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Noggin versus basic fibroblast growth factor on the differentiation of human embryonic stem cells 被引量:2
1
作者 Yan Zhang Junmei Zhou +2 位作者 Zhenfu Fang Manxi Jiang Xuejin Chen 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第23期2171-2177,共7页
The difference between Noggin and basic fibroblast growth factor for the neural precursor differen- tiation from human embryonic stem cells has not been studied. In this study, 100 tJg/L Noggin or 20 IJg/L basic fibro... The difference between Noggin and basic fibroblast growth factor for the neural precursor differen- tiation from human embryonic stem cells has not been studied. In this study, 100 tJg/L Noggin or 20 IJg/L basic fibroblast growth factor in serum-free neural induction medium was used to differen- tiate human embryonic stem cells H14 into neural precursors using monolayer differentiation. Two weeks after induction, significantly higher numbers of neural rosettes formed in the Noggin-induced group than the basic fibroblast growth factor-induced group, as detected by phase contrast micro- scope. Immunofluorescence staining revealed expression levels of Nestin, [3-111 Tubulin and Sox-1 were higher in the induced cells and reverse-transcription PCR showed induced cells expressed Nestin, Sox-1 and Neurofilament mRNA. Protein and mRNA expression in the Noggin-induced group was increased compared with the basic fibroblast growth factor-induced group. Noggin has a greater effect than basic fibroblast growth factor on the induction of human embryonic stem cell differentiation into neural precursors by monolayer differentiation, as Noggin accelerates and in- creases the differentiation of neural precursors. 展开更多
关键词 neural regeneration stem cells basic fibroblast growth factor NOGGIN human embryonic stem cells neural precursors neural differentiation grants-supported paper NEUROREGENERATION
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Changes in expression and secretion patterns of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway molecules during murine neural stem/progenitor cell differentiation in vitro 被引量:4
2
作者 Jiang Lu Kehuan Lu Dongsheng Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第22期1688-1694,共7页
