两种不同取血部位制备桂枝汤含药血清对其抗炎作用影响差异的研究

目的基于两种不同取血部位制备桂枝汤含药血清,探讨其抗炎作用差异。方法取雄性SD大鼠按10倍临床剂量给药(桂枝汤汤剂生药1 g/mL),取门静脉血、外周血含药血清,采用快速液相-三重四级杆质谱联用仪(rapid resolution liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,RRLC-QQQ-MS/MS),建立桂枝汤汤剂、含药血清中8种化学成分含量测定方法,并对含量进行测定。取对数生长期小鼠脑微血管内皮细胞(brain-derived endothelial cells.3,bEnd.3)模型,用白细胞介素(interleukin,IL)-1β刺激,建立细胞炎症模型,使用bEnd.3细胞作为正常组。除正常组、模型组外,设置桂枝汤汤剂高、中、低剂量组(分别含5%、2.5%、1.25%桂枝汤汤剂),门静脉含药血清高、中、低剂量组(分别含20%、10%、5%门静脉含药血清)和外周血含药血清高、中、低剂量组(分别含20%、10%、5%外周血含药血清),ELISA法测定细胞外液中的前列腺素(prostaglandin,PG)E_(2)含量。结果含量测定结果显示汤剂中芍药苷、芍药内酯、甘草苷、甘草酸比例相对较高,血清中肉桂酸、6-姜酚含量相对较高,较汤剂中新出现甘草次酸等代谢物。门静脉血清中以上8种化合物含量均高于外周血血清。5%桂枝汤汤剂中甘草酸含量为798.13 ng/mL,20%门静脉含药血清中甘草酸含量为316.22 ng/mL,20%外周血中甘草酸含量为481.17 ng/mL,药物中成分的含量在同一数量级。与模型组比较,将高、中、低剂量桂枝汤汤剂添加到bEnd.3细胞培养体系中,高、中、低剂量桂枝汤组细胞外液中PGE_(2)的水平均明显高于模型组(P<0.05),而门静脉或外周血含药血清组细胞外液中PGE_(2)的水平均明显低于模型组(P<0.05),且门静脉血清的药效作用显著强于相同浓度的外周血血清(P<0.05)。结论桂枝汤汤剂经胃肠道给药后,门静脉含药血清相较外周血含药血清显示出更高的成分含量与抗炎作用。这一发现提示采用门静脉含药血清而非传统的外周血含药血清在中药方剂研究中的重要性。

含桂枝汤大鼠血清对病毒致细胞病变作用的影响

体外抗病毒实验发现，桂枝汤８ｍｇ生药／ｍｌ对与呼吸道感染有关的１０株病毒致细胞病变均有不同程度的抑制作用。取口饲给予桂枝汤后的大鼠血清进行体外抗病毒实验，发现该血清（１∶４）抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型等４株病毒对Ｈｅｐ－２细胞的增殖；该血清在－２０℃保存３个月，其抑制作用无明显下降；

犀角地黄汤合银翘散含药血清抑制流感病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞致炎物质的研究

目的:研究犀角地黄汤合银翘散含药血清对甲型流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后产生的致炎物质的影响。方法:运用中药血清药理学的方法制备等效剂量(13.8g/kg)的大鼠犀角地黄汤合银翘散含药血清。FM1感染NR8383细胞1h后,加入15%的犀角地黄汤合银翘散含药血清,同时设正常细胞和病毒对照组。药物作用后6、12、24h,ELISA检测细胞上清中炎症细胞因子TNF-α、MCP-1的含量,放免法检测细胞上清中炎性介质PGE2、PLA2、LTB4的含量;药物作用后8、24、36、48h,生化法检测细胞内自由基NO、iNOS含量;药物作用后24h,RealtimePCR检测细胞内TNF-α、MCP-1的mRNA水平。结果:犀角地黄汤合银翘散含药血清抑制了FM1感染NR8383细胞后TNF-α、MCP-1的转录和表达(P<0.05),抑制了NO、iNOS的产生(P<0.05),降低了PGE2、PLA2、LTB4、MDA的含量(P<0.05)。结论:犀角地黄汤合银翘散含药血清明显抑制了流感病毒感染后肺泡巨噬细胞内炎性细胞因子、炎性介质及自由基的产生,具有抗炎作用。

