miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTPBP2基因靶向调控的研究

目的探讨miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTP结合蛋白2(GTPBP2)的调控作用。方法选择2022年1月至12月在新乡医学院附属商丘市第一人民医院行结直肠癌根治性切除术的44例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织。选择人正常结直肠黏膜细胞FHC、结直肠癌细胞HCT116进行基础实验。采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织、癌旁组织及细胞的miR-145-5p和GTPBP2 mRNA的表达水平。采用Western blot法检测细胞GTPBP2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与GTPBP2基因的靶向关系。分析结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果与癌旁组织相比,癌组织中miR-145-5p表达水平显著降低(t=8.189,P<0.001),GTPBP2 mRNA表达水平显著升高(t=11.230,P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与GTPBP2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.001)。miR-145-5p表达水平与结直肠癌远处转移、淋巴结转移以及TNM分期存在显著关联(P<0.05),但与患者性别、年龄、病灶部位、临床T分期、肿瘤直径的关联性不显著(P>0.05)。与FHC细胞相比,HCT116细胞miR-145-5p表达水平显著降低(P<0.001),GTPBP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。过表达miR-145-5p可下调HCT116细胞GTPBP2 mRNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-145-5p和GTPBP2基因之间存在靶向关系。结论miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达,并与远处转移、淋巴结转移和TNM分期存在显著关联,其可能通过靶向调控GTPBP2表达而影响结直肠癌的发生、发展。

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶及其促进酿酒酵母核酸合成的研究进展

核糖核酸(Ribonucleic acid,RNA)的降解产物及其衍生物具有多种生物学功能,属于药食同源,近年来已在新型食品增味剂、保健品、抗病毒制剂及农用增产剂等方面广泛使用,具有较高的市场价值,目前主要通过发酵法培养微生物获得,然后被酶促转化成多种降解物及衍生物,以满足市场需求。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是公认的食品安全性微生物,且核酸含量较高,是理想的RNA生产微生物。微生物系统工程团队(本团队)在前期的研究中发现,强化次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)有利于提高酿酒酵母核糖体RNA(Ribosome RNA,rRNA)的合成。而从医药角度,IMPDH一直被作为研发抗癌、抗病毒和抗寄生虫药物的靶点。本文综述了IMPDH的研究现状,重点介绍了酿酒酵母IMPDH的生物学功能、结构、同工酶及表达调控机制,并结合IMPDH与rRNA合成的关联,展望了其在提高酿酒酵母核酸产生中的作用,以期为突破核酸产业的技术瓶颈提供理论依据。

国人多巴敏感性肌张力障碍的分子遗传学研究

目的:分析国人多巴敏感性肌张力障碍(DRD)患者发病与三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ(GCH-I)基因突变的关系。方法:来自3个家庭的5例临床确诊的DRD患者及其亲属共12名成员,经静脉采血2 ml,常规提取基因组DNA,以PCR扩增GCH-I基因,反应产物用自动DNA测序仪直接测序。结果:在A家系,先证者母亲为正常个体,基因测序显示无基因突变,其中3例患病个体DNA测序发现第2个外显子142号碱基由鸟嘌呤转换为腺嘌呤(G→A),导致半胱氨酸被替换为酪氨酸;估计其突变基因来自已故父系一方。在B家系,先证者第1个外显子71号碱基由胸腺嘧啶转换为胞嘧啶(T→C),导致亮氨酸被替换为脯氨酸;而其父母及弟均为正常个体。丙家庭无GCH-I基因突变。结论:GCH-1基因突变只是部分DRD患者的发病原因。

冷适应对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与嘌呤核苷三磷酸结合的影响

目的 :探讨冷适应对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白 (UCP)活性与含量的影响。方法 :用 [3 H]标记的鸟嘌呤核苷三磷酸 (GTP)与解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经Scatchardplot分析得出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果 :冷适应能使棕色脂肪增加 ;冷适应组Bmax显著高于对照组 ,Kd值显著低于对照组。结论 :冷适应不仅能使棕色脂肪线粒体内膜UCP含量增加 ,而且能使其活性增加。

