龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制研究

目的:研究龟鹿二仙胶对成骨细胞I型胶原及TGF-β表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、龟鹿二仙胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨化三醇组,每天灌胃1次,持续7 d,末次给药2 h后腹主动脉采血,制成含药血清作用于大鼠成骨样细胞ROS17_2.8株。用MTT法及活细胞形态观察含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响。用各组含药血清条件培养基培养成骨细胞,应用Western Blot法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-β蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-βmRNA的表达。结果:(1)MTT结果显示:龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖。骨化三醇组的成骨细胞有明显增值(P<0.05)。细胞染色提示:骨化三醇组及龟鹿二仙胶组的成骨细胞无显著的凋亡。(2)RTPCR法结果显示:骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组COL1A1及COL1A2mRNA的水平均有增加(P<0.01);龟鹿二仙胶中、高剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加较明显(P<0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加不明显(P>0.05);骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平无明显变化(P>0.05);龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平均有增加(P<0.01);且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2mRNA水平增加差异无统计学意义(P>0.05)。(3)Western blot结果提示:第24 h,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.05)。第48 h,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.01);龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P>0.05);第24、48 h,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);在24 h,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P<0.01),龟鹿二仙胶低剂量和中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);48 h,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P<0.01)。龟鹿二仙胶高中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。结论:龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症机制可能通过调节细胞因子TGF-β,促进I型胶原的表达,为探讨中药促胶原形成治疗骨质疏松提供细胞及分子生物学依据。

龟鹿二仙胶汤及其拆方对关节软骨细胞增殖的作用

目的:分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞药理血清对大鼠关节软骨细胞的调节作用,探讨中药治疗骨性关节炎的机理。方法:使用酶消化法,建立大鼠关节软骨细胞培养体系;采用MTT法,筛选出龟鹿二仙胶汤、鹿茸、龟板、人参和枸杞作用软骨细胞的最佳药理血清浓度。通过形态学、细胞超微结构观察、MTT法、流式细胞仪细胞增殖指数测定,分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞含药血清以及IGF-I对照组对软骨细胞增殖的影响。结果:建立了大鼠关节软骨细胞培养体系。通过MTT法筛选了龟鹿二仙胶汤及其拆方最佳药效的药理血清。龟鹿二仙胶汤药物血清组、IGF-I对照组能显著促进软骨细胞的增殖,其余各拆方组与正常组比较,无显著性差异,药效低于全方组。结论:证实了药物血清的制备与获得应通过实验筛选得出。龟鹿二仙胶汤能显著促进软骨细胞的增殖,全方药效优于拆方各组,体现了中药复方配伍的优越性。深化了中医"肾主骨"理论与软骨细胞增殖的关系的认识,进一步丰富了中医"肾主骨"理论的现代科学内涵。

龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍大鼠行为学和HPA轴功能的影响

目的 观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能和行为学的变化及龟鹿二仙胶对其的影响。方法 采用单一延长应激(SPS)的方法建立大鼠PTSD模型,采用旷场实验、高架十字迷宫实验,检测大鼠自主活动及焦虑水平;应用地塞米松抑制实验,检测大鼠HPA轴快速负反馈功能;采用ELISA法检测血浆皮质酮(CORT)水平和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果 PTSD模型大鼠d 8开始出现HPA轴快速负反馈功能增强,并持续到d22。模型组大鼠d 8焦虑水平升高,持续到d29。此外,d29还出现自主活动下降和血浆CORT水平升高。龟鹿二仙胶连续给药14 d后能明显抑制HPA轴负反馈功能的增强;连续给药21 d后能明显提高大鼠的自主活动能力,降低其焦虑水平和血浆CORT水平。结论 龟鹿二仙胶能够改善PTSD大鼠的行为学异常,其作用机制可能与调节HPA轴的功能紊乱有关。

龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的初步研究

[目的]初步研究龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的机制。[方法]将大鼠T细胞分为空白对照组、顺铂组、中药血清组、顺铂+中药血清组,干预12h、24h后使用RT-PCR、Western Blot技术检测各组细胞ATG5、ClassmTORPI3K、Class I PI3K、mTOR mRNA及蛋白的表达情况。[结果]干预12h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.01)。中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、mTOR mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.01)。与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot结果显示,顺铂组mTOR蛋白表达较空白对照组上升(P<0.05),其余组别各蛋白变化不明显(P>0.05)。干预24h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.01);中药血清组ATG5 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),ClassⅢPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot结果显示,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K蛋白表达较顺铂组下降(P<0.05),ClassⅠPI3K、mTOR蛋白变化不明显(P>0.05)。[结论]龟鹿二仙胶含药血清对大鼠T细胞化疗后自噬蛋白ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR的表达具有一定的调节作用。

龟鹿二仙胶巴布剂治疗结直肠癌化疗后不良反应临床研究

目的：观察龟鹿二仙胶巴布剂治疗78例Ⅲ-Ⅳ期结直癌患者FOLFIRI方案化疗后骨髓抑制的疗效,评价安全性及对中医症状积分的影响。方法：采用随机双盲、安慰剂对照的研究方法,将78例Ⅲ-Ⅳ期结直癌患者分为治疗组及对照组。两组均采用FOLFIRI方案化疗,治疗组随化疗开始同时使用龟鹿二仙胶巴布剂外敷神阙穴治疗,疗程为14 d;对照组使用安慰剂巴布剂,用法用量同治疗组。观察化疗开始后14 d内患者外周血白细胞、中性粒细胞及血小板计数,中医症状积分疗效指标,肝肾功能、皮肤不良反应等药物不良反应指标。结果：以化疗后第14天为观察节点,治疗组白细胞及中性粒细胞计数均显著高于对照组（P〈0.05）;中医症状积分显著低于对照组（P〈0.05）;两组患者肝肾功能指标及皮肤情况均未见明显异常。结论：龟鹿二仙胶巴布剂治疗Ⅲ-Ⅳ期结直肠癌患者FOLFIRI方案化疗后骨髓抑制疗效显著,安全性高。