GnRH脉冲对体外原代培养大鼠GTH细胞中LHβ mRNA表达水平的影响

研究不同脉冲频率GnRH对GTH细胞分泌LH的影响。利用细胞体外培养技术结合荧光定量PCR技术,对体外培养的大鼠原代垂体细胞在不同脉冲频率GnRH刺激下,细胞LHβmRNA的变化进行了研究。在相同振幅条件下,高频刺激(30 min间隔)时,LHβmRNA表达水平达到高峰。结果表明,高频脉冲主要引起LH的表达,支持了GnRH脉冲频率本身就是一个调控信号的假说。

诱导大鳍鱯和长吻鮠排卵过程中血清GTH水平的变化

繁殖期从嘉陵江收集性成熟的大鳍■ 和长吻 野生亲鱼，用Ｌｉｎｐｅ方法（即ＬＨＲＨ－Ａ加多巴胺Ｄ２受体拮抗剂地欧酮）或传统的ＬＨＲＨ—Ａ加脑垂体的方法进行催产，定时取血样，用放射免疫方法测定催产过程中血清ＧＴＨ水平的变化，进一步证实鲇形目鱼类ＧＴＨ的分泌受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素ＧｎＲＨ和多巴胺的双重调节；排卵和产卵也是以血清ＧＴＨ的急剧升高为先导的，而最终能否排卵还有赖于血清ＧＴＨ峰是否超过“排卵阈值”。尽管催产后的大鳍 和长吻 雄鱼血清ＧＴＨ水平也有一个高峰出现，但血清ＧＴＨ水平升高幅度都大大低于雌鱼，这种现象在硬骨鱼类可能具有普遍性。

大鼠腺垂体细胞的体外原代培养及其GTH分泌活动的观察

本文旨在体外进行原代培养大鼠垂体细胞并观察GTH分泌活动规律;在每日观察细胞生长状态并分组检测其FSH、LH分泌水平,及做免疫组化染色实验,连续5d;结果表明,第7天时,细胞状态最佳,FSH、LH分泌水平最高,GTH的阳性率最大;所以大鼠垂体细胞体外培养生长最旺盛的时期是第7天。

团头鲂脑垂体的显微和超微结构以及其GTH细胞在人工催产过程中的变化

光镜和电镜观察显示团头鲂脑垂体的神经垂体主要由神经分泌纤维、脑垂体细胞和微血管构成；腺垂体由促肾上腺皮质激素分泌细胞和催乳素分泌细胞组成的前腺垂体，由促性腺激素分泌细胞、促生长激素分泌细胞和促甲状腺素分泌细胞组成的中腺垂体，以及由后腺垂体分泌细胞组成的后腺垂体构成。促性腺激素分泌细胞（组成细胞）只有一种类型，但在不同的时期表现出不同的超微结构特征。在人工催产过程中该细胞也呈现出明显的超微结构变化。

鲑鱼促性腺激素释放激素类似物和Domperidone诱导几种养殖鱼GtH分泌和排卵的研究

鲑鱼GnRH的一种类似物:(D-Arg^6,Trp^7,Leu^8,Pro^9NET)-LHRH(sGnRH—A)和多巴胺拮抗物domperidone对诱导鱼类GtH分泌和排卵具有非常高的活性。sGnRH-A和DOM同时一次注射能促使大鳞副泥鳅和鲤鱼的GtH大量迅速释放,并有效地诱导它们以及草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲮鱼等排卵或产卵。

应用外源性激素GTH和LRH-Ⅱ提高蛋鸡产蛋量试验

应用外源性激素提高产蛋母鸡的产蛋量,目前,国内外报道不多。为了探讨某些外源性激素对促进母鸡排卵的作用,我们选用了 GTH 和 LRH—Ⅱ二种外源性激素进行了以下对比试验。

Wistar大鼠GTH细胞的cAMP对FSHβ mRNA表达的影响

[目的]从分子水平阐述大鼠FSHβmRNA表达的GnRH受体后信号转导机制。[方法]采用细胞体外培养技术结合实时荧光定量PCR技术,检测大鼠GTH细胞中cAMP改变对FSHβmRNA表达的影响。[结果]cAMP含量对大鼠GTH细胞表达的FSHβmRNA的Ct值的影响不显著。FSK和SQ22536能有效改变GTH细胞的cAMP含量,却不能改变PKC活性。FSHβ的表达是受GnRH调控的。[结论]cAMP不是FSHβmRNA表达的GnRH受体后的信号转导途径。