In the present study, we investigated the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway related factors in the process of in vitro hippocampal neural stem/progenitor cell differ... In the present study, we investigated the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway related factors in the process of in vitro hippocampal neural stem/progenitor cell differentiation from embryonic Sprague-Dawley rats or embryonic Kunming species mice, using fluorescent quantitative reverse transcription-PCR and western blot analyses. Results demonstrated that the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 was similar to fibroblast growth factor receptor 1 expression but not to other fibroblast growth factor receptors. Enzyme-linked immunosorbent assay demonstrated that fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway protein factors were secreted by neural cells into the intercellular niche. Our experimental findings indicate that fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog expression may be related to the differentiation of neural stem/progenitor cells. 展开更多
关键词 neural stem cells neural progenitor cells fibroblast growth factor 8 Sonic Hedgehog signalpathway SECRETION dynamic differentiation NEURONS neural regeneration
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影响肌腱干细胞分化的因素 被引量:1
3
作者 逯静薇 吕可馨 +3 位作者 蒋莉 陈艺萱 石厚银 李森 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第13期2098-2104,共7页
背景:肌腱病是一种肌肉骨骼疾病,以疼痛和活动能力下降为特征,伴有胶原蛋白紊乱和血管增生的病理变化。肌腱病常易发生在运动员、体力劳动者和老年人身上。肌腱病的机制之一是“失败的愈合反应”,而导致失败愈合反应的部分原因是肌腱干... 背景:肌腱病是一种肌肉骨骼疾病,以疼痛和活动能力下降为特征,伴有胶原蛋白紊乱和血管增生的病理变化。肌腱病常易发生在运动员、体力劳动者和老年人身上。肌腱病的机制之一是“失败的愈合反应”,而导致失败愈合反应的部分原因是肌腱干细胞的错误分化。目的:通过阅读相关文献,介绍肌腱干细胞的特性,总结影响肌腱干细胞向肌腱细胞分化的因素以及导致肌腱干细胞错误分化(分化为脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞)的因素,同时阐述肌腱干细胞在临床中的应用局限。方法:检索PubMed及Web of Science数据库中相关文献,检索词为“Tendon Stem/Progenitor Cells,Tendinopathy,Tendon injury,differentiation”,通过阅读筛选出相关文献,最终纳入109篇文献进行结果分析。结果与结论:①肌腱干细胞是可以自发分化为肌腱的一种干细胞,它具有自我更新、克隆和多向分化的能力,不同的外部条件作用于肌腱干细胞可以导致其向不同方向分化。调节肌腱干细胞命运的具体因素并不确定。当肌腱中的干细胞更新和分化出现异常时,会导致肌腱愈合失败,进而导致肌腱病。②衰老、细胞外基质成分的变化、过度的机械刺激、前列腺素E2和白细胞介素6以及白细胞介素10和一些系统性疾病可能对调控肌腱干细胞的错误分化有重要意义。③促进肌腱干细胞向腱细胞分化的可能有利因素有:一些生长因子和细胞因子、适度的机械刺激和细胞外基质的地形、低氧张力、药物以及某些转录基因和蛋白。④目前最为理想的治疗手段则是对内源性肌腱干细胞进行调节,或者外源性肌腱干细胞刺激内源性肌腱干细胞的增殖分化。⑤未来研究进一步了解调节肌腱干细胞错误分化的因素,可深入了解肌腱病的发病机制并找到治疗靶点,阐述诱导肌腱干细胞向肌腱分化则可促进其在组织工程中的应用。 展开更多
关键词 肌腱干细胞 干细胞 肌腱病 肌腱损伤 肌腱愈合 肌腱干细胞分化 生长因子 组织工程 影响因素 综述
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巨噬细胞迁移抑制因子促进人胚胎干细胞分化为腹侧中脑多巴胺能神经祖细胞 被引量:1
4
作者 郑晓晗 冯晓丽 +7 位作者 胡兰 高仕君 魏艳召 黄婷 孙圣童 魏绪芳 王埮 赵振强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第33期5348-5356,共9页
