观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse tr...观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-Polymerase clain reaction,RT-PCR)的方法测定 GADD45基因的相对表达量,分析该基因的剂量、效应关系。照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,照射后4h达峰值,以后开始下降,但在24h仍未恢复到初始水平。展开更多
目的:研究人生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SVneo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用。方法:构建Gadd45...目的:研究人生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SVneo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用。方法:构建Gadd45α短发夹干扰RNA,以阴性对照组作为参照,转染人滋养细胞HTR8/SVneo,即分为实验组(si-Gadd45α)和阴性对照组(si-NC)进行实验;应用流式细胞仪检测转染效率,并应用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组细胞中Gadd45αm RNA和蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)显色法检测转染后各组细胞增殖能力;应用流式细胞仪对转染后各组细胞进行细胞凋亡分析;采用Transwell法检测转染后各组细胞迁移和侵袭能力;采用早孕绒毛外植体培养模型观察敲除Gadd45α基因后对绒毛外滋养细胞外生性迁移能力的影响;收集各组细胞培养上清液,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达,蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of MMPs,TIMPs)的表达。结果:流式细胞仪检测转染效率约为90%;转染后实验组较对照组Gadd45αm RNA的表达量约降低80%,蛋白表达水平约下降70%,差异均有统计学意义(P<0.01),证明干扰Gadd45α表达成功。MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,结果显示实验组和对照组细胞增殖和凋亡均无统计学差异(P>0.05)。Transwell实验表明干扰Gadd45α后HTR8/SVneo侵袭能力明显增加,约为对照组的1.65倍;迁移能力也明显增加,约为对照组的2倍,均有统计学差异(P<0.01)。早孕绒毛外植体培养结果显示:与阴性对照组的绒毛相比,Gadd45α干扰片段处理的绒毛外滋养细胞外生性迁移的距离明显增加,差异有统计学意义(P=0.005)。明胶酶谱实验结果显示干扰Gadd45α后基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和MMP-9的活性增强,而Western blot检测发现其抑制因子TIMP-1和TIMP-2相应地下降(P<0.01)。结论:推测Gadd45α可能是通过调控蛋白酶的活性来抑制滋养细胞的迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。展开更多
目的:检测生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(growth arrest and DNA damage inducible protein 45g,GADD45g)基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓标本和细胞系中的表达情况及其表达水平与AML患者预后的关系,探究过表...目的:检测生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(growth arrest and DNA damage inducible protein 45g,GADD45g)基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓标本和细胞系中的表达情况及其表达水平与AML患者预后的关系,探究过表达GADD45g对AML细胞增殖、凋亡、衰老、周期、分化和药物敏感性的影响。方法:选取中国医学科学院血液病医院2013年1月至2016年12月初次诊断为AML患者的骨髓标本共27例,用Real-time PCR和Western blotting检测AML患者、正常对照骨髓单个核细胞以及AML细胞系中GADD45g mRNA和蛋白水平的表达情况。在两个相互独立的数据集GSE10358和GSE425-GPL317中分析GADD45g表达与AML患者的总生存率(overall survival,OS)和无事件生存率(event-free survival,EFS)的相关性。构建GADD45g过表达慢病毒并感染AML细胞系U937、THP-1和Molm-13,通过生长曲线、集落形成、β-半乳糖苷酶染色、流式细胞术分析Annexin V/7AAD染色和PI染色等方法分析GADD45g过表达对AML细胞增殖、克隆形成、衰老、凋亡、周期、分化和化疗药物敏感性的影响。结果:GADD45g在AML患者和AML细胞系中的表达水平显著低于正常对照(均P<0.01)。低表达GADD45g的AML患者的OS(P<0.05)和EFS较高表达患者显著缩短(均P<0.05)。在AML细胞系中过表达GADD45g能显著抑制细胞增殖、集落形成,显著促进细胞的凋亡、衰老、周期阻滞和分化,增强了细胞对化疗药物敏感性(P<0.05或P<0.01)。结论:GADD45g基因在AML患者骨髓组织和AML细胞系中低表达,对AML细胞系有显著的全方位的抑制作用,其表达水平对AML具有预后判断价值。展开更多
基因组完整性对于细胞和组织功能至关重要,这种稳态会不断地受到内源性和外源性应激刺激的影响。干细胞对这些应激刺激十分敏感,其DNA会发生不同程度的损伤,诱导干细胞内固有的DNA修复机制。组织特异性干细胞是局部环境中的多能群体,在...基因组完整性对于细胞和组织功能至关重要,这种稳态会不断地受到内源性和外源性应激刺激的影响。干细胞对这些应激刺激十分敏感,其DNA会发生不同程度的损伤,诱导干细胞内固有的DNA修复机制。组织特异性干细胞是局部环境中的多能群体,在其整个生命过程中负责维持组织或者系统的完整性。组织特异性干细胞在受到应激刺激之后,能通过某些反应修复损伤或激活程序性凋亡,从而减少由DNA损伤导致潜在的突变。生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α(growth arrest and DNA damage-45 alpha,Gadd45α)是细胞周期调控因子和生长抑制因子,其表达受到多种因素的调节,参与多种细胞DNA损伤反应。Gadd45α蛋白在组织特异性干细胞DNA损伤中发挥重要的作用。Gadd45α蛋白通过结合其他相关蛋白质控制细胞周期检测点、参与DNA修复和调控信号转导,是维持基因组稳定性的重要组成部分。该文综述了Gadd45α在胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞、肠干细胞等干细胞DNA损伤中的作用以及涉及的信号通路,为进一步探讨Gadd45α在细胞中潜在的作用以及利用Gadd45α进行疾病治疗提供理论依据。展开更多
文摘基因组完整性对于细胞和组织功能至关重要,这种稳态会不断地受到内源性和外源性应激刺激的影响。干细胞对这些应激刺激十分敏感,其DNA会发生不同程度的损伤,诱导干细胞内固有的DNA修复机制。组织特异性干细胞是局部环境中的多能群体,在其整个生命过程中负责维持组织或者系统的完整性。组织特异性干细胞在受到应激刺激之后,能通过某些反应修复损伤或激活程序性凋亡,从而减少由DNA损伤导致潜在的突变。生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α(growth arrest and DNA damage-45 alpha,Gadd45α)是细胞周期调控因子和生长抑制因子,其表达受到多种因素的调节,参与多种细胞DNA损伤反应。Gadd45α蛋白在组织特异性干细胞DNA损伤中发挥重要的作用。Gadd45α蛋白通过结合其他相关蛋白质控制细胞周期检测点、参与DNA修复和调控信号转导,是维持基因组稳定性的重要组成部分。该文综述了Gadd45α在胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞、肠干细胞等干细胞DNA损伤中的作用以及涉及的信号通路,为进一步探讨Gadd45α在细胞中潜在的作用以及利用Gadd45α进行疾病治疗提供理论依据。
