冬虫夏草及其无性型菌株发酵液中核苷类成分的HPLC法定量分析

以已知核苷为标样,利用高效液相色谱法对冬虫夏草生药及冬虫夏草无性型菌株———中国被毛孢RCEF0273发酵液中核苷类化学成分进行定量分析比较,结果表明,中国被毛孢RCEF0273发酵液中含有3种核苷标样,分别为腺苷、尿苷、鸟苷,其含量均高于对照品冬虫夏草生药。因此,RCEF0273发酵液是一个具有极大开发价值的资源,值得深入研究。

鸟苷发酵的优化研究

以鸟苷产生菌BacillussubtilisAJ2 0 66为生产菌株 ,采用 5 0L自控发酵罐与摇瓶培养相结合的联动优化方法对鸟苷发酵进行了研究。谷氨酸钠对鸟苷发酵比较重要 ,培养基中加入 1 %的谷氨酸钠可使 5 0L罐最终产苷达 31 49g/L。次黄嘌呤 (Hx)作为前体可以直接用于鸟苷合成 ,发酵后期加入 0 2 %的Hx,可使 5 0L罐最终产苷达 33 2 4g/L。

鸟苷发酵代谢过程分析

鸟苷是生产呈味核苷酸 5’ -鸟苷酸的直接前体 ,其发酵法生产得率的提高已经成为限制呈味核苷酸工业发展的重要环节。通过在 5 0L多参数全自动发酵罐上的研究 ,分析了鸟苷发酵过程的基本特征 ,通过将控制参数和菌体生理参数相关分析 ,结合菌体形态变化 ,指出了发酵过程可能存在的代谢流迁移 。

鸟苷发酵过程的多尺度问题研究

以鸟苷发酵为对象 ,在生物反应器中以多尺度问题的角度 ,对在线计算机数据进行相关分析 ,结合中间代谢物及有关酶活性的检测 ,建立了以代谢流为核心的多尺度调控方法 ;又通过与代谢流迁移有关的动态化学计量分析 ,实现了对批式发酵过程的时变系统估算 ,建立了主体代谢与产物形成的支路代谢间 ,包括能量与物质流的关系模型 ;最后 ,把具有不同生产能力菌株的关键基因与基因库数据进行了序列比较 ,发现了本文研究的菌株已具备高产能力 ,即编码sAMP合成酶的基因发生移码突变以及pur操纵子的多处突变 ,而中心代谢流迁移是过程优化的关键。对开展微生物功能基因组学的研究和工业过程优化的问题进行了探讨 ,作者提出有必要从生物反应器的系统生物学高度来认识和解决所面临的问题。

基于BP神经网络与遗传算法的鸟苷发酵培养基优化

运用BP神经网络对鸟苷发酵培养基组成进行建模以及鸟苷产量预测,在此基础上利用遗传算法对鸟苷发酵培养基组成进行全局性寻优,得到最佳鸟苷发酵培养基组成:葡萄糖120 g·L-1,豆饼水解液50 g·L-1,酵母粉16 g·L-1,(NH4)2SO415 g·L-1,味精10 g·L-1,CaCO320 g·L-1(分消),CaCl22 g·L-1,硫酸镁3 g·L-1,生物素0.9 mg·L-1,硫酸锰4 mg·L-1,磷酸二氢钾4 g·L-1。结果表明,BP神经网络与遗传算法耦联法能够有效地优化发酵培养基配比。

鸟嘌呤核苷补料发酵条件研究

采用新菌株Bacillus subtilisJSIM-518,在22 L自控发酵罐上进行不同补料方式和所补原料的发酵研究.酵母粉连续补料,对鸟苷积累不甚明显,应用指数函数补料方式,匀速补入RNA和腺嘌呤物质,添加速率K值显得非常关键,当K=0.16时积累鸟苷最高,积累质量浓度为34.14g/L,高于和低于此值时,鸟苷的积累量都呈递减的趋势.

鸟苷发酵过程中参数相关特性的研究

通过对鸟苷发酵过程参数相关特性的研究,结合菌体形态变化规律和氨基酸的测定结果,发现过程后期发生的代谢流迁移。以此为基础实现了过程的优化,鸟苷水平提高了50%,达到28g/L。

鸟苷发酵条件的优化研究

以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)TA208为供试菌株,运用单因素实验方法进行了摇瓶条件下发酵培养基以及发酵条件的优化研究,在最优发酵条件下鸟苷产量达到19.79g/L,比基本培养条件提高32.37%。

次黄嘌呤流加对鸟苷发酵的影响

在探索次黄嘌呤最佳流加方式的基础上,系统研究了后期流加次黄嘌呤对发酵液菌体浓度、pH值、残糖含量以及鸟苷产量的影响。结果表明,流加次黄嘌呤的最优方式为:流加浓度4.7%,发酵40h流加2mL,56h再流加1mL,次黄嘌呤利用转化效果较好;次黄嘌呤流加对发酵液菌体浓度和pH值基本无影响,次黄嘌呤流加对发酵液残糖含量影响较为显著,最高为对照的2倍;次黄嘌呤流加使得鸟苷产量提高了31.27%。

发酵法生产鸟苷的生产性试验

以鸟苷生产菌Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ２０６６为生产菌株，经摇瓶、２０Ｌ自控发酵罐、５００Ｌ发酵罐和２５０００Ｌ生产罐逐级放大试验，分别达到１５．６ｇ／Ｌ，１７．７ｇ／Ｌ，１３ｇ／Ｌ和１１ｇ／Ｌ的产量。在２５０００Ｌ发酵罐试验中，发酵液经絮凝除菌体、冷冻结晶和脱色，最后成品提取得率达６５％。