不同煎煮方法的麻杏石甘汤及其含药血清对A型流感病毒神经氨酸酶活性的影响

目的探讨不同煎煮方法的麻杏石甘汤及其含药血清对A型流感病毒神经氨酸酶（NA）活性的影响。方法以2-（4-methylumbellifery1）-α-D-N-acetyl neuraminic acid（MUNANA）为底物,检测不同煎煮方法的麻杏石甘汤药液、相应含药血清以及抑制病毒增殖作用中含药血清对流感病毒NA活性的影响。结果 （1）药液对流感病毒NA活性的影响：麻黄先煎25 min组和麻黄先煎30 min组的病毒NA荧光值低于4药同煎组（P〈0.05,P〈0.01）;（2）含药血清对流感病毒NA活性的影响：麻黄先煎30 min组、麻黄先煎40 min组的NA荧光值低于4药同煎组（P〈0.05,P〈0.01）;（3）抑制病毒增殖作用中,含药血清对流感病毒NA活性的影响：麻黄先煎5-20 min组、麻黄先煎30 min组、麻黄先煎35 min组病毒NA荧光值低于4药同煎组（P〈0.05,P〈0.01）。药物浓度方面,与25%的浓度比较,6.25%及12.5%浓度的含药血清对应的病毒NA荧光值降低（P〈0.01）。结论麻杏石甘汤煎煮方法的不同可以导致其抗流感病毒效果的差异。

五虎汤含药血浆与含药血清体外干预RSV诱导的树突细胞自噬影响T细胞增殖活化的研究

目的:观察五虎汤含药血浆与含药血清体外干预呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)诱导的树突细胞(dendritic cells,DCs)自噬对T细胞增殖活化的影响,为揭示五虎汤治疗病毒性哮喘的机制及体外实验选择合适的研究方法提供参考依据。方法:SD大鼠予2.2 g/kg五虎汤灌胃7 d后分别制得含药血清与含药血浆,从BaLB/C小鼠骨髓中分离诱导DCs细胞,从OT2小鼠脾脏中分离CD4^+T细胞,在Transwell系统里以1∶10的比例共培养,随机分为正常对照血浆组、模型血浆对照组、4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆组、正常对照血清组、模型血清对照组、4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血清组及雷帕霉素10μg/ml组、氯喹40μg/ml组,除正常对照血清组、正常对照血浆组外,各组加入含有RSV的Opti-MEM培养基(MOI=1),药物干预后,流式细胞术检测CD4^+T细胞的增殖和CD69的表达。结果:RSV感染后CD4^+T细胞发生明显的增殖,与正常血浆对照组比较,模型血浆对照组CD4^+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比均显著升高(P<0.01),与模型血浆对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆组及雷帕霉素、氯喹组CD4^+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比显著降低(P<0.01),与正常血清对照组比较,模型血清对照组CD4^+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比显著升高(P<0.01),与模型血清对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血清组及雷帕霉素、氯喹组CD4^+T淋巴细胞百分比与增殖细胞百分比显著降低(P<0.01);RSV感染后CD4^+T细胞发生明显的活化,与正常血浆对照组、正常血清对照组比较,模型血浆对照组与模型血清对照组表达CD69的T细胞比例与CD69荧光强度几何平均数(MIF)明显升高(P<0.05或P<0.01),与模型血浆对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆与雷帕霉素、氯喹组均能使表达CD69的T细胞比例与CD69 MIF显著降低(P<0.01)。结论:RSV感染导致CD4^+T细胞发生了过度的增殖与活化,5%、10%、20%的五虎汤含药血浆与含药血清可通过干预DCs自噬,抑制CD4^+T细胞过度增殖与活化,含药血浆与含药血清两种方法可得出一致结论,在体外实验中均可采用。