背景:细胞替代疗法是一种可以治疗帕金森病的非常有前景的方法。目前将人多能干细胞进行神经分化的主要方案是“双SMAD”抑制方案,利用阻断糖原合酶激酶3β来激活WNT通路信号,随后利用音猬因子信号与骨形态发生蛋白信号之间的调控相结合... 背景:细胞替代疗法是一种可以治疗帕金森病的非常有前景的方法。目前将人多能干细胞进行神经分化的主要方案是“双SMAD”抑制方案,利用阻断糖原合酶激酶3β来激活WNT通路信号,随后利用音猬因子信号与骨形态发生蛋白信号之间的调控相结合,可以精确地控制人多能干细胞从底板区域到顶板区域特异性的细胞命运。巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一类具有独特结构的多效免疫调节细胞因子,在多项研究中证明MIF对神经发育和分化非常重要。然而,MIF是否参与诱导干细胞的分化还是未知的。目的:在“双SMAD”抑制分化方案的基础上,通过在培养基中添加不同浓度MIF及其抑制剂(S,R)-3-(4-羟基苯基)-4,5-二氢-5-异噻唑乙酸甲酯(ISO-1),观察其对人胚胎干细胞分化为中脑多巴胺能祖细胞的影响,以期寻找解决人胚胎干细胞分化为中脑多巴胺能祖细胞过程异质性问题的新途径。方法:CCK8检测添加不同浓度MIF和ISO-1培养人胚胎干细胞的存活情况。免疫荧光法检测人胚胎干细胞上MIF受体CD74、CD44、CXCR7的表达。在胚胎干细胞分化16 d后,通过RT-qPCR和Western blot分别检测腹侧中脑标志物LMX1A、FOXA2、EN1、前脑标记物FOXG1、后脑标记物HOXA2、中脑基板标记物PAX6和Wnt1/β-catenin信号通路转录因子SOX6的表达水平。同时,通过免疫荧光法检测LMX1A、FOXA2、EN1、MAP2的表达。将胚胎干细胞继续分化到42 d后用免疫荧光法检测LMX1A、FOXA2、TH和GIRK2在多巴胺能神经元中的表达。结果与结论:(1)MIF在人胚胎干细胞内表达,其相关受体CD44和CXCR7也表达,但CD74不发生表达;(2)添加MIF后,促进了LMX1、FOXA2、EN1的蛋白表达,促进了LMX1、FOXA2的基因表达,同时明显抑制了FOXG1和HOXA2以及PAX6的基因与蛋白表达,有效抑制了分化的异质性;(3)添加MIF后,多巴胺能神经祖细胞中SOX6并未如预期那样高表达,反而在基因层面表达下降,而其抑制剂ISO-1则使SOX6表达在基因水平上轻度升高;(4)该研究证明了MIF在人胚胎干细胞的多巴胺能分化潜能与腹侧中脑命运决定中起着重要作用,MIF的干预进一步优化了神经诱导的区域定位。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 巨噬细胞迁移抑制因子 帕金森病 多巴胺能神经祖细胞 分化
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小鼠胚胎干细胞诱导为肝细胞的研究 被引量:6
5
作者 蒯小玲 萧树东 +1 位作者 丛笑倩 李秀兰 《胃肠病学》 2003年第1期6-10,共5页
背景:胚胎干细胞(ES细胞)是从体外受精胚囊的内细胞团分离建立的、具有发育全能性的细胞系,在特定条件下可向多种细胞分化,是细胞移植治疗很有前途的细胞来源。目的:探明ES细胞是否能被诱导分化为肝细胞,并探索小鼠ES细胞诱导分化为肝... 背景:胚胎干细胞(ES细胞)是从体外受精胚囊的内细胞团分离建立的、具有发育全能性的细胞系,在特定条件下可向多种细胞分化,是细胞移植治疗很有前途的细胞来源。目的:探明ES细胞是否能被诱导分化为肝细胞,并探索小鼠ES细胞诱导分化为肝细胞的分化条件。方法:在ES细胞培养液中分别加入肝细胞生长因子(HGF)、β-神经细胞生长因子(NGF)和维甲酸(RA)以及与小鼠胎肝细胞共培养,观察分化细胞的形态学变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测白蛋白和转甲状腺蛋白mRNA水平的表达,免疫组化法检测甲胎蛋白和α1-抗胰蛋白酶蛋白水平的表达。结果:ES细胞培养液中加入HGF和β-NGF 15天后,分化出较多的上皮样细胞,并检测出白蛋白、转甲状腺蛋白mRNA水平的表达和甲胎蛋白、α1-抗胰蛋白酶蛋白水平的表达,表明ES细胞己诱导分化为肝细胞。ES细胞与胎肝细胞共培养2天后,分化出单一形态的上皮细胞,同样有上述肝细胞标志物的阳性表达。RA诱导出的细胞除转甲状腺蛋白mRNA外,无其他肝细胞标志物的阳性表达。结论:在HGF和β-NGF的作用下,有部分小鼠ES细胞被诱导为肝细胞,RA则无此作用。共培养方法也能诱导出肝细胞标志物阳性的细胞,并且细胞形态较单一。小鼠ES细胞有向肝细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 肝细胞 胚胎干细胞 体外受精 胚囊 细胞培养液 肝细胞生长因子 HGF β-神经细胞生长因子 NGF 维甲酸
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碱性成纤维细胞生长因子对胚胎大鼠神经干细胞增殖分化的影响 被引量:4
6
作者 崔景彬 陈正跃 +2 位作者 李开荣 任秀花 阎爱华 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期435-436,T002,共3页
目的 探讨分离、培养及鉴定胚胎大鼠神经干细胞 (NSCs)方法 ,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NSCs增殖、分化的影响。方法 从大鼠胚胎脑组织中分离出NSCs,用bFGF和胎牛血清诱导其增殖和分化 ,予BrdU以标记分裂细胞 ,采用免疫细胞... 目的 探讨分离、培养及鉴定胚胎大鼠神经干细胞 (NSCs)方法 ,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NSCs增殖、分化的影响。方法 从大鼠胚胎脑组织中分离出NSCs,用bFGF和胎牛血清诱导其增殖和分化 ,予BrdU以标记分裂细胞 ,采用免疫细胞化学鉴定NSCs和分化神经细胞。结果 大鼠胚胎脑NSCs在无细胞因子和胎牛血清的培养基中无新生细胞形成 ,但能在bFGF和血清诱导下形成克隆 ,并产生nestin和Br dU阳性细胞 ,贴壁后分化为神经元和星形胶质细胞。结论 该方法从大鼠胚胎大脑分离出的细胞具有NSCs特性 ,即自我更新和多向分化潜能 ; 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞培养 碱性成纤维细胞生长因子 细胞分化 胚胎大鼠
