C组轮状病毒主要基因全片段扩增及武汉地方株Wu82的VP6和VP7编码基因序列分析

目的建立C组轮状病毒VP6、VP7、VP4和NSP4基因全片段扩增方法;明确武汉地方株Wu82与其他毒株的系统发生关系。腹泻患者大便。方法PAGE筛查病毒;设计9对引物RT-PCR扩增VP6、VP7、VP4和NSP4基因;VP6、VP7序列及亲水位点分析。结果Wu82VP6和VP7基因核酸序列与其它人C组轮状病毒相比同源性分别为98.45%～97.12%和99.34%～94.83%。结论C组轮状病毒基因非常保守,进化缓慢。2001年武汉地方株Wu82与1995年武汉地方株208株相比,VP7和VP6抗原表位存在差异。

2015～2016年我国东北三省地区猪A、B、C群轮状病毒流行情况调查

为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况。利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的108份仔猪腹泻病料和15份健康仔猪粪便样品进行分析。结果显示:黑龙江省GARV阳性率为47.4%,GBRV未检出,GCRV阳性率为5.3%;辽宁省GARV阳性率为51.5%,GBRV阳性率为3.03%,GCRV阳性率为6.1%;吉林省GARV的阳性率为21.1%,GBRV阳性率为7.1%,GCRV阳性率7.1%;并且存在GARV/GCRV混合感染的情况,因此,我国东北三省地区猪轮状病毒病的主要病原是GARV,但GBRV和GCRV也是幼龄猪群潜在的重要致病风险。为我国猪轮状病毒病的提前预防和综合防控提供流行病学参考数据。

猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用

为建立同时快速检测猪A群轮状病毒(GARV)、猪C群轮状病毒(GCRV)和猪星状病毒(AstV)的三重RT-PCR检测方法,根据GenBank中公布的序列进行病毒基因区同源性分析,然后使用Primer Premier 5.0软件分别设计了GARV、GCRV的VP6基因和AstV的ORF2基因特异性引物,预期扩增片段的大小分别为229、166和410bp。在这3种病毒单项RT-PCR技术的基础上,建立了GARV、GCRV和AstV的多重RT-PCR检测方法,并用该方法检测30份四川省仔猪腹泻粪样。结果显示,GARV、GCRV、AstV的阳性检出率分别为26.7%、13.3%、16.7%,本方法与这3种病毒的单项RT-PCR检测结果的符合率分别为100%、100%、83%,整体符合率达94.3%,特异性为100%。结果表明,本试验建立的多重RTPCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于GARV、GCRV和AstV的同时检测。

口服猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌对BALB/c小鼠的免疫保护作用

将轮状病毒pW425et-Vp4乳酸菌重组质粒口服免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时间眼球采血脱臼处死,收集小鼠血清、脾细胞及肠道内容物,用ELISA方法检测血清IgG水平,用试剂盒检测肠黏膜SIgA水平,以流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群和CD19+B细胞亚群的变化情况,最后进行攻毒试验。结果显示,pW425et-Vp4基因工程乳酸菌口服免疫小鼠血清IgG及肠黏膜SIgA水平较对照组有明显差异,且S/N>2.0,CD4+/CD8+比值显著高于对照组,且比值大于2:1;表明猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌重组表达质粒可以增强小鼠机体免疫保护能力。

P[5]型猪C组轮状病毒Por2011 VP8*蛋白的表达及糖结合特征研究

轮状病毒(Rotaviruses,RVs)是引起人和动物病毒性腹泻的重要病原,本文旨在研究猪C组轮状病毒(Group C rotaviruses,RVCs)VP8*蛋白的受体结合特征。本研究合成一株P[5]型猪C组轮状病毒(Por2011)的VP8*基因,经体外原核表达,采用亲和层析纯化获得VP8*目的蛋白,利用糖点阵实验、寡糖结合实验研究其寡糖结合特征,再通过序列比对和突变分析确定其潜在受体结合位点。结果显示猪C组轮状病毒Por2011 VP8*蛋白与P1抗原特异性结合,但第108位氨基酸突变后的蛋白则不能与P1抗原结合。本研究表明猪C组轮状病毒的某些型别可能以P1抗原为潜在受体,该受体结合位点与人C组轮状病毒的受体结合位点较为接近,这为猪C组轮状病毒感染机制的研究提供了一定的依据和基础。

人和动物C组轮状病毒VP8*蛋白糖结合特征的研究

目的研究人和动物C组轮状病毒VP8^*蛋白与糖的结合特征,为人和动物C组轮状病毒感染机制提供基础和依据.方法利用原核表达系统表达并纯化人和动物病毒毒株的VP8^*蛋白,通过糖点阵实验、寡糖结合实验及血凝实验等方法研究其糖结合特征.结果人C组轮状病毒sz94 VP8^*蛋白不仅与A糖结合,还与黏蛋白核心mucin core 4糖结合.狗C组轮状病毒糖点阵实验显示,可以结合A糖,人和狗C组轮状病毒可以凝集A型红细胞,猪P[5]、P[8]、P[19]、P[21]与实验中的寡糖都没有结合,也都没有凝集各型红细胞.结论黏蛋白核心在人C组轮状病毒可能是潜在的粘附分子,A型组织血型抗原可能也是某些动物C组轮状病毒的粘附分子,猪C组轮状病毒具体结合的糖类型还需进一步探索.

沙市婴幼儿腹泻中检出3株C群轮状病毒

1987～1988年在沙市165份婴幼儿急性腹泻标本中,用PAGE法检出轮状病毒37株(22.4％),其中3株为少见的轮状病毒,此种病毒经电镜观察,具有典型轮状病毒的形态结构,ELISA证实该病毒不具有A群和B群轮状病毒的群特异性抗原。RNA电泳分析表明,其基因组由11个双链RNA片段组成,电泳图型特殊,呈4:3:2:2的排列模式。上述试验表明,该病毒为世界上罕见的C群轮状病毒。免疫电镜证实,该病毒能被病人恢复期血清所凝集,提示该病毒是腹泻病儿的致病因子。