应用规模缩小方法的鸟苷发酵过程放大

利用鸟苷生产菌株枯草芽孢杆菌 (B subtilis) 75 4#,在 5 0L发酵罐成功优化的基础上 ,分别在 1 2M3的中试规模和 1 0 0M3的生产规模进行了放大 ,产苷分别达到 2 9 4g/L和2 1 4g/L ;进而通过过程缩小 (scaledown)方法 ,从代谢流动态变化的角度研究了放大过程中存在的问题 ,发现DO是限制过程放大的另一重要因素 ,据此将 5 0L规模克服代谢流迁移的优化工艺成功放大到生产规模 ,使产苷水平进一步提高了 1 8% ,达 2 5 2g/L。

基于DPS数据处理的鸟苷分批发酵动力学模型

以枯草芽孢杆菌TA208(Ade-+MSOr+8-AGr)为供试菌株,对鸟苷分批发酵动力学模型进行研究。利用 DPS数据处理软件模型参数求解的原理,建立合理的分批发酵动力学模型。经实验验证,模型的拟合结果和实验值能够较好吻合,说明该动力学模型能正确描述鸟苷的分批发酵过程。

鸟苷产生菌TA208发酵工艺优化

Bacillus subtilis TA208 was selected as the test strain to optimize the fermentation medium and con- ditions of guanosine producing by single-factor experiments in shake flask. Under the optimum conditions, the productivity of guanosine was 27.34g/L in 5L auto-fermentor.

鸟苷发酵不同阶段发酵液紫外特征光谱的研究

研究了发酵不同阶段鸟苷发酵液的紫外吸收光谱,结果表明,鸟苷发酵不同阶段发酵液紫外吸收光谱会呈现相应的特征光谱。发酵前期除了275nm处的波峰外,在249nm又出现了一个新峰,并且随着发酵时间增加新峰逐渐升高成为主峰;发酵中期275nm处的波峰逐渐减弱并最后消失;发酵后期249nm处的波峰成为发酵液的特征波峰,并随时间的增加逐渐上升;发酵末期的显著特征为发酵液λmax的吸光值基本不变。鸟苷发酵不同阶段发酵液特征光谱研究为人们认识鸟苷发酵的动态过程提供了一种新的技术和途径,对于鸟苷发酵生产具有一定的指导意义。

溶解氧控制与发酵过程摄氧率及鸟苷积累的关系

采用华东理工大学国家生化工程技术研究中心 (上海 )生产的全自动多参数 FUS- 5 0 L( A)生物反应器 ,在不同的控制方式下 ,研究了溶解氧水平对菌体代谢活力及鸟苷发酵水平的影响。结果表明 :发酵过程中 ,用调节转速的方式控制发酵液中溶氧水平的效果比用空气流量好 ;发酵液中溶氧水平控制在 1 0 %～ 2 0 %时鸟苷积累量高 ,发酵液中溶氧水平低 ( 5 %)和高 ( 3 0 %)

修饰的谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶对鸟苷产量的影响

[目的]通过对谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶的修饰提高鸟苷产量。[方法]通过重叠延伸PCR的方法进行点突变对谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶修饰,构建了基因工程菌WYB059,并进行了500ml摇瓶发酵。[结果]基因工程菌WYB059的鸟苷产量较出发菌株提高了22%。[结论]该研究为提高鸟苷产量提供了一种方法。

鸟苷补料分批发酵的研究

目的:以枯草芽孢杆菌TA208为出发菌株,研究了补料分批发酵方式下各种参数对鸟苷产量的影响。方法:采用补料分批发酵工艺,利用纸层析法测定发酵液中鸟苷的产量。结果:确定了葡萄糖、酵母粉和次黄嘌呤的最优补料方式,使鸟苷产量达到32.05g/L,较分批发酵方式提高了36.3%。结论:发酵工艺过程控制对发酵生产鸟苷具有重大影响。

利用响应面分析法优化鸟苷发酵培养基

目的利用响应面分析法对鸟苷发酵培养基进行优化,提高鸟苷产量。方法采用响应面分析法对鸟苷发酵培养基的3种主要成分葡萄糖、酵母粉和豆饼水解液进行优化。用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种因素与鸟苷产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行3次验证试验。结果通过岭脊分析,获得培养基中3因素最佳浓度为:葡萄糖12.0%,酵母粉1.4%,豆饼水解液4.0%,发酵液鸟苷最高产量可达28.3g/L。3次验证试验所测得的鸟苷产量分别为28.14、28.32和27.86g/L,平均值为28.10g/L,与预测结果基本一致。结论利用响应面分析法可优化鸟苷发酵培养基,显著提高鸟苷的产量。

微生物发酵法生产利巴韦林的研究进展

利巴韦林是高效的广谱抗病毒药物。文章对它的理化性质和应用,合成原理以及生产方式进行了概述。重点则介绍了发酵法合成利巴韦林的原理、现状以及对发酵过程优化的一些研究。最后对发酵法合成利巴韦林的前景做了展望。

高效液相色谱法测定发酵产品中鸟苷含量的研究

目的建立测定发酵产品中鸟苷含量的方法。方法采用HPLC法,以乙腈:水=10:90为流动相,流速为1ml/ml,检测波长为256nm。结果鸟苷含量在0.00500～0.100mg/ml范围内线形关系良好,RSD为0.588%(n=6),不同发酵时间产品的加标回收率在96.0%～98.3%之间,发酵时间在52h左右时样品中鸟苷含量最高。结论方法精密度、准确度好,在实验线形范围内能满足测定要求。