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血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞的造血分化 被引量:4
7
作者 李府 沈柏均 +4 位作者 刘星霞 郑立波 侯怀水 时庆 马秀峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1602-1605,共4页
目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ES-D3向造血分化的能力。方法:先将ES-D3形成拟胚体,将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF+SCF的培养基中。实验分6组,分别为VEGF 5μg/L组、VEGF 10μg/L组、VEGF 20μg/L... 目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ES-D3向造血分化的能力。方法:先将ES-D3形成拟胚体,将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF+SCF的培养基中。实验分6组,分别为VEGF 5μg/L组、VEGF 10μg/L组、VEGF 20μg/L组、VEGF 5μg/L+SCF组、VEGF 10μg/L+SCF组、VEGF20μg/L+SCF组,同时设不加因子的自发分化对照组。RT-PCR检测造血转录基因GATA-2和早期造血细胞基因c-k it和β-H1的表达,流式细胞仪检测CD34+细胞,甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力。结果:经过1周的诱导培养,实验组生成的细胞可以表达GATA-2、c-k it和β-H1,CD34+细胞的比例也升高,并可形成造血祖细胞的集落。从诱导生成CD34+细胞的比例和生成的集落数量看,VEGF联合SCF组的诱导效率要高于VEGF单用组和对照组,其中以VEGF 20μg/L+SCF组和VEGF 10μg/L+SCF组的诱导效率最高。结论:VEGF能够促进ESC的早期造血分化,尤以与SCF合用时,其诱导效率更高。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 内皮生长因子 拟胚体 分化
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VEGF、bFGF联合应用对胎鼠大脑皮质神经干细胞分化的影响 被引量:3
8
作者 李政 王江 +3 位作者 龙在云 王莉 曾琳 伍亚民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期372-375,共4页
目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合应用对胎鼠大脑皮质神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法取孕14dSD大鼠,收集胎鼠大脑皮质NSCs,采用无血清培养基传代培养,取P3代细胞,分别加入200μg/LVEGF和(或)20... 目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合应用对胎鼠大脑皮质神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法取孕14dSD大鼠,收集胎鼠大脑皮质NSCs,采用无血清培养基传代培养,取P3代细胞,分别加入200μg/LVEGF和(或)20μg/LbFGF进行诱导分化,并设对照组(不加VEGF和bFGF),7d后采用免疫细胞化学方法检测巢蛋白(Nestin)、β微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果从胎鼠大脑皮质中分离的细胞在体外悬浮生长,形成致密的球形细胞团,传代后能形成新的细胞球,免疫细胞化学染色显示细胞球nestin表达阳性。诱导分化后的细胞部分表达β-tubulin-Ⅲ,部分表达GFAP。与对照组比较,VEGF和(或)bFGF均可使NSCs向神经元方向分化的比例增加,其中VEGF+bFGF联合作用后NSCs的β-tubulin-Ⅲ阳性率(80.3%)最高,GFAP阳性率(18.6%)最低。bFGF作用后NSCs的β-tubulin-Ⅲ阳性率(60.4%)和GFAP阳性率(38.5%)与VEGF作用后(分别为60.3%、38.7%)比较无统计学差异(P>0.05)。结论VEGF和bFGF均可促进NSCs向神经元分化,且二者具有协同效应。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 细胞分化 血管内皮生长因子类 成纤维细胞生长因子-2
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肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究 被引量:2
9
