骨炎消方通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对骨关节炎细胞自噬的影响

目的通过PI3K/Akt/mTOR信号通路探究骨炎消方对骨关节细胞自噬调节的作用机制。方法构建软骨细胞炎症模型,将细胞随机分为6组:空白组(兔软骨细胞+完全培养基)、模型组(兔软骨细胞+10μg/mL LPS培养基)、阳性组(兔软骨细胞+LPS+D-氨基葡萄糖150μmol/L)、骨炎消低剂量组(兔软骨细胞+LPS+1μg/mL骨炎消)、骨炎消中剂量组(兔软骨细胞+LPS+10μg/mL骨炎消)、骨炎消高剂量组(兔软骨细胞+LPS+100μg/mL骨炎消)。CCK-8法检测细胞增殖;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中自噬因子ATG5、ATG12水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PI3K、Akt、mTOR基因相对表达量;Western blotting检测PI3K、Akt、mTOR、Beclin-1蛋白相对表达量。结果空白组、模型组及不同浓度组软骨细胞存活率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组、阳性组及骨炎消高、中、低组软骨细胞ATG5和ATG12水平均降低(P<0.05);与模型组比较,阳性组和骨炎消高、中、低组软骨细胞ATG5和ATG12水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,骨炎消高、中、低组软骨细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA相对表达量均降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组软骨细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量均升高(P<0.05),Beclin-1蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,阳性组和骨炎消高、中剂量组的PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达降低(P<0.05),阳性组和骨炎消高、中、低组Beclin-1蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论骨炎消方可有效防治骨关节炎,其作用机制可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,引起自噬在一定程度上调,促进软骨细胞增殖分化,从而减缓骨关节炎的进展。

骨炎消巴布剂对膝骨关节炎家兔软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究骨炎消巴布剂对膝骨关节炎(KOA)家兔的疗效并探究其相关分子机制。方法:50只家兔随机分为正常组、模型组、巴布剂基质组、奇正消痛贴组、骨炎消巴布剂组,每组10只。除正常组外,其余各组膝关节注射碘乙酸钠制备兔KOA模型,2周造模成功后,模型组不做任何处理,其余各组分别给予巴布剂基质、奇正消痛贴、骨炎消巴布剂外敷。治疗6周后,HE染色观察各组家兔膝关节软骨组织病理变化,TUNEL染色观察各组家兔膝骨关节中软骨细胞凋亡情况,ELISA检测各组家兔滑膜液中IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18和TNF-α的分泌水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测软骨组织中Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组软骨组织结构紊乱,大量炎症细胞渗出,巴布剂基质组各层分界不清,细胞排列稍紊乱,细胞出现增生,模型组和巴布剂基质组软骨细胞凋亡率显著升高(P<0.01),滑膜液中IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18和TNF-α水平均显著升高(P<0.01),软骨组织Bcl-2 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组相比,骨炎消巴布剂组和奇正消痛贴组软骨细胞形态较规则,胞核呈椭圆形,染色分布均匀,骨炎消巴布剂组和奇正消骨痛贴组软骨细胞凋亡率显著降低(P<0.01),滑膜液中IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18和TNF-α表达水平显著下降(P<0.01),软骨组织Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Bax mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:骨炎消巴布剂可抑制炎症因子分泌,促进Bcl-2表达,降低Bax水平,抑制软骨细胞凋亡,保护软骨细胞,进而延缓KOA的病情进展。

骨炎消巴布剂对小鼠镇痛作用的实验研究

目的探讨骨炎消巴布剂对小鼠的镇痛作用。方法采用热板法建立小鼠疼痛模型,观察骨炎消巴布剂的镇痛作用。结果骨炎消巴布剂对小鼠热板所致的疼痛反应有明显的镇痛作用,骨炎消巴布剂高、中剂量组疗效显著优于对照组(P<0.05)。结论骨炎消巴布剂对小鼠疼痛具有镇痛作用。

骨炎消巴布剂对小鼠抗炎作用实验研究

目的:研究骨炎消巴布剂对小鼠的抗炎作用。方法:采用二甲苯制作小鼠耳廓肿胀实验模型,观察骨炎消巴布剂的抗炎作用。结果:骨炎消巴布剂对小鼠耳廓肿胀有明显的抗炎作用,骨炎消巴布剂中剂量组与赋形剂对照组比较,有显著性差异(P<0.05),表明巴布剂的中剂量可明显对抗二甲苯所致的炎症反应。结论:骨炎消巴布剂对小鼠耳廓肿胀具有抗炎作用。

高效液相色谱法同时测定骨炎消方中8种有效成分的含量

目的建立HPLC法同时测定骨炎消方中原儿茶酸、绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、表儿茶素、柚皮苷、淫羊藿苷、茴芹内酯的含量。方法采用AgilentSB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;进样量10 μL;流速0.8 mL·min^(-1);检测波长270 nm;柱温28℃。结果 原儿茶酸、绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、表儿茶素、柚皮苷、淫羊藿苷和茴芹内酯在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9993);平均加样回收率在97.4%~100.4%,RSD在0.72%~2.9%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于骨炎消方的质量控制。