酪氨酸羟化酶基因新突变导致多巴反应性肌张力障碍家系分析

【目的】研究多巴反应性肌张力障碍(DRD)家系TH基因突变特点。【方法】提取先证者及其父母和两个姐姐外周血基因组DNA,使用高通量测序(NGS)的方法对已知肌张力及运动障碍相关的256个致病基因进行检测。【结果】家系中2例患者(先证者和其大姐)的酪氨酸羟化酶(TH)基因外显子14、9存在c.1481C>T(p.Thr494Met)、c.943G>A(p.Gly315Ser)复合杂合突变,父母分别携带一个杂合突变,其表型正常的二姐和50名正常对照者均未检测到该突变。【结论】TH基因c.1481C>T(p.Thr494Met)、c.943G>A(p.Gly315Ser)突变导致了该DRD家系的基因异常,并且发现了新的TH基因突变,扩展了DRD基因型与临床表型的关系谱,对DRD的早期精准诊断和治疗是改善预后的关键。

Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及机制

目的探讨小鸟苷三磷酸(GTP)酶Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及作用机制。方法培养人膀胱癌细胞,分为观察1组、对照1组、观察2组、对照2组,分别加入2μmol/L顺铂诱导凋亡。24 h后,观察1组细胞转染Rab11特异性siRNA,对照1组细胞转染Control siRNA,观察2组细胞转染Rab11过表达质粒,对照2组细胞转染p CMV6质粒。转染48 h后收集各组细胞,采用CCK-8法测算细胞存活率,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果观察1组细胞存活率低于对照1组,观察2组细胞存活率高于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞凋亡率高于对照1组,观察2组细胞凋亡率低于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞Bcl-2蛋白表达低于对照1组,观察2组细胞Bcl-2蛋白表达高于对照2组(P均<0.05)。结论 Rab11能增强膀胱癌细胞对化疗药物顺铂的耐药性,其机制可能为调控凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。

非诺贝特通过上调三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ促进eNOS复偶联

目的探讨非诺贝特发挥降脂外血管内皮保护作用的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VECs),非诺贝特预处理HUVECs 2 h,再与脂多糖(LPS)共孵育24 h。采用Western blot检测三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ(GTPCH-Ⅰ)的表达水平,高效液相色谱法检测四氢生物蝶呤(BH4)的表达水平,ELISA检测细胞上清一氧化氮(NO)浓度,利用Confocal方法检测细胞活性氧(ROS)产生水平。结果非诺贝特预处理后,较单纯LPS刺激组,细胞内BH4表达水平及细胞上清NO产生增多,伴有细胞内ROS产生减少(P均<0.05);此外,单独给予非诺贝特处理内皮细胞后,可见浓度依赖性上调细胞GTPCH-Ⅰ的表达,非诺贝特(10μmol/L)上调GTPCH-Ⅰ的表达在12 h达到高峰。结论非诺贝特通过上调内皮细胞GTPCH-Ⅰ的表达而增加BH4的水平,进而促进内皮型一氧化氮合酶的复偶联,改善血管内皮功能。

钙离子浓度变化对大鼠缺血心室致颤阈值的影响及其与cAMP、cGMP及ATP的关系

本文目的是观察不同钙离子浓度([Ca^(2+)])对急性局部缺血大鼠心脏室颤阈(VFT)的影响及其与心肌cAMP、cGMP和ATP含量变化的关系。结果表明,[Ca^(2+)]与缺血心脏VFT下降幅度呈正相关(r=0.7998,p<0.05);而[Ca^(2+)]与缺血心肌cAMP/cGMP比值、ATP含量则呈负相关(分别r=-0.887、r=-0.864,均p<0.05);缺血心脏VFT下降幅度与cAMP/cGMP比值亦呈显著负相关(r=-0.992,p<0.01),提示心肌细胞内游离Ca^(2+)水平可能是缺血心室易颤性(VV)的决定因素;cAMP水平或cAMP/cGMP比值则可能是通过影响Ca^(2+)内流而起作用的间接因素;而ATP贮量对缺血心脏VFT下降可能有一定保护作用。

