A群脑膜炎球菌多糖疫苗的分子量分布测定方法的建立

目的 建立高效分子排阻色谱-多角度激光光散射法(HPSEC-MALLS)测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗分子量分布的方法,并对不同批次样品的测定结果进行比较。方法 采用TSK gel G5000PWXL(7.8 mm×300 mm,5μm)凝胶色谱柱,柱温35℃,以0.2 mol/L氯化钠溶液为流动相,流速0.6 ml/min,多角度激光光散射检测器测定多糖分子量分布。结果 建立的方法精密度、准确度、重复性均良好,5批次样品重均分子量为480 560~512 780 Da。结论 HPSEC-MALLS可以用于A群脑膜炎球菌多糖疫苗的分子量测定,该方法准确度高,操作简便、快捷。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物，具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体，并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗稳定性研究

为确定A +C群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期 ,对该疫苗在不同储藏温度下的稳定性进行了系统研究。将C群多糖抗原放置在 37℃ ,A +C群多糖疫苗分别放置在 2～ 8℃、37℃和 5 6℃ ,定期取样 ,用琼脂糖CL - 4B凝胶柱层析后 ,测定Kd值在 0 .5以前的多糖回收率。结果表明 ,C群多糖抗原在 37℃保存 9周 ,A +C群多糖疫苗于 2～ 8℃保存 4年、37℃保存 88周、5 6℃保存 10个月 ,多糖抗原或多糖疫苗的Kd值小于 0 .4 ,多糖回收率大于 75 % ,符合规程要求 ;因而A +C群脑膜炎球菌多糖疫苗的有效期可定为在 2～ 8℃储藏条件下 3年

A群脑膜炎球菌多糖-重组蛋白Pep10结合物的制备及其免疫原性

目的制备A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)-重组蛋白Pep10结合物,并检测其免疫原性,探讨重组蛋白Pep10作为一种候选载体蛋白的可行性。方法GAMP经溴化氰(CNBr)活化后,共价接合己二酰肼(ADH)手臂,在碳二亚胺(EDAC)催化下与重组蛋白Pep10偶联,制备结合物GAMP-ADH-Pep10。纯化后免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP IgG抗体水平,并分析载体诱导的免疫抑制率。结果所制备的多糖衍生物GAMP-ADH及多糖-蛋白结合物GAMP-ADH-Pep10均具有GAMP抗原特异活性,免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,且接近GAMP-ADH-TT疫苗诱生的抗体水平,并能形成免疫记忆。重组蛋白Pep10诱导的免疫抑制率远低于TT诱导的免疫抑制率。结论制备的重组蛋白Pep10与A群脑膜炎球菌多糖偶联能发挥较强的载体效应,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。

W135群脑膜炎球菌发酵工艺的研究

为研究A、C、Y、W135群流脑多糖疫苗,针对W135群脑膜炎球菌的生长特性,采用国产50L发酵罐,针对流脑半综合液体培养基中葡萄糖浓度;培养温度、菌种接种浓度、pH、通氧量及搅拌速度等因素对W135群脑膜炎球菌生长的影响,选择最适的培养条件.结果表明,选择半综合培养基中补加1%的葡萄糖培养效果良好,菌种接种浓度直接影响多糖复合物产量;最适pH值6.5～7.5的范围可维持W135群链球菌快速生长;温度控制在36.5±0.2℃可得到较高的培养产物;培养过程中加大通气量及搅拌速度对培养结果有明显改善.确立了W135群脑膜炎球菌的最适培养条件,在确定培养条件后连续进行3批500L罐放大中试培养,达到规模化生产要求.

冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗安全性和免疫原性观察

为了评价冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗(MPV)的安全性和免疫原性,按随机、盲法的原则,评价疫苗免疫后不良反应发生率、抗体阳转率及抗体几何平均滴度(GMT)。将606名健康观察者分为2～5岁、6～12岁、13～17岁、18～60岁四个年龄组,结果显示,该疫苗全身反应发生率2.64%,局部反应发生率1.32%,四个年龄组疫苗免疫后杀菌抗体阳性率分别为100%、100%、99.3%和100%,免疫后A群杀菌抗体GMT分别为1:250.47、1:190.61、1:144.22和1:205.79,免疫后C群杀菌抗体GMT分别为1:273.33、1:551.18、1:788.26和1:809.81,冻干A+C群多糖疫苗在≥2岁人群中具有良好的安全性和免疫原性,建议推广使用A+C群MPV。

C群脑膜炎球菌多糖纯化方法的改进

将C群脑膜炎球菌粗多糖的纯化改进为用1:1容量冷酚提取的生产工艺。结果表明,改进后的方法去除蛋白质效果同样能够达到《中国药典》2005版(三部)的要求,总体结果优于改进前。同时能扩大处理量而降低了生产成本,适合规模化生产。

不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响

目的研究不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响。方法将A群脑膜炎球菌发酵液分成A、B两组,A组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,B组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。将C群脑膜炎球菌发酵液分成C、D两组,C组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,D组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。分别纯化获得荚膜多糖,用动态浊度法测定荚膜多糖中内毒素的含量。结果 A、C两组荚膜多糖中内毒素含量显著低于B、D两组荚膜多糖中的内毒素含量(P<0.05)。结论使用不同浓度的甲醛杀菌,对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素的含量有显著影响。较高浓度的甲醛利于菌体细胞的固定,从而防止细菌自溶释放内毒素,因而高浓度的甲醛能够减少其内毒素的含量,提高了产品质量。

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证。结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部（2010年版）中＂毛细管柱顶空进样等温法＂,优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气（高纯氮气）流量1.3 m L/min,尾吹气（高纯氮气）流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10^-6-5×10^-5范围内具有良好的线性关系（r〉0.99）。丙酮的平均回收率及相对标准偏差（RSD）分别为86.05%-105.11%及2.1%-9.5%,检测限为2×10^-6,定量限为3×10^-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。

A+C群脑脊髓膜炎球菌多糖菌苗生产工艺与内毒素含量研究

A群及C群流脑多糖抗原用 10 0 0 0 0×g离心或不经超速离心处理 ,经用鲎试验法测定内毒素含量 ,2种工艺生产的A群及C群流脑多糖抗原的内毒素含量均很低。用未经超速离心处理的A群及C群流脑多糖抗原制成的A +C群流脑多糖菌苗 ,经鲎试验法测定 ,内毒素含量也很低 ;经家兔升温法进行热原质试验 ,家兔体温未明显升高。证明A +C群流脑多糖菌苗生产工艺不经 10 0 0 0 0×g离心去除内毒素步骤是可行的。所制备的流脑多糖抗原内毒素含量符合要求。

C群流脑多糖菌苗唾液酸含量测定试验

C群脑膜炎球菌多糖菌苗是我们近年开发的一种新制品 ,其中唾液酸 (SA)是该制品的有效成份之一。为了严格控制该制品的质量 ,经反复试验 ,对比各种试验条件 ,选择出较为理想的测定SA方法———改良法。该法与Svennerholm氏法比较 ,其标准曲线变异系数 (cv % )为 0 0 3% ,低于Svennerholm氏法 (0 31% ) ;其回收率平均为10 0 6 2 %。与中检所方法比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,对 4批样品进行 6次重复性试验 ,结果表明 ,该法重复性好 ,操作简便 ,结果可靠 ,实验周期短 ,适于同类制品的SA含量测定。

不同剂量A群脑膜炎球菌多糖菌苗的反应

应用30和50μg A 群脑膜炎球菌多糖菌苗,接种不同年龄组儿童和青少年、观察其全身和局部反应及大面积普种的异常反应。结果表明:接种30和50μg 菌苗后全身和局部反应轻微,两种剂量的接种反应无差别,仅有两个点接种两个不同年龄组时出现50μg 的全身及局部反应高于30μg。普种50多万人均未发生异常反应。

免疫沉淀法用于A群流脑多糖菌苗的鉴别试验

本文将免疫沉淀法——免疫双扩散及对流免疫电泳法用于Ａ群流脑多糖菌苗的鉴别试验。并对其检测Ａ群流脑多糖菌苗的特异性及敏感性与传统采用的间接血凝抑制试验法进行了比较。试验结果表明，免疫沉淀法准确、特异性好、操作简便、经济。完全符合ＷＨＯ规程及中国规程中对《Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程》鉴别试验的要求。因此可望替代现行的间接血凝抑制试验。

