骨健口服液联合间充质干细胞来源外泌体治疗小鼠膝骨关节炎的实验研究

目的:探讨骨健口服液联合间充质干细胞来源外泌体(mesenchymal stem cell-derived exosome,MSC-EXO)治疗小鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的效果及作用机制。方法:将25只12周龄雄性无特定病原C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、骨健组、MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组,每组5只。假手术组仅切开关节囊而不切断内侧半月板,其余4组均采用内侧半月板失稳法构建KOA模型。骨健组、骨健MSC-EXO组小鼠每日用0.2 mL的骨健口服液灌胃,假手术组、模型组、MSC-EXO组小鼠每日用等量的生理盐水灌胃,均连续8周。MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠每周膝关节腔注射1次10μL的MSC-EXO,其余各组小鼠每周膝关节腔注射1次等量的磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),均连续8周。干预8周后处死小鼠,进行小鼠膝关节Micro-CT分析、膝关节软骨组织病理学观察、膝关节软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白α1链(collagenⅡα1,Col2A1)表达水平检测。结果:①小鼠膝关节Micro-CT分析结果。假手术组、骨健组、MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠的骨体积分数均低于模型组(P=0.004,P=0.007,P=0.040,P=0.001),骨健组、MSC-EXO组小鼠的骨体积分数与骨健MSC-EXO组的差异均无统计学意义(P=0.108,P=0.126)。假手术组、骨健组、MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠的骨小梁厚度均大于模型组(P=0.015,P=0.023,P=0.023,P=0.009),骨健组、MSC-EXO组小鼠的骨小梁厚度与骨健MSC-EXO组的差异均无统计学意义(P=0.347,P=0.062)。假手术组和骨健组小鼠的骨小梁数量多于模型组(P=0.016,P=0.021),MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠的骨小梁数量与模型组的差异均无统计学意义(P=0.196,P=0.206)。假手术组、骨健组、MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠的骨小梁分离度均小于模型组(P=0.016,P=0.012,P=0.007,P=0.001),骨健MSC-EXO组小鼠的骨小梁分离度小于骨健组(P=0.016),MSC-EXO组小鼠的骨小梁分离度与骨健MSC-EXO组的差异无统计学意义(P=0.224)。②小鼠膝关节软骨组织病理学观察结果。假手术组小鼠的关节软骨表面光滑,软骨细胞排列有序,提示无明显关节软骨退变。与假手术组相比,模型组小鼠的关节软骨组织磨损明显,软骨细胞数量减少且排列紊乱。与模型组相比,骨健组和MSC-EXO组小鼠仅有部分关节软骨磨损,软骨细胞数量增多且排列有序。与骨健组、MSC-EXO组相比,骨健MSC-EXO组小鼠的关节软骨表面光滑,软骨细胞数量增多且排列更为有序。③小鼠膝关节软骨组织中Col2A1表达水平检测结果。假手术组、骨健组、MSC-EXO组、骨健MSC-EXO组小鼠膝关节软骨组织中Col2A1阳性表达面积比均大于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000),骨健MSC-EXO组小鼠膝关节软骨组织中Col2A1阳性表达面积比大于骨健组和MSC-EXO组(P=0.000,P=0.000)。结论:骨健口服液联合MSC-EXO可改善KOA小鼠的关节软骨病理状态及软骨下骨的异常微结构,并显示出协同治疗作用,其作用机制可能与上调膝关节软骨组织中Col2A1的表达有关。