磁场作用下急性心肌梗塞大鼠心肌病理改变及相关自由基的变化

目的:探讨磁场对急性心肌梗塞(AMI)大鼠心肌的保护作用。方法:将大鼠随机分为空白对照组、磁场对照组、AMI组、AMI药物(心得安)治疗组和AMI磁场治疗组。采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸(TBA)、虫荧光素酶法及放射免疫法检测实验性大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、血浆丙二醛(MDA)、心肌三磷酸腺苷(ATP)含量及血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及心肌梗塞范围(IS),并对病理形态学、心电图进行观察。结果:AMI磁场治疗组红细胞SOD、心肌ATP明显高于AMI组(P<0.01),与药物治疗组比较差异无显著性(P>0.05)。AMI组血浆MDA、cAMP、cGMP含量明显高于空白对照组及磁场对照组(P<0.01),AMI磁场治疗组与药物治疗组明显低于AMI组(P<0.01)。光学显微镜观察结果表明,AMI组心肌梗塞处肉芽组织增生,未见明显瘢痕形成,磁场治疗组心肌梗塞处可见部分瘢痕形成。AMI磁场治疗组IS明显低于AMI组(P<0.05),AMI组ST段偏移和T波倒置出现率明显高于药物治疗组和磁场治疗组(P<0.05)。结论:磁场能减少AMI大鼠IS、ST段偏移和T波倒置出现率,有利于梗塞处修复;能降低AMI大鼠血浆MDA、cAMP及cGMP的含量,增加红细胞SOD含量及心肌ATP含量,对心肌具有保护作用。

宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与患者临床病理特征和β-连环蛋白相关性

目的:分析宫颈癌组织中激活的白激酶C受体1(RACK1)、IQ序列三磷酸鸟苷酶激活蛋白(IQGAPl)表达及与临床病理特征和β-连环蛋白(β-catenin)的相关性。方法:收集2018年1月-2020年12月本院行宫颈癌手术治疗的患者106例临床资料,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫组化技术检测RACK1、IQGAP1、β-catenin mRNA和蛋白表达,分析宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与临床病理特征和β-catenin的相关性。结果:宫颈癌组织中RACK1 mRNA的相对表达量(0.27±0.11)低于癌旁组织(0.75±0.19),IQGAP1 mRNA(0.65±0.18)、β-catenin mRNA(0.61±0.21)高于癌旁组织(0.22±0.13、0.32±0.17),RACK1蛋白阳性率(18.9%)低于癌旁组织(63.2%),IQGAP1(76.4%)、β-catenin(68.9%)蛋白阳性率高于癌旁组织(28.3%、31.1%)(均P<0.05)。RACK1在高分化、TNM分期为I期、无淋巴结转移的宫颈癌组织中阳性率高于中低分化、TNM分期为II-III期、有淋巴结转移患者的组织,IQGAP1在中低分化、TNM分期为II-III期的宫颈癌组织中阳性率高于高分化、TNM分期为I期组织(均P<0.05)。宫颈癌中RACK1表达与β-catenin呈负相关(r=-0.405,P<0.05),IQGAP1表达与β-catenin呈显著正相关(r=0.346,P<0.05)。结论:宫颈癌组织RACK1低表达,IQGAP1高表达;RACK1蛋白表达异常可能与患者宫颈癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及β-catenin表达有关,IQGAP1蛋白表达异常可能与分化程度、TNM分期及β-catenin表达有关。

基于cDNA末端快速扩增的刚地弓形虫核仁G蛋白-1的克隆

目的 克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法 根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3’-端和5’-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性。结果 5’-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长12 87bp ,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5’-RACE在5’端扩增获得未知序列为1196bp。3’-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为16 34bp ,去除引物和已知序列,经3’-RACE扩增获得的3’-端未知序列为12 0 4bp。Blast全长为316 7bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(6 5 0bp 2 80 9bp)。推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa) ,在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的。该序列已登录NCBIGeneBank ,核酸序列登录号AY6 86 734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94 2 90。结论 本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析。