作者 傅玉如 陈玥 +1 位作者 方天翎 闵军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期898-900,共3页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)体外定向分化为肝细胞的能力.方法对ESC体外悬浮培养5~7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况.观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)体外定向分化为肝细胞的能力.方法对ESC体外悬浮培养5~7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况.观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿(ICG)染色情况.结果 ESC自主分化难以控制.HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化.表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性.结论 HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用. 展开更多
关键词 胚胎于细胞 肝细胞生长因子 细胞分化
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维甲酸和EGF对大鼠脑胚胎神经干细胞增殖和分化的影响 被引量:2
10
作者 崔景彬 鄢文海 +2 位作者 王建枝 李开荣 王俊萍 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期81-85,共5页
目的 观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞... 目的 观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞。结果  2 0ng/mlEGF和 1μmol/LRA处理的培养细胞均显示增殖效应 ,但EGF处理组增殖速度明显高于RA组 ,悬浮细胞中有大量nestin和BrdU阳性细胞。用EGF和EGF/RA诱导的神经元分化率分别为 17%和 3 1% ,而RA处理的神经元分化率显著升高至 89%。由EGF、EGF/RA和RA诱导的星形胶质细胞分化率分别为 83 %、 69%和 11%。结论 EGF主要促进神经干细胞增殖并主要诱导星形胶质细胞的生成 ,RA主要诱导神经干细胞向神经元分化 。 展开更多
关键词 维甲酸 神经干细胞 表皮生长因子 细胞分化 胚胎大鼠 细胞增殖
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肝细胞生长因子促进人胚胎干细胞向神经前体细胞分化 被引量:3
11
作者 胡智兴 耿菊敏 梁道明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期730-736,共7页
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)诱导人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为神经前体细胞(NPs)的作用。方法:诱导拟胚体(EBs)生成,随机将EBs分为正常对照组、G5 supplement组、HGF组和HGF+G5 supple-ment组,悬浮培养诱导7d,转移至多聚赖氨酸/层... 目的:研究肝细胞生长因子(HGF)诱导人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为神经前体细胞(NPs)的作用。方法:诱导拟胚体(EBs)生成,随机将EBs分为正常对照组、G5 supplement组、HGF组和HGF+G5 supple-ment组,悬浮培养诱导7d,转移至多聚赖氨酸/层黏连蛋白(20mg/L)包被的24孔培养板中继续培养7-10d。免疫荧光染色鉴定NPs和体外分化能力,流式细胞仪检测各组巢蛋白(nestin)阳性细胞的比例,RT-PCR检测音猥因子(Shh)对NPs的脑区标记基因表达的影响。结果:HGF+G5可诱导hESCs定向分化为NPs,HGF+G5组的nestin阳性的NPs比例(87.3%±3.9%)显著高于其它组(P<0.05),NPs具有分化成神经元、少突和星形胶质细胞的能力;HGF+G5诱导时间对于NPs的分化有影响,7d时nestin+细胞比例达到最大;Shh可使NPs表达腹侧化基因,后脑标记表达上调,而前脑标记表达下调。结论:含HGF和G5的无血清神经分化体系可有效诱导hESCs神经分化,是研究神经诱导的良好体系。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 胚胎干细胞 神经前体细胞
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bFGF诱导MEF生成的条件培养基对人胚胎干细胞生长的影响 被引量:5
12
作者 周轶平 ROCHAT Anne +4 位作者 HATZFELD Antoinette PEIFFER Isabelle BARBET Romain HATZFELD Jacques 李玛琳 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期193-199,共7页