骨炎消对KOA家兔滑膜组织病理学形态及炎性因子表达的影响

目的:通过熏蒸疗法对KOA家兔滑膜组织治疗前后的病理学形态变化及其相关因子炎性表达的分析,探讨苗药验方骨炎消对膝关节滑膜炎的治疗作用。方法:采用膝关节腔内注射碘乙酸钠的方法建立家兔膝骨性关节炎的炎症模型,正常组和模型组正常饲养,不做干预;阳性组施予扶他林软膏外用;早期苗熏组为造模后第一天给予苗药熏蒸治疗;苗药熏蒸组为造模2周后给予熏蒸治疗。固定兔膝关节,熏蒸30min,1次/d,持续6周。治疗结束后取家兔膝关节滑膜组织进行HE染色观测其病理学形态变化;免疫组织化学法检测滑膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的炎性表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测NF-κB和p38的蛋白表达水平。结果:与模型组相比,光镜下观察其余各组治疗后的滑膜组织,其病理学形态均有明显改善;与正常组相比,模型组家兔滑膜组织IL-1β与TNF-α的炎性表达显著升高,且NF-κB和p38蛋白的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,阳性组、早期苗熏组和苗药熏蒸组的IL-1β与TNF-α的炎性表达明显降低,且NF-κB和p38蛋白的表达水平明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:熏蒸疗法可使验方骨炎消改善KOA家兔滑膜组织的病理学形态,且有效抑制滑膜组织中相关因子的炎性表达,从而减轻炎症反应,延缓膝骨性关节炎的发病进程,具有一定的运用和推广价值。

正交试验优化骨炎消巴布剂的基质处方

目的:优选骨炎消巴布剂的基质配方。方法:采用正交设计,选取聚丙烯酸钠(NP-700),羧甲基纤维素钠(CMC-Na),丙三醇和二氧化钛的用量为考察因素,以初黏力、持黏力、综合感官的综合评分为指标,优化骨炎消巴布剂的基质处方。结果:优选的基质处方为NP-700 3 g,CMC-Na 0.6 g,丙三醇16 g,二氧化钛0.8 g。结论:按优选的基质处方制得的骨炎消巴布剂外观、黏附性良好。

基于SDF-1/CXCR4途径的骨炎消方体外干预对兔膝骨关节炎软骨组织的保护机制研究

目的:研究骨炎消方体外干预对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织的保护作用。方法:采用生化检测法筛选骨炎消给药浓度,分为骨炎消方360 mg/mL、720 mg/mL、1440 mg/mL组及盐酸氨基葡萄糖10 mmol/L组,分别处理培养KOA家兔软骨组织,观察软骨形态学改变,评估关节软骨蛋白聚糖丢失程度;检测上清液及软骨组织中关于基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路上相关细胞因子的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组培养上清液中CXCR4含量显著升高,COL-Ⅱ含量显著下降(P<0.01);软骨组织中CXCR4蛋白及mRNA、IL-1β mRNA、MMP-13蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型对照组比较,骨炎消方各浓度组均能够明显降低KOA模型培养上清液中CXCR4含量,提高COL-Ⅱ含量(P<0.05或P<0.01);能明显下调KOA软骨组织中CXCR4蛋白及mRNA、IL-1β mRNA、MMP-13蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01);能够缓解KOA模型软骨组织番红失染,改善组织畸变的情况。结论:骨炎消方可以通过调节SDF-1/CXCR4信号通路,降低CXCR4水平、促进COL-Ⅱ及蛋白聚糖的合成,减少MMP-13及IL-1β的释放,从而改善KOA引起的软骨组织退化。

基于PI3K/AKT信号通路探讨骨炎消巴布剂对膝骨性关节炎兔模型的作用机制

目的研究骨炎消巴布剂对膝关节骨关节炎(KOA)PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。方法正常组不作处理,其余组采用膝关节注射碘乙酸钠建立KOA家兔模型,造模成功后随机分为模型组、巴布剂基质组、奇正消痛贴组、骨炎消巴布剂组。模型组不给药,其余组分别给予巴布剂基质、奇正消痛贴、骨炎消巴布剂外敷,连续给药6周。HE染色观察各组家兔膝关节滑膜组织病理变化,免疫组化检测关节滑膜Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达,ELISA法检测血清中IL-1β、IL-17、TNF-α水平,RT-PCR及Western blot检测软骨组织中PI3K、AKT、Caspase-3 mRNA表达及蛋白水平。结果与模型组比较,骨炎消巴布剂干预的关节滑膜炎性细胞浸润减少,Bcl-2表达显著上升(P<0.01),Bax、Caspase-3表达显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-17、TNF-α显著降低(P<0.01),软骨组织中PI3K、AKTmRNA及蛋白水平显著上升(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达及蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论骨炎消巴布剂通过激活PI3K/AKT信号通路,抑制炎症因子的分泌,促进Bcl-2的表达,降低Bax、Caspase-3水平,抑制软骨细胞凋亡的发生,保护软骨细胞,进而延缓KOA的病情进展。