基于VDR及CYP27B1对冠脉通片拆方补肾活血作用靶点研究

[目的]探讨冠脉通片及其拆方基于维生素D受体(VDR)及1α-羟化酶(CYP27B1)对补肾活血的作用。[方法]采用"腺嘌呤+左冠状动脉前降支结扎法"制备肾阳虚心梗模型。将大鼠分为假手术对照组、肾阳虚心梗模型对照组、冠脉通片全方组、补肾拆方组、活血开窍拆方组、维生素D对照组。采用预防性给药,于AMI术前2 d灌胃相应受试物,术后给药5 d,每日1次。检测评价肾阳虚的血清肌酐(Scr)、三碘甲状腺原氨素(T3)、甲状腺素(T4)水平。酶联免疫法测血清活化1,25(OH)_2D_3水平。免疫组化法观察心室肌组织、肾组织VDR、肾组织CYP27B1表达。Western blot法检测心室肌组织、肾组织VDR和肾组织CYP27B1蛋白相对表达量。[结果]冠脉通片全方降低Scr作用明显(P<0.05),升高T3、T4作用明显(P<0.05);可明显升高血清1,25(OH)_2D_3水平(P<0.05)。全方组肾组织CPY27B1蛋白表达增多,全方及补肾组可增加心肌和肾组织中的VDR表达。[结论]冠脉通片可通过CPY27B1和VDR作为核心环节,对其用于肾虚血瘀的补肾活血作用机制提供了基础研究的数据支持。

冠脉通片防治慢性肾脏病大鼠血管钙化的作用研究

[目的]观察冠脉通片对大鼠慢性肾脏病(CKD)血管钙化的防治作用。[方法]采用灌胃给予腺嘌呤加髙磷饮水的方法制备大鼠CKD血管钙化模型。造模同时灌胃给予不同剂量冠脉通片,连续10周。腹主动脉取血检测血清尿素、肌酐、钙、磷水平,试剂盒检测腹主动脉钙含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肾和血管组织变化,硝酸银染色观察血管钙化情况。[结果]冠脉通片0.46、0.23 g/kg组能显著降低模型大鼠血清尿素、肌酐及磷水平,升高钙水平;明显降低腹主动脉钙含量;肾脏HE染色结果提示,与正常组相比,模型组大鼠肾小球结构紊乱,肾小管代偿性扩张,局部见棕褐色结晶沉积,肾脏间质弥漫淋巴和单核细胞浸润,大量成纤维细胞增生,形成广泛纤维化,肾脏血管明显减少。与模型组比较,冠脉通片组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。其中,冠脉通片0.46 g/kg组效果更好。HE与硝酸银染色显示,与模型组相比,冠脉通片0.46、0.23 g/kg组大鼠胸主动脉钙化灶面积明显缩小,其中冠脉通片0.46 g/kg组效果更好。[结论]冠脉通片对CKD血管钙化大鼠有明显防治作用,可改善肾功能,纠正钙、磷代谢紊乱,降低动脉钙含量,缩小钙化面积。

冠脉通片对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌酶及心肌细胞凋亡的影响

目的探讨冠脉通片对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和冠脉通片高、中、低剂量组,每组10只。阳性对照组给予复方丹参片600mg/(kg·d)灌胃,冠脉通片高、中、低剂量组分别给予冠脉通片1200、600、300mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水。各组均灌胃5天后,除假手术组外其余各组大鼠心脏前降支结扎40 min后再灌注120 min,建立心肌缺血再灌注模型。比较各组大鼠心肌缺血再灌注损伤面积,测定血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(c-TnT)的活性,观察心肌缺血再灌注后心肌细胞的病理变化和细胞凋亡数量。结果冠脉通片高、中、低剂量组和阳性对照组大鼠心肌缺血再灌注损伤面积、细胞凋亡数量较模型组显著减少(P<0.05或P<0.01)。除冠脉通片低剂量组CK-MB外,各治疗组大鼠血清AST、CK、CK-MB、c-TnT活性均较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论冠脉通片能够改善心肌缺血再灌注的损伤程度,可能与其改善心肌酶和减少心肌细胞凋亡有关。

冠脉通片质量控制研究

目的建立冠脉通片的质量控制方法。方法采用TLC法,分别以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)、乙酸丁酯-甲酸-水(1.3∶1∶1)10℃下放置的上层溶液为展开剂对何首乌及淫羊藿进行薄层色谱鉴别;采用气相色谱法,以水杨酸甲酯为内标物,安捷伦DB-WAX毛细管柱(30m×0.53mm,1μm),FID检测器,载气为氮气,柱温为140℃,测定冠脉通片中的冰片;采用高效液相色谱法,Dikma-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.5%乙酸(88∶12)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长281nm,柱温25℃,测定冠脉通片中的丹参素。结果薄层鉴别中样品色谱斑点清晰,分离较好;气相色谱中,冰片中龙脑及内标物水杨酸甲酯均得到良好的分离,冰片的平均回收率为96.72%(RSD为0.67%);HPLC测定丹参素在0.1008～0.6048μg与峰面积值线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为100.22%(RSD为1.15%)。结论本实验建立的方法简便、准确、可靠,可用于冠脉通片的质量控制。