裸脚菇0612-9提取物对柑橘青、绿霉的抑菌活性及作用机制

为探索裸脚菇0612-9提取物(GSFE)对意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(P.digitatum)的抑菌活性和作用机理,本试验采用菌丝生长速率法测定GSFE对意大利青霉和指状青霉的抑菌活性,分析GSFE处理后意大利青霉和指状青霉的菌丝形态、细胞膜通透性和麦角固醇含量变化情况,并通过靶位竞争剂试验探究GSFE的抑菌机理。结果表明,GSFE对意大利青霉和指状青霉的半有效浓度(EC_(50))值分别为116.76和147.74μg·mL^(-1),最小抑菌浓度(MIC)均为200μg·mL^(-1);经质量浓度为EC_(50)和MIC的GSFE处理后意大利青霉和指状青霉菌丝体均发生严重的皱缩、干瘪,并且胞内呈空泡状结构,细胞质大量减少,胞外相对电导率显著上升,菌体内核酸、可溶性蛋白等胞内物质含量显著降低。这表明意大利青霉和指状青霉细胞膜通透性增加,胞内物质外泄,细胞膜完整性遭到破坏。经浓度为EC_(50)的GSFE处理的意大利青霉和指状青霉菌丝体,其麦角固醇含量均显著降低,分别仅为对照组的17.92%和20.13%。由此可见,GSFE主要通过抑制意大利青霉和指状青霉菌丝体的麦角固醇合成而损伤病原真菌细胞膜的结构和功能。本研究结果为后续开发新型微生物源柑橘采后保鲜剂提供了设计思路。

裸脚菇0612-9活性物质对柑橘青、绿霉病的生防效果及其诱导抗性

为研究裸脚菇0612-9活性物质对柑橘青、绿霉病的生防效果及其诱导抗性,以‘南丰’蜜桔为试材,采用质量浓度分别为0(对照)、0.25、0.55、5.50 mg/mL的裸脚菇0612-9发酵液粗提物(extract of fermentation broth from Gymnopus sp.0612-9,GSFE)通过损伤接种的方式处理果实,随后分别接种青、绿霉病原菌孢子悬浮液,定期统计果实发病率,并取样测定柑橘果皮防御酶活力等指标的变化。结果表明:不同质量浓度GSFE处理较对照组均能显著降低柑橘青、绿霉病发病率及病情指数(P<0.05),其中GSFE质量浓度为5.50 mg/mL时的抑制效果最佳;同时,GSFE处理能够诱导‘南丰’蜜桔果皮中相关防御酶(苯丙氨酸解氨酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶)活力的提高,促进其抗氧化物质总酚和类黄酮的产生,并抑制脂氧合酶活力、减少丙二醛的积累、降低膜脂过氧化程度,从而提高‘南丰’蜜桔果实的抗病性。本研究结果可为设计开发GSFE类新型柑橘采后防腐保鲜剂提供思路。

裸脚菇属菌0612-9拮抗柑橘青霉及绿霉活性物质稳定性分析

青霉及绿霉病害会导致柑橘采后腐烂并引起巨大经济损失,裸脚菇属菌0612-9可抑制青、绿霉菌的生长。为探究该菌拮抗病原菌的物质基础及其稳定性,采用大孔树脂柱层析、硅胶柱色谱、薄层色谱法等分离,采用牛津杯法和分析型高效液相色谱检测其在不同温度、pH、紫外线照射(UV)、光照和氧化等不同条件下的稳定性。结果表明,裸脚菇属菌0612-9抑制青、绿霉菌生长的活性物质有2种,即I和II,物质I、II对意大利青霉和指状绿霉的EC50分别为95.72、137.36μg/mL和213.61、319.28μg/mL。物质I在高温(121℃)、UV、氧化和较广泛pH(pH2～10)条件下都稳定,光照7 d后抑菌效果有所减弱;物质Ⅱ在100℃及以下和酸性(pH2～7)条件下都较稳定,在光照、氧化下分别处理4、9 d后和UV处理4 h后抑菌效果才开始减弱。说明物质I、II在化学结构上可能存在较大差别,两者均有潜在柑橘采后防腐的生防价值。

一株祼脚菇属菌株产抗菌活性物的基础液体培养碳、氮源等优化及其对柑橘青绿霉菌的作用

江西是柑橘类水果的主要产区之一,青绿霉菌是导致柑橘采后腐烂的主要病害,化学杀菌剂可产生病原抗药性和残留,一株具有拮抗此病菌的祼脚菇属菌株0612-9被发现。为了探索其产活性物质的代谢培养和活性作用,采用菌丝生长速率法和显微观察法测定了其抗菌活性,单因素试验、Plackett-Burman、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验响应面设计等优化出液体培养基组成和培养条件。结果显示:液体培养基组成和培养条件为:马铃薯279.94g/L,葡萄糖30g/L,麸皮8.87g/L,MgSO_4·7H_2O 0.47g/L,KH_2PO_42g/L,发酵周期10d,接种量5 ml/100 ml,转速180r/min,摇床温度26℃,装液量100ml/250ml,发酵液抗病菌活性从42.26%提高到55.77%。对意大利青霉和指状青霉的EC_(50)分别为69.25g/L和56.70g/L,最小杀菌浓度250μg/ml低于阳性对照物抑霉唑的500μg/ml,并且对病原菌菌丝体有一定的毒害作用。该祼脚属菌株有潜在开发成柑橘采后保鲜剂的价值。