Anti-proliferative effect of the extract of Guangzao (Fructus Choerospondiatis) on cultured rat cardiac fibroblasts

OBJECTIVE: To ascertain if total flavonoids of Guangzao(Fructus Choerospondiatis)(TFFC) extracted from Guangzao(Fructus Choerospondiatis) can inhibit angiotensin Ⅱ-induced proliferation of cardiac fibroblasts(CFs).METHODS: CFs were cultured by the differential attachment method. A model of cell proliferation was established by stimulation with Ang Ⅱ. Cardiac fibroblasts growth was determined using a hemocytometer. Cell proliferation was detected by methyl thiazole tetrazolium. Lactate dehydrogenase activitywas measured by chemical colorimetric method.RESULTS: Proliferation of TFFC-treated(25, 50,100 mg/L) fibroblasts was significantly less than that of cells in the angiotensin Ⅱ group(P < 0.01),and TFFC inhibited proliferation in a dose-dependent manner. These inhibitory effects were partly blocked by pretreatment with NG-nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME) and 1H-[1,2,4]-oxadiazole-[4,3-a]-quinoxalin-1-one(ODQ).CONCLUSION: TFFC inhibited angiotensinⅡ-induced proliferation of cardiac fibroblasts via a mechanism that probably involves activation of the NO-cyclic guanosine monophosphate signaling pathway.

基于谱效关联分析的广枣在三味檀香散中的作用研究

目的:基于谱效关联分析探讨广枣在三味檀香散治疗心血管疾病中的药效及物质基础。方法:采用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(HPLC-Q-Exactive-MS/MS)对三味檀香散及其君药广枣进行成分分析和归属鉴别,采用ACEEXCEL3 C18-PFP色谱柱(100 mm×3 mm,3μm),以0.2%甲酸甲醇溶液-0.2%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),柱温为35℃;正、负离子模式采集数据,依据质谱数据、对照品及文献比对,对三味檀香散和广枣的化学成分进行归属鉴定。以斑马鱼血栓模型、小鼠巨噬细胞RAW246.7炎症模型、大鼠心肌细胞H9c2氧化损伤模型为药效评价手段,采用灰色关联度分析谱效关系。结果:识别三味檀香散中48个成分、广枣中22个成分,其中共有成分20个,经与对照品比对确认12个成分;基于灰色关联度分析发现广枣的药效活性主要体现在抗氧化方面,抗炎活性次之,无抗血栓形成作用,其抗氧化活性关联度最大的化合物为儿茶素和柚皮素,抗炎活性关联度最大的为柚皮素。结论:三味檀香散的药效活性是各药味多种成分协同作用的结果;灰色关联度分析可作为筛选与预测中药药效物质组分的有效方法。

超微粉碎对七味广枣散体外溶出度及大鼠体内药动学的影响

目的研究超微粉碎对七味广枣散中没食子酸、原儿茶酸和丁香酚的体外溶出度及其在大鼠体内药动学的影响。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定没食子酸、原儿茶酸和丁香酚3种指标成分含量,以普通粉为对照,对七味广枣散超微粉中指标成分在水、人工胃液和人工肠液3种溶出介质中的溶出性能进行评价;SD大鼠灌胃给予七味广枣散普通粉或超微粉(用0.5%CMC-Na混悬),给药后眼眶取血,采用HPLC法测定血浆中丁香酚的质量浓度,LC-MS法测定没食子酸和原儿茶酸的血药浓度,使用DAS 3.0软件计算药动学参数,利用SPSS 19.0软件进行统计学分析,以普通粉为参比,评价七味广枣散超微粉中3种指标成分在大鼠体内的药动学特性。结果七味广枣散超微粉中丁香酚在3种溶出介质中的溶出度始终高于普通粉,而没食子酸和原儿茶酸在溶出开始的短时间内不同程度地高于普通粉,但随着时间的延长,累积溶出率与普通粉趋于一致;七味广枣散超微粉组丁香酚的AUC_(0~720 min)和AUC_(0~∞)分别为普通粉组的1.76倍和2.56倍(P<0.05),没食子酸和原儿茶酸的各药动学参数在七味广枣散超微粉组和普通粉组间差异不具有统计学意义。结论超微粉碎对药材中不同理化性质成分影响不同,难溶性成分所受影响较水溶性成分可能更为显著。