骨健口服液早期干预非创伤性股骨头坏死的临床研究

目的：观察骨健口服液早期干预非创伤性股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH）的临床疗效和安全性。方法：将120例符合要求的SteinbergⅠ、Ⅱ期单侧非创伤性ONFH患者随机分为中药组和常规组,每组60例。2组患者均服用塞来昔布片和维生素D3,并进行局部推拿按摩、电疗及中药外敷等理疗。中药组在上述治疗的基础上服用骨健口服液。分别于治疗前和治疗开始后6、12、18、24个月拍摄X线片观察股骨头塌陷情况,测定西安大略和麦克马斯特大学（Western Ontario and McMaster Universities,WOMAC）骨关节炎指数、髋关节Harris评分,记录治疗开始后24个月内2组患者接受全髋关节置换术的情况。治疗期间每6个月复查1次肝肾功能。结果：至治疗开始后24个月时,中药组失访8例,常规组失访11例,2组均未出现肝肾功能异常者。中药组21例发生股骨头塌陷,12例接受全髋关节置换术;常规组30例发生股骨头塌陷,26例接受全髋关节置换术。分别以股骨头塌陷和接受全髋关节置换术为观察终点进行生存分析,中药组的股骨头中位生存时间（股骨头塌陷：15个月;接受全髋关节置换术：15个月）大于常规组（股骨头塌陷：9个月;接受全髋关节置换术：8个月）（χ^2=4.171,P=0.034;χ^2=5.280,P=0.022）。治疗前后不同时间WOMAC评分的差异有统计学意义,即存在时间效应（F=137.733,P=0.000）。2组WOMAC评分比较,总体上差异有统计学意义,即存在分组效应（F=28.943,P=0.000）;除治疗前和治疗开始后6个月外,治疗开始后12、18、24个月时中药组的评分均低于常规组[（26.77±2.51）分,（26.79±3.26）分,t=-0.019,P=0.985;（24.42±2.62）分,（25.32±2.36）分,t=-1.219,P=0.229;（21.68±2.60）分,（23.37±1.80）分,t=-2.488,P=0.016;（17.71±1.85）分,（20.74±2.33）分,t=-5.089,P=0.000;（16.19±2.06）分,（18.84±1.89）分,t=-4.553,P=0.000]。时间因素与分组因素不存在交互效应（F=3.581,P=0.364）。治疗前后不同时间髋关节Harris评分的差异有统计学意义,即存在时间效应（F=84.829,P=0.000）。2组髋关节Harris评分比较,总体上差异有统计学意义,即存在分组效应（F=16.235,P=0.000）;除治疗前和治疗开始后6个月外,治疗开始后12、18、24个月时中药组的评分均高于常规组[（79.71±1.77）分,（80.37±2.17）分,t=-1.171,P=0.247;（80.32±1.97）分,（81.11±2.18）分,t=-1.308,P=0.197;（83.68±1.74）分,（81.47±1.90）分,t=4.202,P=0.000;（85.23±1.65）分,（83.74±1.97）分,t=2.880,P=0.006;（87.06±1.63）分,（84.47±1.65）分,t=5.432,P=0.000]。时间因素与分组因素不存在交互效应（F=9.102,P=0.293）。结论：应用骨健口服液早期干预非创伤性ONFH,可以有效缓解髋部症状,改善髋关节功能,延缓病变进展,降低股骨头塌陷率和后期全髋关节置换手术率,而且具有较高的安全性。

走马楼竹简“枯兼波簿”及其透露的生态史信息

走马楼竹简〔叁〕中有反映"波"即陂"枯兼"现象的简文。"兼"的字义,或与"溓"有关,即所谓"深泥""薄水"。求其原义,亦可以发现和"浅"的关系。"波""枯兼"现象,既反映了地貌变化,也体现了水资源状况。这一现象与气候变迁的密切关系,尤其值得生态环境史研究者的关注。人们自然会注意到,走马楼竹简所见相关现象,为东汉以来气候转为干冷的判断提供了新的证明。

RP-HPLC法测定骨健口服液中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量

目的:建立同时测定骨健口服液中3种水溶性成分—丹参素、原儿茶醛和丹酚酸 B 含量的分析方法。方法:高效液相色谱梯度洗脱法。色谱柱:Zorbax Eclipse SB-C_(18)(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:0.05%(v/v)磷酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:25℃;进样量为20 μL。结果:丹参素、原儿茶醛和丹酚酸 B 的线性范围分别在0.375～7.5 μg、0.025～0.5 μg、0.966～19.32 μg,线性关系良好(r≥0.9998)。平均加样回收率(n=5)分别为99.2%,97.6%,98.9%;RSD<2.0%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、重现性好,为全面控制和评价骨健口服液制剂的质量提供了可靠的方法。