动态浊度法检测C群脑膜炎球菌多糖原液细菌内毒素含量

采用动态浊度法对多批C群脑膜炎球菌多糖原液进行细菌内毒素含量检测,同时设供试品干扰试验,并与凝胶限量法进行对比分析。从而建立了C群脑膜炎球菌多糖原液细菌内毒素定量检测方法和质量控制指标。

A群脑膜炎球菌多糖菌苗固体总量试验

本试验采用５０℃干烤法在不同实验条件下对Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗的固体总量进行了测定，并对其结果进行了比较。实验结果表明：（１）１ｍ１，２ｍｌ和４ｍ１取样量的固体总量之间无显著性差异。（２）采用２ｍｌ取样量用不同规格称量瓶和不同规格吸管对测定结果无明显影响。（３）采用１ｍ１、２ｍｌ和４ｍｌ取样量试验结果重复性均好。但从标准差及变异系数看，取样２ｍｌ或４ｍｌ者，试验误差更小，结果更为准确。

流行性脑脊髓膜炎53例临床及流行病学分析

目的总结合肥市2004年上半年流行性脑脊髓膜炎(下称流脑)疫情动态,流行趋势,为今后流脑防治工作积累经验。方法对53例流脑患者病原学、临床流行病学等进行回顾性分析。结果53例患者中15岁以下38例,占71.7%;在2～4月份发病46例,占86.8%。随机抽取20例患者脑脊液及血清送检查,结果培养阳性14例,占70%,均为脑膜炎双球菌C群菌株。结论2004年上半年合肥市局部流行的流脑,主要病原体为脑膜炎双球菌C群菌株,发病有明显的季节性,且15岁以下儿童易感。因此,今冬明春有必要对易感人群接种A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗(简称多糖菌苗)进行预防。

紫外可见分光光度法测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷的含量

目的测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗中的磷含量。方法采用紫外-可见分光光度法测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗中的磷含量,以标准磷溶液系列的浓度,对吸收光度作直线回归,然后将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程,求出其相应磷含量。结果在820nm的波长处分别测定吸光度,平均值112mg/g(规定磷不低于80mg/g)。结论本方法灵敏、准确、可靠,对测定磷含量有一定参考价值。

干烤法测定C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量的不确定度评定

目的建立干烤法测定C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量的不确定度分析方法。方法分析C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量测定过程中引入的不确定度,并对各个不确定度的分量进行评估。结果由各分量不确定度计算合成不确定度,最终给出测定结果在95%置信区间的扩展不确定度。结论 C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量测量不确定度主要由取样及干燥过程引入,在试验中须严格控制以减小不确定度。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在广东省2~6岁儿童的免疫原性和免疫持久性研究

目的评价A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗(Group A and group C meningococcal polysaccharide vaccine,MPV-AC)在广东省2~6岁儿童接种后的免疫原性和免疫持久性。方法选择广东省高州市529例2~6岁儿童作为研究对象,接种1剂次MPV-AC。分别采集免疫前、免疫后1个月、免疫后2年血清。采用血清杀菌力试验检测血清抗体水平,评价其免疫原性和免疫持久性。结果受试者免疫后1个月A群、C群抗体阳转率分别为89.60%和90.93%;受试者免疫前、免疫后1个月和免疫后2年A群抗体阳性率分别为15.69%、90.36%和19.55%,C群抗体阳性率分别为5.48%、92.25%、20.54%。受试者免疫后1个月A群、C群抗体几何平均滴度(GMT)与免疫前比差异有统计学意义(t=43.583,P<0.001;t=52.732,P<0.001),免疫后2年A群、C群抗体GMT与免疫前比差异有统计学意义(t=2.470,P值=0.014;t=7.126,P<0.001)。结论MPV-AC在2~6岁儿童中接种具有良好的免疫原性,在免疫后1个月能达到较好的保护效果,免疫后2年A群、C群抗体下降明显。