正交设计研究广枣三味汤黄酮及生物碱提取工艺

目的 :为广枣三味汤提取工艺提供依据。方法 :采用正交设计方法因素为提取时间乙醇浓度和使用量。芦丁、苦参碱为指示成份。结果 :最佳提取工艺为A2 B3C3,即加药材 8倍量的 70 %乙醇回流提取 2h ,共提取 3次。结论 :乙醇提取法优于水提取法。提取时间对黄酮类和生物碱的溶出量影响最大 ,乙醇的浓度和溶剂倍量对黄酮的溶出量影响较大 ,应加以控制。

广枣三味颗粒剂清除氧自由基实验研究

目的 :探讨了蒙药广枣三味颗粒剂清除和抑制超氧自由基的作用机理。方法 :用 VB2 -Met-NBT作为氧自由基生成反应体系 ,观察广枣三味颗粒剂清除氧自由基的作用。结果 :当 S=5 0时 ,SC5 0 =77.5 μg/ m l(r=0 .995 3) ;当 I% =5 0时 ,IC5 0 =73.9μg/ m l(r=0 .943 7)。结论 :呈剂量依赖性地清除和抑制氧自由基。

Micro PET/CT分子显像观察广枣-7味丸抗缺血/再灌注损伤作用机制

目的观察广枣-7味丸抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)作用机制。方法将120只雄性SD大鼠随机均分为高剂量组、中剂量组、低剂量组以及空白对照组、模型对照组和阳性对照组。于造模前及造模后24 h、48 h和72 h行Micro PET/CT分子显像,计算心肌缺血容积感兴趣区(VOI)及平均标准摄取值(SUV mean),检测血清氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]含量和心肌损伤标志酶[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)],并观察心肌病理学改变。结果24 h和48 h显像,各组均见不同程度显像剂稀疏-缺损;72 h显像低剂量组仍见稀疏,而中、高剂量组恢复;低、中、高剂量组内缺血部位SUV mean随时间延长而逐渐增高(F=121.82、450.82、435.75,P均<0.05)。低、中、高剂量组均可清除自由基、降低心肌损伤标志酶;高剂量组对SOD,中剂量组对MDA、LDH,低剂量组对CK作用效果好(P均<0.05)。结论广枣-7味丸通过清除体内自由基、减轻氧化应激损伤、影响相关酶活性等方式发挥抗MIRI作用,各剂量均对MIRI具有保护作用,以高剂量效果最好。Micro PET/CT分子显像能无创、动态活体检测MIRI,准确评估广枣-7味丸对鼠MIRI的保护作用。

广枣－钾停搏液对心肌保护作用的研究

采用犬体外循环模型，观察广枣－钾停搏液在低温下对心脏缺血９０ｍｉｎ，再灌注４５ｍｉｎ的保护作用。实验结果显示：广枣－钾停搏液组心功能恢复率较单纯托马氏停搏液组为高；心肌水、钙含王及氧自由基含量明显降低。电镜观察心肌超微结构亦显示前者的保护作用明显优于后者。广枣与托马氏液合用，能加强对心脏的保护作用。本文对广枣护心的作用机制作了讨论。

蒙药广枣、麻黄、锦草中总黄酮的提取及含量的测定

本实验以乙醇为溶剂，超声波辅助提取广枣、麻黄、锦草中总黄酮，利用分光光度法测定总黄酮的含量，并测定其回收率．结果表明：广枣黄酮含量为11．6mg／g，RSD：0．89％；麻黄黄酮含量为37．3mg／g，RSD：0．97％；锦草黄酮含量为15．4mg／g，RSD：1．23％．三种样品的回收率在94．1％～96．35％之间．

广枣Vc含量的测定

利用二甲苯-二氯靛酚比色法测定广枣中维生素C(Vc)的含量.结果表明:利用超声法破碎细胞测得的Vc含量与未超声提取所测Vc含量有极显著差异,同时处理时间之间也存在显著性差异.广枣Vc含量随处理时间延长而增多,未超声处理组和超声处理组的Vc含量平均值分别为33.113mg/mL和51.626mg/mL.