骨建对假体周围界膜组织分泌IL-6影响的实验研究

目的:观察骨建对假体周围界膜组织分泌IL-6的影响。方法:无菌条件下从股骨分离界膜组织,并将其放入RPMI培养液中培养,取12孔培养板3块,分空白对照组、低浓度骨建组(10%)、高浓度骨建组(20%),培养72h,取上清液,酶联法测定IL-6。结果:与对照组相比,20%骨建组能显著抑制界膜组织分泌IL-6(P<0.01)。结论:骨建能显著抑制假体周围界膜组织分泌IL-6。

更年骨坚方治疗绝经后骨质疏松症(肝肾阴虚型)对患者血清Leptin、BGP、E2水平的影响

目的:观察更年骨坚方治疗绝经后骨质疏松症(PMO)(肝肾阴虚型)对患者血清瘦蛋白(Leptin)、骨钙素(BGP)、雌二醇(E2)水平的影响。方法:将2016年2月-2019年2月本院的PMO(肝肾阴虚型)患者102例随机分为研究组与对照组,每组51例,对照组给予鲑降钙素治疗,研究组给予更年骨坚方联合鲑降钙素治疗,观察比较两组治疗总有效率,并于治疗前后记录两组患者的骨密度(BMD)、骨碱性磷酸酶(BALP)、BGP、Leptin、E2水平,以及记录视觉模拟评分法(VAS)评分结果,记录治疗期间不良反应的发生例数。结果:经治疗后,研究组治疗总有效率及BMD、E2、Leptin水平明显高于对照组(P<0.05);研究组VAS评分及BGP、BALP水平明显低于对照组(P<0.05);两组治疗期间的不良反应率均较低,无明显差异(P>0.05)。结论:更年骨坚方能提高治疗PMO(肝肾阴虚型)的临床疗效,促进骨生长、增加骨强度,改善雌激素水平及疼痛症状,且具有较高的用药安全性。

RP-HPLC法测定骨健口服液中阿魏酸的含量

目的：建立骨健口服液中阿魏酸的RP-HPLC含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱拄：ZORBAX E-clipseXDBC18（150×4．6mm，5μm），流动相：乙腈：0.085％（v／v）磷酸水溶液=15：85，检测波长：314nm，流速：1.0mL·min^-1。结果：阿魏酸在1．0～12．0μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9998），三个浓度的平均加样回收率分别为99．1％、100．2％、101，2％，RSD分别为2．2％、1．7％、2．1％。结论：该方法简便、准确，可用于控制骨健口服液制剂的质量。

自拟地仲骨坚汤联合碳酸钙D3+骨化三醇治疗OP肾虚血瘀证的临床疗效

目的探讨自拟地仲骨坚汤联合碳酸钙D3+骨化三醇治疗骨质疏松症(OP)肾虚血瘀证的临床疗效。方法采用简单随机数字表及随机数余数分组法将2020年5月~2021年5月凉山彝族自治州第二人民医院收治的172例肾虚血瘀证OP患者分为联合组与对照组,每组86例。对照组患者采用口服碳酸钙D3+骨化三醇治疗,联合组患者在对照组基础上联合使用自拟地仲骨坚汤治疗,两组患者均治疗3个月。比较两组患者临床疗效,治疗前、治疗3个月后中医证候积分(腰背刺痛、腰膝酸软、下肢痿弱、步履艰难)、骨代谢标志物[骨钙素(BGP)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)]及不同部位骨密度(BMD)(股骨颈、股骨粗隆、腰椎L1-4、Ward三角)水平变化情况。结果治疗3个月后,联合组患者临床总有效率明显高于对照组(P<0.05),两组患者中医证候积分、BALP、CTX-Ⅰ、TRACP-5b水平均低于治疗前,且联合组低于对照组(P<0.05);两组患者BGP明显高于治疗前,且联合组高于对照组(P<0.05);两组患者不同部位骨密度水平较治疗前均明显升高(P<0.05),联合组高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论自拟地仲骨坚汤联合碳酸钙D3+骨化三醇能有效改善肾虚血瘀证OP患者临床症状及骨代谢水平,提高骨密度,临床疗效显著。