为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)... 为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)为阴性对照,同样浓度的bFGF添加于SR培养基(bFGF-SR)为空白对照。通过形态学特征和碱性磷酸酶染色法对hES2的生长分化状态进行评估。结果发现,培养一周内,未分化hES2克隆的比率,阴性对照为23%;空白对照组为13%-31%。当bFGF浓度为0.1,0.3,1,4ng/ml时,bFGF-MCM组未分化克隆的比率分别为44%,74%,77%和78%,与阴性和空白对照组相比,未分化克隆的比率均有不同程度提高,差异有统计学意义(P<0.01)。该结果揭示了经bFGF诱导的MEF细胞所产生的条件培养基具备了维持hES细胞正常生长而不分化的能力。对bFGF-MCM的深入分析,有望更好地了解hESC的生长与分化机制。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠胚胎成纤维细胞 人胚胎干细胞 条件培养基 分化抑制
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影响动物胚胎干细胞克隆与分化因素的研究进展 被引量:1
13
作者 安立龙 高志敏 +2 位作者 效梅 杨奇 窦忠英 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第2期106-109,118,共5页
系统介绍了在动物胚胎干细胞分离与克隆中使用的培养液和添加物的特性及培养液、添加物和遗传因素对动物胚胎干细胞克隆及分化的影响。在 DMEM培养基中添加优质血清、表皮生长因子、胰岛素生长因子、白血病生长因子等能显著提高胚胎干... 系统介绍了在动物胚胎干细胞分离与克隆中使用的培养液和添加物的特性及培养液、添加物和遗传因素对动物胚胎干细胞克隆及分化的影响。在 DMEM培养基中添加优质血清、表皮生长因子、胰岛素生长因子、白血病生长因子等能显著提高胚胎干细胞的克隆率 ,生长因子通过促进细胞 DNA和蛋白质合成 ,抑制细胞程序性死亡来提高 ES细胞克隆率。叶酸、二甲基亚砜、神经生长因子、碱性成纤维细胞因子等可诱导动物胚胎干细胞在体外分化 ,形成神经细胞、造血细胞、心肌细胞和肌肉组织等。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 分化 培养液 添加剂 生长因子 遗传因子
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猕猴胚胎干细胞的诱导分化和凋亡 被引量:2
14
作者 裴轶劲 季维智 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期161-167,共7页
采用单层培养法研究维生素A酸 (RA)、神经生长因子 (NGF)、上皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)对猕猴胚胎干细胞系R36 6 4的诱导分化和凋亡的作用。结果表明 :①不添加任何生长因子的条件下 ,细胞分化不定向 ,各种细胞所... 采用单层培养法研究维生素A酸 (RA)、神经生长因子 (NGF)、上皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)对猕猴胚胎干细胞系R36 6 4的诱导分化和凋亡的作用。结果表明 :①不添加任何生长因子的条件下 ,细胞分化不定向 ,各种细胞所占的比例表现出明显的随机性 ;②添加单一生长因子能促进细胞的分化进程 ,并使某一类或某几类的分化细胞比例上升 ,RA和NGF均能促进神经样细胞的形成 ,EGF促进内皮样细胞的形成 ,bFGF提高成纤维样细胞的比例 ;③在分化的过程中伴有细胞早期和晚期凋亡的发生 ,RA和NGF可增加细胞凋亡的数量。这种由生长因子诱导的动物胚胎干细胞的分化可能存在种间差异。 展开更多
关键词 猕猴 胚胎干细胞 生长因子 分化 细胞凋亡
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IGF2在小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样细胞过程中的表达 被引量:1
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作者 刘峰 汤佳珍 +1 位作者 朱凌燕 甘华侠 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第11期1111-1113,I0001,共4页
目的观察印迹基因胰岛素样生长因子(IGF)2在小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛样细胞过程中的表达情况。方法体外诱导胚胎干细胞向胰岛样细胞分化,逆转录-PCR(RT-PCR)和细胞免疫荧光检测胰岛细胞标志基因表达;聚合酶链式反应-限制性内... 目的观察印迹基因胰岛素样生长因子(IGF)2在小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛样细胞过程中的表达情况。方法体外诱导胚胎干细胞向胰岛样细胞分化,逆转录-PCR(RT-PCR)和细胞免疫荧光检测胰岛细胞标志基因表达;聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)检测印迹基因IGF2在诱导分化前后细胞中的亲本表达情况。结果诱导分化终末细胞能表达胰岛素、胰高糖素及C肽等胰岛细胞特异性标志物,PCRRFLP检测分析显示,体外诱导分化的细胞的印迹基因IGF2呈双等位基因表达,印迹丢失。结论体外诱导培养可导致胚胎干细胞印迹基因IGF2表达的改变。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 基因组印迹 胰岛素样生长因子Ⅱ 等位基因 细胞分化