蒙药广枣的提取工艺和化学成分研究新进展

通过对近年的国内外文献进行检索,全面综述了蒙药广枣的工艺及化学成分研究进展,并概括了临床用药情况,为该药的开发和利用提供参考．

蒙药药对广枣-肉豆蔻对Wistar乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨蒙药药对广枣-肉豆蔻对Wistar乳鼠心肌细胞氧化损伤的干预作用。方法:取新生Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,300μmol/L H2O2诱导建立心肌细胞氧化损伤模型,MTT法观察广枣水提物、广枣10%~95%醇提物、肉豆蔻超临界提取物和广枣-肉豆蔻药对对氧化损伤的心肌细胞和正常心肌细胞的影响,并用qRT-PCR方法检测Bcl-2和Bax的基因表达。结果:诱导损伤模型组细胞生存率较空白组显著降低(P<0.05或P<0.01);广枣水提物无抗氧化损伤活性,不同浓度的广枣醇提物、肉豆蔻挥发油和半固体组及广枣-肉豆蔻药对均能显著增加细胞生存率,且多表现与剂量呈正相关。筛选出70%广枣醇提物、药对广枣-肉豆蔻(70%广枣醇提物∶肉豆蔻挥发油+肉豆蔻半固体成分=1∶1)抗氧化活性最强(P<0.05或P<0.01)。广枣、肉豆蔻、广枣-肉豆蔻药对均能显著调节H2O2诱导的氧化损伤心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达,增加Bcl-2/Bax比值(P<0.01),广枣-肉豆蔻药对最强,广枣、肉豆蔻次之。结论:蒙药药对广枣-肉豆蔻能显著降低体外Wistar乳鼠心肌细胞的氧化损伤,抑制心肌细胞凋亡的发生。

负载型多糖的制备及对铅的吸附研究

用不同活性炭制备了负载型多糖,多糖的负载率用硫酸苯酚法测定,标准曲线回归方程为y=0.005906x+0.1234(r=0.9998),相对标准偏差为0.70%,线性范围为5.0~50.0 mg/L,耶壳活性炭多糖负载率最高为65.71%。用自制负载型多糖清除污水中的铅,以甲基百里香酚蓝为显色剂,用分光光度法测定铅吸附率,在室温、波长为610 nm、甲醇为增敏剂、pH值为6、显色剂用量为1.5 mg/L、反应时间50 min的测定条件下,方法的标准曲线回归方程为y=0.0682x+0.1825(r=0.9999),线性范围为0~8.0 mg/L,检出限为0.2 mg/L,加标回收率在95.8%~103%,相对标准偏差为0.78%~4.2%,同时做共存离子的干扰实验。结果表明,不同负载型多糖对铅离子的吸附率不同,其中椰壳活性炭负载型多糖对铅的吸附率最大为28.61%,比相应活性炭对铅的吸附率高了16.08%。将多糖负载在活性炭上,可明显提高对铅离子的吸附率,为用多糖负载型活性炭清除实际污水中的铅提供依据。

蒙药七味广枣丸方解、方源和临床应用研究概况

蒙药七味广枣丸方出自《经验方》,收载于《中华人民共和国药典》,为蒙药复方制剂,由广枣、肉豆蔻、丁香、木香、枫香脂、沉香和牛心粉组成,剂型有水丸和大蜜丸。根据临床应用变迁,蒙药七味广枣丸对慢性心力衰竭、冠心病心绞痛、无症状型心肌缺血、稳定性劳力型心绞痛和心刺痛等病症具有显著疗效,并无不良反应,具有安全、有效、稳定的质量特征,可进一步深入研究。本文通过收集、整理文献材料,结合临床应用现状,采用文献综述方法对蒙古族验方七味广枣丸进行基原考证、方解分析,并综述蒙药七味广枣丸的临床应用概况,为进一步开发及利用提供参考依据。

基于网络药理学及分子对接方法探索广枣五味散治疗冠心病的活性成分

目的通过网络药理学、分子对接方法探讨广枣五味散(GWS)治疗冠心病(CAD)的活性成分及相关分子机制。方法运用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)搜索和筛选GWS中不同中草药的活性成分;在Genecards、OMIM、PharmGKB、TTD和DrugBank数据库中,检索与CAD相关的靶基因;使用STRING、Cytoscape分析和构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并对其进行聚类和拓扑分析;使用R语言进行GO功能分析和KEGG信号通路富集分析。AutoDock用于分子对接,验证其活性成分与关键靶点的结合能力。结果GWS中有108个活性成分,有77个基因与CAD相关。GO和KEGG分析显示,AGE-RAGE糖尿病并发症信号通路和流体剪切力与动脉粥样硬化信号通路是GWS治疗CAD的关键信号通路。聚类和拓扑分析及分子对接方法均显示,STAT3和TP53为GWS治疗CAD的核心靶蛋白。结论GWS含有多种活性成分,通过调控多个基因靶点发挥治疗CAD的作用。

