骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎大鼠模型IL-17、IL-18作用的实验研究

目的通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎模型大鼠IL-17、IL-18作用的研究,探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏组(GLG)、骨膏组(GUG)、灵膏组(LG)、塞来昔布组(CLXB)、模型组(M)及正常组(NG)共6组,冷固法建立模型,造模成功后,骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41 ml/(kg·d)灌胃,塞来昔布以20.83 mg/(kg·d)灌胃,其余组给予生理盐水灌胃。给药10周后,取大鼠血清及关节软骨,分别以免疫荧光和ELISA法检测软骨IL-17、IL-18阳性表达和血清IL-17、IL-18的含量。结果 M组与NG组比较能显著增加软骨细胞IL-17、IL-18阳性表达及血清IL-17、IL-18的含量(P<0.01),GLG与M、GUG、LG及CLXB组比较,能明显降低软骨细胞及血清IL-17、IL-18阳性表达及含量(P<0.01)。结论GLG可能通过降低OA模型大鼠血清IL-17、IL-18的含量及软骨细胞IL-17、IL-18阳性表达,对抗OA的炎症损伤,保护了关节软骨,其作用明显优于其拆方制剂GUG、LG及西药CLXB。

骨灵膏及其拆方对骨关节炎模型大鼠炎性细胞因子与聚蛋白多糖酶的影响

目的探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎软骨损伤的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组、模型组及正常组,每组10只。除正常组外其余各组采用寒冷刺激结合石膏固定的方法建立骨关节炎模型,造模成功后骨灵膏组、骨膏组及灵膏组分别给予骨灵膏、骨膏及灵膏生药量33.31g/(kg·d)灌胃给药,塞来昔布组给予塞来昔布20.83 mg/(kg·d)灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃,8周后检测膝关节软骨组织聚蛋白多糖酶4(ADAMTs-4)、聚蛋白多糖酶5(ADAMTs-5)蛋白表达,检测膝关节滑膜和血清白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E-2(PGE_2)、环氧合酶2(COX-2)、γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE_2、COX-2、IFN-γ的含量均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,骨灵膏组血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE_2、COX-2、IFN-γ含量明显降低(P<0.01)。与骨灵膏组比较,骨膏组血清IL-1β、TNF-α、COX-2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、COX-2、PGE_2、TNF-α、IFN-γ含量升高(P<0.05或P<0.01),灵膏组血清和滑膜IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE_2、IFN-γ含量升高(P<0.05或P<0.01),塞来昔布组血清IL-1β、TNF-α、PGE_2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、PGE_2含量亦升高(P<0.01)。各组大鼠膝关节软骨组织ADAMTs-4、ADAMTs-5均有表达,其中模型组表达最显著,骨灵膏组ADAMTs-4、ADAMTs-5蛋白表达最低。结论骨灵膏可能通过降低血清及滑膜中炎性细胞因子,进而阻止局部关节软骨聚蛋白多糖酶合成,从而减轻了骨关节炎软骨损伤,并且作用明显优于其拆方制剂及塞来昔布。

冷-固联合诱导法制作骨关节炎大鼠模型及骨灵膏和其拆方制剂对模型的作用

目的探讨骨灵膏及其拆方制剂对通过冷-固联合诱导法制作的骨关节炎(OA)大鼠模型作用的机制研究。方法 60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组、模型组及正常组六组,每组10只,除正常组外,其余各组采用冷固法6周建立骨关节炎模型。造模成功后,除正常组和模型组分别给予生理盐水灌胃外,其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃,给药10周后,取大鼠血清、膝关节软骨组织及滑膜。镜下观察关节软骨病理变化;X片检测关节影像学改变;ELISA检测血清TNF-a、IL-1β、透明质酸(HA)、Ig M含量;TUNEL法检测关节软骨及滑膜细胞凋亡情况。结果冷固法制作OA模型X影像学、关节肿胀情况、软骨组织病理损伤及细胞凋亡和生化代谢改变均符合OA的特征,表明造模成功;骨灵膏可以减轻OA软骨组织浅表至钙化层各层的病理损伤和下调软骨及滑膜细胞凋亡,其中骨灵膏与骨膏、灵膏比较,软骨及滑膜细胞凋亡明显下降(P<0.01),骨灵膏及其拆方制剂骨膏组、灵膏组TNF-a、IL-1β的含量较模型组显著降低(P<0.01);骨灵膏组HA的含量较骨膏、灵膏及塞来昔布组明显增加(P<0.01);各组Ig M的含量无明显差异。结论冷-固联合诱导法能制作理想的OA大鼠模型,骨灵膏可能通过减轻机体炎症损伤、降低关节软骨HA的耗损、抑制关节滑膜及软骨细胞凋亡等多个途径阻止了OA关节软骨退行性变导致的关节损伤,骨灵膏的上述作用优于其拆方制剂骨膏、灵膏及塞来昔布。