睾酮对日本鳗鲡离体下丘脑-脑垂体复合物GtH合成与分泌的影响

用离体孵育的方法研究了睾酮 (T)对日本鳗鲡 (Anguillajaponica)完整的下丘脑 脑垂体复合物(hypothalamus pituitarycomplex ,HPC)、分离的下丘脑 (hypothalamus,H)加脑垂体 (pituitary ,P)以及单独的脑垂体 (pituitary ,P)促性腺激素 (GtH)合成与释放的影响。在不加T的孵育液中孵育 ,HPC组的孵育液及其脑垂体中的GtH含量最高 ,H +P组次之 ,而P组最低 ,表明下丘脑通过GnRH直接刺激脑垂体GtH的合成与释放。在加入T的孵育液中孵育 ,P组的孵育液及脑垂体中的GtH含量显著增加 ,并且和孵育液中的T呈剂量依存的正反馈作用。当T和H与P一起孵育时 ,低浓度的T (0 1和 1μmol/L)刺激HPC组和H +P组的GtH释放 ,呈现正反馈作用 ,而高浓度的T (10 μmol/L)则抑制HPC组和H +P组的GtH释放 ,表现负反馈作用。这些结果直接证明日本鳗鲡下丘脑对脑垂体GtH分泌的调控以及性类固醇激素 (如雄鳗的睾酮 )

鳗鲡繁殖生物学研究 Ⅳ.人工催熟过程中下海鳗鲡的GtH分泌活动、性腺发育状况和脑垂体GtH细胞的超显微结构

雌二醇通过正反馈作用能促进脑垂体促性腺激素(GtH)细胞的合成活动,使脑垂体GtH水平显著升高。促黄体素释放激素的类似物(LHRH-A)和利血平(reserpine,RES)能促进脑垂体GtH细胞的分泌活动,使血液中GtH含量显著升高。鲤垂体、人体绒毛膜促性腺激素(HCG)和LHRH-A三种激素混合进行多次注射能诱导雌雄鳗鲡性腺发育成熟,其催熟效果明显优于它们的分别单独多次注射或者鲤鱼脑垂体和HCG的多次注射,表明外源的和内源的促性腺激素对于诱导鳗鲡性腺发育成熟都是重要的。鳗鲡脑垂体GtH细胞超显微结构的观察证实它们在激素诱导性腺发育成熟过程中处于活跃的合成与分泌状态。

不同光纤收发器间(QSFP与GTH)通信研究与实现

本文介绍了Xilinx Virtex-6 HXT系列FPGA内嵌光收发器GTH与Tyco Electronics光收发器QSFP,实现了光纤数据的高速传输。

Virtex-5 GTX与Virtex-7 GTH间通信应用

基于Xilinx的高速串口协议进行通信匹配,针对Virtex-5GTX和Virtex-7GTH之间的差异性,需要对预加重、接收均衡值、接收终端电压以及发送差分电压等参数进行调整,才能保证二者之间数据正确收发.利用IBERT测得的实际通信参数来设置GTX/GTH的收发端,并加入时钟校准模块屏蔽接收端由于时钟相位偏移而引起的差异,从而大大地提高了数据链路传输的稳定性.实验结果表明:Virtex-5GTX与Virtex-7GTH间可以实现数据的高速串行通信,串行收发器的数据误码率达到10-12以下,单通道速率为2.5Gb/s,16通道的总传输速率达到40Gb/s.

大鼠GTH细胞内PKC的改变对LH分泌的影响

目的是分析大鼠分泌LH的GnRH受体后信号转导机制。将GTH细胞内PKC兴奋或抑制后,用高频GnRH脉冲刺激,再用ELISA法检测其LH分泌量,并与空白组比较。结果表明,细胞PKC活性显著影响LH的分泌。得出结论,PKC-Ca2+是GnRH脉冲刺激引起的LH分泌的GnRH受体后信号转导途径之一。

阿扑吗啡对LHRH-A促进鲤鱼GtH和GH分泌的影响

腹腔注射ＤＡ激动剂ＡＰＯ和ＬＨＲＨ－Ａ，研究ＡＰＯ对ＬＨＲＨ－Ａ促进鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ分泌的影响．结果表明：①ＬＨＲＨ－Ａ单独注射能极显著刺激ＧｔＨ分泌，且具有明显的剂量依存关系；ＡＰＯ单独注射显著抑制基础ＧｔＨ分泌，没有明显的剂量依存关系；两者结合注射，ＡＰＯ能显著抑制ＬＨＲＨ－Ａ促进ＧｔＨ的分泌；②ＬＨＲＨ－Ａ单独注射，能显著刺激ＧＨ分泌，且具有明显的剂量依存关系；ＡＰＯ单独注射，也能显著刺激ＧＨ的分泌；两者结合注射。