HPLC法测定蒙药广枣中没食子酸含量

目的：为蒙药广枣质量标准的完善提供依据；方法：利用高效液相色谱（HPLC）方法，使用C18柱（200＊4．6mm）甲醇-0．1％磷酸水溶液（5：95）为流动相，检测波长为273nm，对不同产地蒙药广枣中所含的有效成分没食子酸进行了含量测定研究；结果：没食子酸对照品线性范围为0．048-0．24μg，r=0．9997平均回收率为98．20％（RSD=0．79％）。结论：该实验方法简便快捷，重复性好，结果准确可靠，可作为广枣的质量控制方法。

HPLC法同时测定七味广枣散中4种成分的含量

目的:建立同时测定七味广枣散中没食子酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、丁香酚含量的方法。方法:采用HPLC法,SHIMADZU Shim-pack GIST(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:没食子酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、丁香酚分别在2.42~48.4μg/mL(r=0.999 9)、2.88~57.6μg/mL(r=0.999 7)、1.12~22.4μg/mL(r=1)、102.0~2040μg/mL(r=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99.57%、98.22%、101.35%、96.59%,RSD分别为0.99%、1.04%、1.53%、0.20%(n=6)。结论:该方法简便、快速、准确、分离效果好,可为七味广枣散的质量评价和控制提供参考。

HPLC法测定广枣中槲皮素的含量

目的：建立广枣中槲皮素的含量测定方法.方法：采用反相高效液相色谱法, 以Kromasil菲罗门C18 柱（250mm×4.6μm,5μm）为色谱柱;以甲醇-0.4%磷酸（52：48）为流动相;检测波长为360nm;流速为1.0ml/min.结果：槲皮素在0.48-24μg范围内有良好的线性关系,r=0.99995;平均加样回收率为101.1%,RSD＝0.37%.结论：该方法快速、准确、重现性好,可于广枣中槲皮素的含量测定.

变换波长HPLC测定七味广枣丸中丁香酚、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的建立高效液相色谱法测定七味广枣丸中丁香酚、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法。方法色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse SB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相为5%乙腈-乙腈(58∶42);流速为1mL·min-1;检测波长程序:0～15.0min为280nm;15.1～40min为225nm。结果丁香酚,木香烃内酯和去氢木香内酯的保留时间分别约为6,21和24min,与相邻峰的分离度大于1.5。以峰面积对进样浓度(μg·mL-1)线性回归,丁香酚回归方程为Y=0.1045ρ-6.161,r=0.9999,线性范围0.5520～13.80μg;木香烃内酯回归方程为Y=0.09539ρ-0.2972,r=0.9999,线性范围0.07400～1.850μg;去氢木香内酯回归方程为Y=0.07851ρ-0.07949,r=0.9998,线性范围0.05950～1.488μg;丁香酚,木香烃内酯和去氢木香内酯的回收率分别为99.2%,101.3%和97.0%,RSD分别为0.89%、1.6%和1.6%。结论本方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可用于七味广枣丸中丁香酚、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的同时测定。

高效液相色谱法测定七味广枣丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的：建立高效液相色谱法测定七味广枣丸中木香烃内酯和去氢木香内酯含量。方法：采用Agilent ZORBAX EclipseSB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）色谱柱,流动相为5%乙腈-乙腈（58∶42）,流速1 mL.min-1,检测波长为225 nm。结果：木香烃内酯和去氢木香内酯的保留时间分别约为21 min和24 min,与相邻峰的分离度大于1.5;线性范围分别为7.400~185.0μg.mL-1（r=0.9999）和5.950~148.8μg.mL-1（r=0.9998）;平均回收率（n=6）分别为101.3%和97.0%,RSD均为1.6%。结论：该法操作简便,测定结果准确,重复性好,可用于七味广枣丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定。

RP-HPLC研究冰片对广枣中没食子酸在家兔体内的药动学影响

目的研究冰片对广枣中没食子酸药动学的影响。方法采用RP-HPLC测定广枣水提液和广枣-冰片配伍液灌胃后家兔血浆中没食子酸的药-时曲线,DAS2.0药动学软件拟合房室模型,计算药动学参数,比较没食子酸在家兔体内的药动学差异。结果广枣单独给药、广枣-冰片配伍后给药,没食子酸在体内代谢动力学模型均为二室开放模型。配伍后,没食子酸的达峰时间提前,V/F减少,CL/F增大。结论冰片可以促进没食子酸的转运和吸收,体现的了冰片对广枣的增效作用。