衬染为较佳方案。

实时荧光PCR和六胺银染色对肺孢子菌肺炎诊断价值的分析评价

目的比较实时荧光PCR和六胺银染色对肺孢子菌肺炎(PCP)的诊断价值。方法收集2014年1～12月北京协和医院疑似PCP患者非重复送检标本共2 525例,其中2 492例标本用六胺银染色法对肺孢子菌孢囊进行检测,33例标本用实时荧光PCR法对PCP-DNA进行检测,429份标本同时用六胺银染色法和实时荧光PCR法进行检测,以临床诊断为标准,分析两种方法的阳性率、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果六胺银染色法的阳性率为1.2%(30/2 492),其中痰、气管插管支气管吸取物和肺泡灌洗液的阳性率分别为0.70%(13/1 845),4.00%(10/250)和2.72%(7/257)。实时荧光PCR法的阳性率为34.20%(158/462),痰和肺泡灌洗液的阳性率分别为30.61%(105/343)和44.54%(53/119)。六胺银染色法和实时荧光PCR法的敏感度13.97%vs 72.07%(χ~2=68.625,P<0.01),特异度100%vs94.24%(χ~2=4.296,P<0.05),阳性预测值100%vs 92.14%(χ~2=6.380,P<0.01),阴性预测值55.36%vs 78.26%(χ~2=11.873,P<0.01),差异均具有统计学意义。结论实时荧光PCR敏感度高,相对干扰因素少,临床诊断价值高,但标本送检率明显低于六胺银染色,建议临床提高其送检率,提高PCP的早期诊断。

六胺银加马松三色双重染色在肾穿刺活检组织中的应用

肾小球病是发病率较高的疾病，肾穿刺检查是确诊肾脏疾病的重要手段，光镜观察肾组织病变在进行肾小疾球疾病诊断和分类工作中起重要作用。常规HE染色不能清晰地显示肾小球基膜，在实际工作中除免疫荧光抗体检测外，PAS、PASM、Masson特殊染色才能将基膜清晰地显示出来。尤其是六胺银加马松三色双重染色在光镜下观察基膜增厚和钉突、双轨，对诊断膜性。肾小球肾炎及其它各种肾小球疾病有重要价值，是观察肾小球基膜改变的重要方法之一。

心肌毛细血管六胺银染色法及缺血预适应对心肌毛细血管的影响

探索显示心肌毛细血管的方法及用该法观察缺血预适应 (ischemicpreconditioning ,IP)对毛细血管的影响。制备套扎前降支动脉犬模型 ,缺血再灌注 (ischemia reperfusion ,IR)组予缺血 1h ,再灌注 2h ;IP组在缺血与再灌注之前 ,予缺血和再灌注各 5min ,反复 4次。实验终点取缺血心肌进行六胺银染色显示毛细血管 ,并定量比较。结果六胺银法染色显示心肌毛细血管清晰 ;IP组缺血心肌毛细血管数、周长和面积密度较IR组增加。认为六胺银法显示心肌毛细血管可靠实用 ;IP减轻缺血后毛细血管的破坏 。

肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良

肾穿刺活检是目前诊断肾小球肾炎最可靠的手段，在。肾脏穿刺活检病理诊断中，六胺银染色套染Masson染色能精确显示病变肾小球内各种免疫复合物的形态与定位，对诊断肾小球疾病起着至关重要的作用。然而，此方法仍然存在制片时间长、染色效果不稳定等缺点，远不能满足临床需要。

自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中的应用

【目的】应用MICROMED自控微波仪以缩短六胺银染色法显示肾小球毛细血管或肾小球囊壁基底膜的染色时间 ,提高染色质量。【方法】对 46例肾穿切片染色实验分别采用自控微波仪和家用微波炉的处理作对照 ,以此促进六胺银染色 ,显示肾小球毛细血管或肾小球囊壁基底膜。【结果】应用家用微波炉加热的在 5次实验中 ,每次都出现六胺银染液变黑 ,所有的六胺银染液均不能重复使用 ,其中 2 9例有不同程度的银沉淀和银膜背景 ,优质片为 37% ( 17/ 4 6 )。应用自控微波仪对上述 46例肾穿的连续切片染色的实验中 ,均没出现银沉淀或银膜背景 ,优质片为 10 0 % ( 46 / 4 6 )。六胺银工作液染色常规需用 90min缩短至 6min。【结论】应用自控微波处理仪促进肾穿活检快速基底膜染色 ,较家用微波炉不仅可以大大加快染色速度 ,而且节省试剂 ,染色质量更加稳定可靠 ,是目前最为理想的一种快速染色方法。

光波变频微波辐射技术在真菌Crocott六胺银快速染色中的应用及体会

真菌侵犯人体,由真菌感染致病的病例数不断增加,如何准确认识真菌,显示真菌,给病理技术提出更高的要求。本科室经过多年实践,利用光波微波辐射技术在Crocott六胺银快速染色中对新形隐球菌、曲霉菌菌丝、毛霉菌菌丝、细胞胞质菌、马内菲青霉菌进行显示,得到了很好的染色效果,证明光波变频微波辐射技术应用在快速Crocott六胺银染色中具有一定的实用价值,对快速疾病诊断具有重要意义。

肾基底膜六胺银染色方法的改进

目的 改进基底膜染色效果 ,提高肾小球疾病的正确诊断水平。方法 运用改良六胺银染色方法。结果 以高温低浓度下之切片 ,肾基底膜结构层次清晰 ,染色效果最好。结论 本方法染色效果优于传统的六胺银染色法 ,改进了基底膜染色效果 。

六胺银套染马松三色染色在肾小球肾炎和肾小球病诊断中的应用

目的更好显示免疫复合物在肾小球肾炎和肾小球病中的形态和定位。方法采用六胺银套染马松三色染色。结果能更精确显示肾小球肾炎和肾小球病中各种免疫复合物的形态与定位,并可对肾小球内增生胶原成分区分为Ⅲ型和Ⅳ型。结论有利于病理医师观察,对提高肾小球病理诊断及科研工作具一定实用价值。