自拟地仲骨坚汤治疗骨质疏松症伴腰椎退行性病变(肾虚血瘀证)的临床疗效

目的探究自拟地仲骨坚汤治疗骨质疏松症伴腰椎退行性病变(肾虚血瘀证)的临床疗效。方法选取2018年2月至2020年12月本院收治的80例骨质疏松症伴腰椎退行性病变(肾虚血瘀证)患者作为研究对象,根据治疗方法不同分为地仲骨坚汤组和钙尔奇组,每组40例。钙尔奇组给予钙尔奇口服治疗,地仲骨坚汤组在钙尔奇组基础上联合自拟地仲骨坚汤治疗,比较两组治疗3个月后骨代谢、骨密度及炎症因子水平。结果治疗前,两组Ⅰ型胶原羟基末端肽(CTX)、骨钙素(BGP)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)及Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)水平比较差异无统计学意义;治疗后,两组CTX、BGP、B-ALP及PⅠNP水平均低于治疗前,且地仲骨坚汤组低于钙尔奇组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组腰椎L_(2-4)、股骨颈骨密度(BMD)水平比较差异无统计学意义;治疗后,两组腰椎L2~4、股骨颈BMD水平均高于治疗前,且地仲骨坚汤组高于钙尔奇组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平比较差异无统计学意义;治疗后,两组IL-6、TNF-α水平均低于治疗前,IGF-1水平均高于治疗前,且地仲骨坚汤组IL-6、TNF-α水平低于钙尔奇组,IGF-1水平高于钙尔奇组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论仲骨坚汤治疗肾虚血瘀证骨质疏松症伴腰椎退行性病变疗效显著,可有效改善患者骨代谢水平,提高骨密度,降低炎症因子水平,值得临床推广应用。

韦贵康运用骨坚散联合奇术手法治疗股骨头坏死经验

总结韦贵康教授以骨坚散联合韦氏奇术手法治疗股骨头坏死的经验。认为股骨头坏死主要以肝肾亏虚为本,痰瘀及风、寒、湿、热为标,属虚实夹杂之证,宜在固本祛邪的原则下采用补肝肾、祛痰瘀及除风、寒、湿、热相结合的方法进行治疗。临证不同时期均运用骨坚散为内服方加减应用以补益肝肾、活血化瘀、健脾益气止痛;并根据股骨头坏死兼症及病理特点选择韦氏奇术手法中的推散法、松解法和理顺法进行治疗。以“方+术”从整体论治,达到标本兼治的目的。

迈宋书馆铜版《西清古鉴》刊印始末考

《西清古鉴》为乾隆敕命编纂的记录清宫廷所藏青铜器的大型文物图录,共收录商周至唐代青铜器1 500余件。该书由清内府出版,刻印细密精美,是研究清代宫廷收藏古代青铜器的重要著作,也是中国版画史上的一部重要书籍。由于该书卷帙较多并有大量图像,刊刻印刷成本较高,故一直没有民间翻刻本。近代西方铜版及石印等技术被应用于商业出版之后,复制图画书籍更为便利,在这一时代背景下,中日两国出版了多种《西清古鉴》翻刻本。其中,最为精美的是光绪十四年(1888)以“迈宋书馆”名义在日本出版的铜版印本。本文钩稽中日两国相关文献,对迈宋书馆铜版《西清古鉴》的出版背景、过程、营销情况以及铜版去向等进行考证,阐明以往学界不知其详的“迈宋书馆”以及铜版《西清古鉴》刊印情况,考察当时中国书商在日本制作的其他铜版书籍的情形以及近代中日两国书籍出版流通的状况。

骨健颗粒剂提取工艺研究

采用正交设计Ｌ９（３４），对骨健颗粒剂进行了提取工艺研究，筛选出最佳提取条件，并采用薄层层析—紫外分光光度法测定了该制剂中主药淫羊藿中淫羊藿甙的吸收度，计算出淫羊藿甙的转移率为７１２％，验证了优选出的最佳提取工艺的合理性。