鸟嘌呤核苷三磷酸分析方法研究进展

鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)在许多生命体的生命活动中起着很重要的作用,它不仅是一种能量供给体,辅助三磷酸腺苷(ATP)供给生命体所需能量,还参与生命体内许多酶的催化活化。本文综述了GTP的一些相关分离技术,并重点介绍了GTP最终检测的方法。

心肌缺血时血小板功能变化的机制(英文)

研究了冠心病人以及实验大鼠心肌缺血期间血小板功能变化的机制。利用血小板聚集仪检测血小板聚集率 (PAgR)。应用CD41,CD6 2和标记第二抗体FITC在流式细胞仪上检查了GPⅡb/Ⅲa和GMP 140表达的变化。利用荧光血小板聚集仪测定了血小板ATP的释放量 ;利用血小板离子钙聚集仪检测胞浆内钙含量。结果表明缺血时PAgR的增高是由于血小板表面的GPⅡb/Ⅲa受体表达增加所致。缺血期间GMP - 140表达的增加表明心肌缺血时血小板易于被激活 ,并且黏滞性增高。心肌缺血时ATP释放量也明显增加。在血小板ATP释放反应和血小板聚集率之间有正反馈相互作用关系。心肌缺血能显著引起胞浆内钙含量的增高 ,后者是导致血小板功能异常变化的重要细胞内机制。

微波-超声波辅助合成聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点用于室温磷光检测三磷酸鸟苷

利用微波-超声波辅助方法合成了水溶性聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点,并建立了基于该量子点的室温磷光检测三磷酸鸟苷(GTP)的新方法。该量子点对GTP具有较高的灵敏度和选择性,能区分GTP与其结构类似物三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸胞苷(CTP)、三磷酸尿苷(UTP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)。该量子点的室温磷光对GTP的响应在3 min内达到平衡,其磷光增强值与GTP浓度呈良好的线性关系,对GTP的检出限为0.6μmol/L。该方法成功应用于癌细胞提取液中GTP的检测,为GTP的检测提供了新方法。

酵母酶系合成三磷酸鸟苷的研究

研究了利用啤酒酵母细胞酶系催化鸟苷酸 (GMP)合成三磷酸鸟苷 (GTP)的工艺过程。采用分式析因及响应面实验设计对其工艺条件进行优化 ,分析了温度、pH、酵母、无机盐和表面活性剂等因素对GTP积累的影响 ,得到了一个可以较好预测实际反应的二次方模型以及优化条件即 :GMP 7 16g/L ,葡萄糖 5 5g/L ,酵母 2 70g/L ,硫酸氨1 5g/L ,硫酸镁 2g/L ,磷酸二氢钾 2 7 2g/L ,表面活性剂 8mL/L ,氯化十六烷基吡啶 1 5g/L ,pH 6 74 ,温度 37 4℃。经过优化 ,反应得率从 71 3%增至 92 7% ,较国内外报道的水平 (80 % )提高了 12 7%。

一个遗传性多巴反应性肌张力障碍家系的临床特点及GCH-Ⅰ基因突变分析

目的探讨一遗传性多巴反应性肌张力障碍(dopa-responsive dystonia,DRD)家系临床特点和相关基因突变。方法收集一个多巴反应性肌张力障碍家系全部家庭成员临床资料并随访,采集家系成员静脉血,常规提取基因组DNA,利用PCR技术扩增三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ(guanosine triphosphate cyclohydrolase 1,GCH-Ⅰ)基因全部6个外显子,进行DNA直接测序并分析。结果该家系患病成员临床主要表现为肌张力障碍和帕金森综合征,但症状严重程度个体差异大,所以患者对多巴丝肼治疗均有较好反应,1例患者长期大剂量不规律使用左旋多巴后出现异动症。基因测序显示4例患病成员GCH-Ⅰ第四外显子102号碱基由胸腺嘧啶替换为腺嘌呤(T→A),并导致176位丝氨酸(Ser)转变为精氨酸(Arg)Arg176 Ser,该突变类型尚未见文献报道。其余家系成员未发现GCH-Ⅰ基因突变。结论多巴反应性肌张力障碍临床表现在同一家系不同个体之间可有较大差异,部分患者长期大量不规律使用左旋多巴亦可导致异动症产生。GCH-Ⅰ基因第四外显子102号碱基(T→A)突变是DRD患病的分子遗传学原因之一。