鲟鱼GtH放射免疫测定方法的建立及催产前后史氏鲟血清GtH含量的变化

用蛋白质快速液相层析(FPLC)分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素(GtH),共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白,用反相高效液相色谱(rpHPLC)分离出两个亚基,质谱测定α亚基分子量:15 603ku,两个β亚基分子量分别为14 338ku和14 694ku。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体,采用氯胺T法用125I标记抗原,用羊抗兔γ球蛋白做二抗,建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化,统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12h和16h GtH分泌量升高显著,最高达到234ng.mL-1;催产效应时间与催产后血清中GtH的含量紧密相关。

淫羊藿苷对大鼠腺垂体细胞合成分泌GTH的影响

通过腺垂体细胞的原代培养技术和半定量RT-PCR技术观察淫羊藿苷对大鼠腺垂体合成分泌GTH的影响。建立了腺垂体细胞总RNA的提取、FSH和LH特异基因的PCR扩增的体系和条件,并以β-actin为内参照与FSH和LH特异基因进行多重比较。结果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平,但并非与剂量呈线形关系,中剂量组(60μl/l)时大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平最高,与低剂量组(30μl/l)和高剂量组(100μl/l)差异显著。表明淫羊藿苷不但能通过直接作用与性腺来发挥“壮阳”的作用,而且其对垂体细胞也有刺激作用。

多巴胺能药物对鲇鱼促性腺激素(GtH)分泌活动的影响

以珠江流域鲇鱼 ( Silurus asotus)为实验材料 ,研究了多巴胺 ( DA)能药物 ( DA及其 D-2型受体拮抗物domperidone,DOM)对鲇鱼促性腺激素 ( Gt H)释放的影响 .结果表明 :在性腺发育的各个时期 ,单独注射DOM( 5μg/g)均不能显著提高鲇鱼血液基础 Gt H水平 ,当 DOM与 LHRH-A联合注射时能显著增强LHRH-A刺激 Gt H释放的作用 ;DA只能抑制 Gn RH诱导的 Gt H释放 ,对基础 Gt H释放无抑制作用 .这种生殖内分泌调节方式与鲇形目的革胡子鲇 ( Clariasgariepinus)和大鳍 ( Mystus macropterus)相似 ,而与鲤形目的鲤科 ( Cyprinidae)

团头鲂促性腺激素GtHⅡβ亚基基因5′端启动子区克隆及表达载体构建

利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtHⅡβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列长度为1354bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y和AP1等可能对GtHⅡβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于-40～10bp。进一步利用PCR方法扩增得到了811bp(-771～+40bp)、601bp(-561～+40bp)、386bp(-346～+40bp)、239bp(-199～+40bp)和98bp(-58～+40bp)的5个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础依据。

细胞外Ca^（＋＋）对脉冲式和持续性鲑GnRH类似物刺激鲤GtH分泌的影响

２ｍｉｎ脉冲式１０ｎｍｏｌ鲑ＧｎＲＨ高效类似物ｓＧｎＲＨ－Ａ（Ａｒｇ￣６Ｔｒｐ￣７Ｌｅｕ￣８ｐｒｏ￣９ＮＥｔ－ＬＨＲＨ）刺激导致离体灌流培育的鲤脑垂体迅速产生显著的ＧｔＨ分泌峰，ＧｔＨ分泌在刺激后３０ｍｉｎ内恢复到基础水平。４ｈ１０ｎｍｏｌ／ＬｓＧｎＲＨ－Ａ持续性刺激导致灌流培育的鲤脑垂体ＧｔＨ分泌出现脱敏反应，整个过程包括刺激后迅速的ＧｔＨ分泌峰相和随后持续低水平的ＧｔＨ分泌相。无Ｃａ￣（＋＋）的灌流液或用ＥＧＴＡ赘合了灌流液中的Ｃａ￣（＋＋）对灌流培育的鲤脑垂体基础ＧｔＨ分泌没有影响，但导致胞垂体对２ｍｉｎ１０ｎｍｏｌ／ＬｓＧｎＲＨ－Ａ刺激的ＧｔＨ分泌反应显著降低以及脑垂体对持续性１０ｎｍｏｌ／ＬｓＧｎＲＨ－Ａ刺激的ＧｔＨ分泌的脱敏反应消失，而仅出现低水平的ＧｔＨ分泌反应。