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多步骤诱导逐步筛选法建立高效的胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的分化方案 被引量:1
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作者 隋婧 姜方旭 施秉银 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期407-413,共7页
目的探讨胚胎干细胞(ESCs)体外定向分化为胰岛祖细胞的分化潜能,应用多步骤诱导逐步筛选法建立高效的胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的分化方案,提高胚胎干细胞向胰岛祖细胞分化的效率。方法体外传代培养ESCs,采用逐步筛选分化方案,在... 目的探讨胚胎干细胞(ESCs)体外定向分化为胰岛祖细胞的分化潜能,应用多步骤诱导逐步筛选法建立高效的胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的分化方案,提高胚胎干细胞向胰岛祖细胞分化的效率。方法体外传代培养ESCs,采用逐步筛选分化方案,在不同的分化阶段,给予不同的生长因子诱导分化后,RT-PCR法检测胰腺特异性基因的表达,筛选最佳的诱导因子组合,并用免疫细胞化学方法鉴定相关特异蛋白的表达,从而建立体外高效的定向分化方案。结果从未分化ESCs定向分化为定形内胚层细胞,以活化素A诱导组的Sox17和Foxa2基因表达最显著;从定形内胚层细胞分化到后前肠细胞,以维甲酸+FGF10诱导组的Hnf4a和Hnf6基因表达最显著;从后前肠细胞定向分化到胰腺内胚层细胞,以维甲酸+环杷明+DAPT+Exendin 4诱导组的Pdx1、Ptf1a、Hblx9等胰腺特异性基因表达最显著;从胰腺内胚层细胞定向分化到胰岛祖细胞,以维甲酸+DAPT+Exendin 4诱导组的Ngn3、Nkx6.1、Pax4、Pax6等基因表达最显著。免疫细胞化学方法检测可见胰腺特异性的相关蛋白表达,多数Ngn3+细胞同时表达胰腺特异性基因Nkx6.1和Pdx1。结论应用多步骤诱导逐步筛选法可以建立高效的ESCs定向分化为胰岛祖细胞的分化方案,提高ESCs向胰腺内胚层分化的分化效率,为1型糖尿病的β细胞再生治疗提供试验依据和可行性方案。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 胰腺分化 胰岛祖细胞 转录因子 多步骤诱导逐步筛选法 分化方案
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细胞生长因子联合诱导ES细胞向肾脏前体细胞分化的实验研究 被引量:3
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作者 田寿福 郭烨 +5 位作者 牛鑫 袁霆 胡斌 郭尚春 汪年松 汪泱 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第12期1058-1061,I0009,I0010,共6页
目的:探讨细胞生长因子联合诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)向肾脏前体细胞定向分化的实验技术,为应用胚胎干细胞进行肾脏再生提供实验基础。方法:小鼠ES细胞悬浮培养2d制备成拟胚体,RA、activin-A、Bmp7三种生长因子诱导培... 目的:探讨细胞生长因子联合诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)向肾脏前体细胞定向分化的实验技术,为应用胚胎干细胞进行肾脏再生提供实验基础。方法:小鼠ES细胞悬浮培养2d制备成拟胚体,RA、activin-A、Bmp7三种生长因子诱导培养5d设为A组,不加生长因子培养设为对照(B组),生长因子培养5天后继续以肾脏上皮细胞生长培养液培养7d设为C组,免疫荧光检测Pax2、Bry、WT1蛋白表达情况,流式细胞技术检测Pax2、Bry、CD24阳性细胞比例,realtimePCR检测Pax2、Bry、Osr1、Lim1、WT1、Six2、Sall1、AQP1、CD24、PDGFR基因表达情况。结果:免疫荧光染色结果显示A组细胞Pax2、Bry、WT1的表达明显高于B组;流式细胞技术检测显示A组Pax2、Bry、CD24阳性细胞比例较B组增加,C组表达Pax2、Bry的阳性细胞比例较A组明显升高;realtimePCR检测显示A组Pax2、Bry、Osr1、Lim1、WT1表达较B组明显增加(P<0.05或P<0.01),C组表达CD24基因较A组明显升高(P<0.05)。结论:胚胎干细胞在体外生长因子联合诱导条件下能够分化为早期肾脏前体细胞,并表达部分成熟肾脏细胞的标记物。 展开更多
关键词 生长因子诱导胚胎干细胞肾脏前体细胞
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5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究 被引量:1
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作者 王力 方志荣 +3 位作者 高连如 张宁坤 徐小红 朱智明 《转化医学杂志》 2017年第3期137-141,共5页