决明子、黄芪对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与鸟嘌呤核苷三磷酸结合的影响

目的:探讨决明子、黄芪对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白(UCP)活性与含量的影响。方法:用~3H 标记的鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)与 UCP 相结合,用液体闪烁仪测定其放射性活性,经 ScatchardPlot 分析得出两者结合的解离常数(Kd)和最大结合量(Bmax)。结果:决明子组 Bmax、Kd 值与对照组比较无显著性差异;黄芪组较对照组 Bmax 增加1.29倍,Kd 值无改变。结论:决明子对棕色脂肪线粒体内膜 UCP含量增加及活性无明显影响;黄芪能使棕色脂肪线粒体内膜 UCP 含量增加,但不能使其活性增加。

四氢生物蝶呤合成通路在神经病理性疼痛方面的研究进展

慢性疼痛是临床中最常见的症状之一,严重威胁着人类的健康,日益受到医务人员的重视。神经病理性疼痛(NP)是最常见的慢性疼痛之一,目前仍缺乏有效的治疗措施,主要原因是其发病机制不明。大量研究表明,四氢生物蝶呤(BH4)合成通路在NP中扮演着重要角色,极有望成为NP治疗的新靶点。本文就BH4合成通路在NP方面的研究进展作一综述。

嘌呤转运蛋白的缺失对枯草芽孢杆菌生产核黄素的影响

该研究发现,发酵培养基中添加一定浓度的腺嘌呤/鸟嘌呤/黄嘌呤/次黄嘌呤会对枯草芽孢杆菌R的核黄素合成产生抑制。而在R中单独敲除7种嘌呤转运蛋白基因pbuG、nupG、pbuE、ywdJ、nupNOPQ、pbuX、pbuO后会分别减弱或增强嘌呤碱的抑制作用。将抑制作用变化所表征的转运蛋白功能与通过生长实验鉴定的转运蛋白的功能相结合,对这些转运蛋白的功能进行了判断。其中NupNOPQ、PbuX、PbuO具有腺嘌呤内运功能,PbuG和PbuO具有鸟嘌呤内运功能。在R中单独敲除nupNOPQ、pbuX和pbuG后核黄素产量分别提高了10.74%、5.84%、7.53%。而组合敲除三者后核黄素产量提高了19.14%,证明了嘌呤转运蛋白的敲除在提高枯草芽孢杆菌核黄素产量中具有一定作用。

代谢工程改造嘌呤合成途径以提高核黄素产量

核黄素又名维生素B_(2),是人体必不可少的营养物质之一,而鸟苷三磷酸则是核黄素合成的重要前体。为在高产菌株的基础上进一步提高核黄素产量,该研究以高产核黄素的枯草芽孢杆菌S1为出发菌株,利用CRISPER/Cas9介导的基因组碱基编辑技术对嘌呤合成途径阻遏蛋白基因以及鸟嘌呤核苷酸(guanylate,GMP)还原酶基因进行失活,并利用质粒过表达的方法进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,guaC基因的失活阻断了GMP到肌苷酸的回补途径,使GMP得到积累,使核黄素产量达到3.04 g/L,而purR基因的失活没有效果;使用PvegI启动子过表达希瓦氏菌来源的ribA后,核黄素产量提高到3.33 g/L。将失活guaC基因与PvegI启动子过表达希瓦氏菌ribA结合,最终使核黄素产量达到3.43 g/L,较出发菌株核黄素产量提升22%,转化率提升25.8%。