Cu^(2+)、Pb^(2+)对青海湖裸鲤的急性毒性效应及相关基因表达的影响

为了研究Cu^(2+)、Pb^(2+)对青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)的急性毒性效应及相关基因相对表达水平的变化,实验以静态暴露和qPCR法分别进行毒性试验及检测青海湖裸鲤鳃、肾脏和肝脏中Nrf2(核因子NF-E2相关因子)、Keap1(Kelch样环氧氟丙烷相关蛋白)、MT(金属硫蛋白)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)、Hsp90(热休克蛋白90)、Hsp70(热休克蛋白70)、iNOS(诱导型一氧化氮合酶)和COX-2(环氧化酶2)的相对表达。毒性实验结果表明,Cu^(2+)(0.1、0.2、0.5、1和2 mg/L)对1龄青海湖裸鲤安全浓度为0.03 mg/L;Pb^(2+)(0.5、1、2.5、5和10 mg/L)安全浓度为0.1 mg/L;Cu^(2+)+Pb^(2+)的复合胁迫对青海湖裸鲤具有拮抗作用。在低于安全浓度Cu^(2+)、Pb^(2+)与Cu^(2+)+Pb^(2+)复合胁迫下,检测基因表达水平结果显示,Nrf2在Cu^(2+)和Pb^(2+)胁迫12 h时表达上调,Keap1在Cu^(2+)、Pb^(2+)与Cu^(2+)+Pb^(2+)复合胁迫12 h的肾脏中显著下调,表明Nrf2-Keap1两者之间存在负调控作用。各浓度条件下,MT的表达在鳃和肝脏中均下调,TNF-α的表达在鳃中上调。在Cu^(2+)+Pb^(2+)复合条件下,TNF-α的表达显著上调。在Cu^(2+)、Pb^(2+)条件下,Hsp90、Hsp70、iNOS和COX-2的表达量均下调。结果表明,各浓度Cu^(2+)、Pb^(2+)与Cu^(2+)+Pb^(2+)对青海湖裸鲤均产生毒性影响,各基因均对低浓度重金属离子作用产生应答。

不同溶解氧水平对青海湖裸鲤肝组织结构及抗氧化酶活性的影响

为研究不同溶解氧水平对青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)肝组织结构、线粒体超微结构及抗氧化酶活性的影响,选取120尾平均体重为(97.68±0.12)g的青海湖裸鲤,随机分为三组:中度低氧组(3.0±0.1)mg/L、重度低氧组(0.7±0.1)mg/L和常氧组(8.4±0.1)mg/L,于低氧胁迫8 h和24 h,观察肝组织结构并检测线粒体膜电位及抗氧化酶活性。结果显示:中度和重度低氧胁迫使青海湖裸鲤肝血窦扩张,血窦内红细胞数量增多,中度低氧对肝组织显微和线粒体超微结构未造成损伤,线粒体排列整齐,形态正常,但重度低氧使肝细胞出现空泡化,且随低氧胁迫时间延长肝细胞空泡变性更严重,重度低氧24 h时线粒体数量减少,部分线粒体出现空泡化。肝组织线粒体膜电位在中度低氧胁迫后显著升高,重度低氧胁迫后显著降低。中度和重度低氧胁迫使肝组织过氧化氢(H 2O 2)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性显著升高,但对超氧化物歧化酶(SOD)活性无影响;中度低氧对丙二醛(MDA)含量无影响,但重度低氧使MDA含量显著增加。结果表明,低氧胁迫对青海湖裸鲤肝组织造成氧化应激,但中度低氧对肝组织结构和线粒体未造成损伤,重度低氧导致肝组织结构及线粒体损伤,且低氧胁迫后肝组织通过调整相关抗氧化酶活性提高其低氧适应能力。

青海湖裸鲤人工繁殖技术

总结了淡水培育的青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)的人工繁殖技术,包括亲鱼培育、人工繁育等。2015—2018年繁育试验中,亲鱼平均相对怀卵量为46.20粒/g体重,催产率可达80.00%,受精率89.52%,孵化率95.46%。

青海湖裸鲤IL-8的原核表达及诱导条件优化

白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)是一种CXC家族趋化因子,主要通过趋化炎症细胞参与机体免疫反应。本研究通过RT-PCR技术,扩增得到含一对酶切位点的青海湖裸鲤IL-8成熟蛋白DNA序列(gpIL-8),经酶切连接至pET30a(+)质粒得到原核表达重组质粒pET30a-gpIL-8,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21后成功诱导得到分子量约13.7 kD的重组蛋白,重组蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在。通过对影响蛋白表达量的诱导物浓度和诱导时间进行优化,发现包涵体重组蛋白表达量随诱导时间增加而增加,随诱导物浓度增加呈先增加后减少的趋势,在0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时表达量最高。可溶性重组蛋白表达量总体上随诱导时间的增加呈先增加后减少趋势,随诱导物浓度的增加表达量无明显改变,在0.4 mmol/L IPTG诱导6 h时即可表达高浓度的可溶性重组蛋白。因可溶性蛋白有利于后续实验,故利用最佳诱导条件诱导后对可溶性蛋白进行纯化,得到高纯度的IL-8重组蛋白,测得浓度达101.5μg/mL,满足后续实验要求。本研究为青海湖裸鲤IL-8多克隆抗体制备,及其功能、作用机制研究提供了理论依据。