目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse em... 目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养h ESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、b FGF诱导组、5-aza+b FGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)。结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+b FGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+b FGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光法示5-aza+b FGF联合诱导组c Tn T的表达最为明显(P<0.05)。结论 h ESCs在体外经5-aza+b FGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 心肌细胞 细胞分化 人胚胎干细胞 5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子
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人胚胎干细胞神经分化中VEGF作用的分子机制研究 被引量:1
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作者 焦淑洁 许慧芳 +2 位作者 张苏明 许杰 湛延强 《中国实用神经疾病杂志》 2011年第19期4-6,共3页
目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人胚胎干细胞分化为神经元的促进作用是否与p38MAPK信号通路相关。方法人胚胎干细胞经拟胚体向神经元分化,分为3组:A组:常规诱导组;B组:常规诱导+VEGF(10ng/mL)作... 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人胚胎干细胞分化为神经元的促进作用是否与p38MAPK信号通路相关。方法人胚胎干细胞经拟胚体向神经元分化,分为3组:A组:常规诱导组;B组:常规诱导+VEGF(10ng/mL)作用组;C组:常规诱导+p38MAPK抑制剂预处理+VEGF(10ng/mL)作用组。免疫荧光法检测计算各组不同阶段细胞阳性率,半定量RT-PCR观察各组神经干细胞p38αmRNA表达,MTT法检测3组神经干细胞增殖速率。结果免疫荧光法检测,B、C 2组产生神经干细胞的阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B、C 2组比较差异无统计学意义(P>0.05);B组进一步分化为神经元的阳性率明显高于A、C组,差异有统计学意义(P<0.01),A、C 2组比较差异无统计学意义(P>0.05);半定量RT-PCR观察B组神经干细胞p38αmRNA表达明显高于A、C 2组;MTT法检测与半定量RT-PCR结果相似。结论人胚胎干细胞体外分化过程中,血管内皮生长因子促进神经干细胞分化的作用与p38MAPK通路无关,而VEGF通过激活p38MAPK信号通路,促进神经干细胞进一部分化为神经元。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 神经分化 血管内皮生长因子 P38MAPK信号通路
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胚胎干细胞来源的拟胚体分化早期血管平滑肌标志物的表达时相
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作者 韩雅玲 肖艳平 +2 位作者 齐岩梅 康建 闫承慧 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期385-390,共6页
目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子... 目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚胎干细胞制备拟胚体(EBs),用免疫荧光染色、RT-PCR、Western blot分析SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC的表达时相;然后分别用0μmol/L(对照组)、10μmol/L、50μmol/L AG1296(血小板源性生长因子受体抑制剂)处理EBs,观察三组SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC在基因及蛋白水平上的表达变化。结果:胚胎血管发育早期SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC分别在EBs第0(胚胎干细胞)、8、11、13d开始有表达。AG1296三种浓度处理后SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC蛋白表达及myocardin、SM22α和SMMHC mRNA表达均无明显差异。结论:EBs发育过程中存在着自发的VSMCs分化,SMα-actin表达最早,依次为myocardin、SM22α、SMMHC;PDGF-BB对EBs分化早期VSMCs标志物表达的调控可能不是必要的。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 血管平滑肌细胞 分化 血小板源性生长因子-BB
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