RP-HPLC测定骨健口服液中延胡索乙素的含量

目的建立骨健口服液中延胡索乙素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱:ZORBAX XDB-C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.0)-甲醇(45∶55),检测波长:280nm,流速:0.8mL·min-1,柱温:45℃。结果延胡索乙素在0.054～2.160μg内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.9%,RSD=0.5%(n=9)。结论该方法简便、准确、重现性好,可用于骨健口服液的质量控制。

调髓补中法辅助治疗膝骨关节炎的临床观察

目的评估具有调髓补中作用的骨健口服液辅助治疗膝骨关节炎(KOA)的临床疗效。方法100例均为2016年5月—2019年3月浙江省中医院KOA患者,Kellgren-Lawrence分级1~3级。根据治疗方式不同分为对照组50例(口服西乐葆2周+硫酸氨基葡萄糖6周)、试验组50例(口服西乐葆2周+硫酸氨基葡萄糖6周+骨健口服液6周)。采用视觉模拟评分(VAS)、西安大略和麦克马斯特大学(WOMAC)骨关节炎指数、软骨损伤评分系统(CaLs)、全膝关节核磁共振成像积分(WORMS)、双(多)能X线评估治疗前及治疗后6周及3、6、12个月的临床表现、关节损伤影像学表现及骨量情况。结果所有患者均完成12个月随访。治疗及随访期间未见不良反应。与本组治疗前比较,试验组治疗后6周及3、6、12个月VAS及WOMAC评分均较治疗前下降(P<0.05);对照组治疗后6周及3、6个月VAS评分及治疗后6周及3个月WOMAC评分亦下降(P<0.05);与对照组同期比较,试验组VAS、WOMAC评分下降幅度更大(P<0.05,P<0.01)。两组治疗前及治疗后6个月CaLs深度及形态评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。试验组3例患者治疗后膝关节MRI提示有软骨修复。试验组治疗后6个月骨密度(T值)较治疗前及对照组同期更小(P<0.05,P<0.01)。试验组出现骨髓水肿21例,对照组24例,两组均未作特殊处理,试验组治疗后6个月骨髓水肿评分(WORMS评分)较治疗前及对照组同期下降(P<0.05)。结论常规西药治疗基础上加服有调髓补中作用的骨健口服液,可有效改善早中期KOA患者临床症状,延缓患者膝关节软骨的破坏,一定程度促进软骨再生及骨髓水肿的吸收,提高患者骨量。

骨健口服液治疗原发性骨质疏松症的临床疗效分析

目的观察骨健口服液治疗原发性骨质疏松症的临床疗效及安全性,探讨其应用前景。方法纳入2018年1月至2020年12月在我院治疗且符合标准的120例原发性骨质疏松症患者,采用随机数列法将其分为观察组和对照组,每组各60例。观察组给予口服骨健口服液和阿仑膦酸钠片及碳酸钙D3片治疗,对照组给予口服金天格胶囊和阿仑膦酸钠片及碳酸钙D3片治疗,连续服用6个月后观察并分析各组临床症状、骨密度(bone mineral density,BMD)、骨代谢生化指标、视觉模拟评分(Visual Analogue Score,VAS)及Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)的改善情况与治疗过程中出现的不良反应。结果共纳入115例患者,其中观察组57例,对照组58例。①观察组总有效率为89.4%,与对照组(86.2%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);②两种治疗方法均能有效提升患者腰椎、股骨颈、大转子及Ward三角等部位的BMD,但观察组的效果更佳;两组BMD差异具有统计学意义(P<0.05);③2组治疗后骨转换指标均较治疗前有所改善(P<0.05);且观察组治疗后骨形成标志物——Ⅰ型原胶原N端前肽和骨吸收标志物——胶原特殊序列,两指标水平与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);④治疗后VAS及ODI均较前明显好转,两组差异无统计学意义(P>0.05);⑤2组治疗过程中不良反应率差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨健口服液和金天格胶囊联合基础西药均可提升患者BMD值,降低骨转换水平,缓解疼痛,减轻功能障碍;但前者效果更佳,且未增加不良反应率。