绞股蓝多糖提高小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能

研究不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/mL)绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino]多糖(GPP)对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,探讨GPP对机体免疫功能的调节作用及其可能的作用机制。采用中性红法、Griess法、CCK8法、ELISA法和荧光定量PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、增殖、细胞因子(NO、LDH、TNF-α、IL-1β)的分泌量、CaM和GSα基因的表达水平。结果表明,GPP激活小鼠腹腔巨噬细胞,随着GPP浓度的增加小鼠腹腔巨噬细胞增殖能力增强,当GPP浓度为50.0、100.0、200.0μg/mL时,吸光度与空白对照处理相比差异显著;GPP刺激小鼠腹腔巨噬细胞后,吞噬能力强于空白对照处理,GPP浓度为200.0μg/mL时,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力最强;GPP促进小鼠腹腔巨噬细胞NO、LDH、TNF-α和IL-1β的分泌;GPP上调CaM和GSα基因的表达,GPP浓度为100.0、25.0μg/mL时CaM、GSα基因表达量分别达到最高。

绞股蓝多糖的提取纯化和含量测定

通过正交设计实验,综合考虑提取效率和成本,优化了绞股蓝多糖的提取方法,并对绞股粗多糖进行了初步纯化,测定了提取物的糖含量,其含量水平较前有明显提高,这将为绞股蓝进一步开发生产奠定基础。

绞股蓝多糖对免疫功能的影响

绞股蓝多糖（２５，５０１００ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）能明显提高小鼠碳粒廓清速率，其Ｋ值分别为０．０５１７±０．０１１７，０．０４１９±０．０１１９，０．０５７６±０．０４８，与对照组（ＮＳ）０．０１６９±０．０１１７相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。能增强肝癌Ｈｅｐｓ小鼠ＮＫ细胞活性，其活性（％）分别为２１．４０±４．００，４１．１９±１１．５６，４９．６５±５．０６，除２５ｍｇ／ｋｇ剂量组外，均显著高于对照组１７．９９±２．３５（Ｐ＜０．０５），而对肉瘤Ｓ１８０小鼠ＮＫ细胞活性无明显影响。另外对小鼠血清溶血素和Ｓ１８０小鼠脾指数有显著提高作用，但对Ｈｅｐｓ小鼠脾和胸腺指数、Ｓ１８０小鼠胸腺指数和脾淋巴细胞转化无显著作用。

绞股蓝多糖提取分离、化学结构及生物活性的研究进展

绞股蓝是我国特色天然资源,近年来研究发现多糖是其重要的药用活性成分,具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降血糖、抗疲劳等生物活性。更重要的是绞股蓝多糖不仅具有显著的抗肿瘤活性,还参与和介导了免疫功能的调节,能够提高机体免疫功能而对正常细胞没有毒副作用,在恶性肿瘤、艾滋病等威胁人类健康疾病的防治和治疗方面具有广阔的应用前景,有希望开发成我国特色的创新药物。本文对绞股蓝多糖分离纯化、结构以及生物活性等方面进行详细综述,为以后进一步研究提供理论参考。

绞股蓝多糖的抗肿瘤作用及其机制研究

通过建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测绞股蓝多糖对小鼠肉瘤S180的体内抗肿瘤作用;采用MTT法检测绞股蓝多糖对体外培养的肿瘤细胞增殖的抑制作用。此外,采用比色法测定了绞股蓝多糖对巨噬细胞吞噬率和产生细胞因子NO的影响;采用ELISA法测定了绞股蓝多糖对巨噬细胞产生IL—1β和TNF—α的影响。绞股蓝多糖可明显抑制移植性动物肿瘤S180的生长,并呈明显的剂量依赖关系;经绞股蓝多糖刺激后,小鼠巨噬细胞对中性红的吞噬功能明显的增强,并能显著刺激巨噬细胞分泌NO、TNF—α和IL—1β。为绞股蓝多糖的进一步开发提供了实验数据。

从绞股蓝中联合提取皂苷、黄酮和多糖工艺优化

以体积分数由高至低的乙醇溶液为单一溶剂,从绞股蓝茶叶中联合提取皂苷、黄酮和多糖的工艺,利用正交试验得到的提取多糖最优工艺条件为80%乙醇溶液提取皂苷、30%乙醇溶液提取黄酮和5%乙醇溶液提取多糖。在此条件下,皂苷提取率8.75%,黄酮提取率0.75%,多糖提取率3.38%。联合提取工艺的原料利用率高于单一提取工艺,可为绞股蓝的综合利用提供参考。

绞股蓝内生真菌多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:探究绞股蓝内生真菌JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,为绞股蓝内生真菌多糖的应用提供基础数据。方法:确定4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glu-copyranoside,PNPG)比色法检测α-葡萄糖苷酶活力的最佳条件,以阿卡波糖为阳性对照,采用优化后的最佳条件测定JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并确定抑制类型、计算抑制常数;以Caco-2细胞作为体外产α-葡萄糖苷酶模型,测定JY25多糖的抑制效果。结果:反应时间30 min、反应温度44℃、pH 6.8、底物(PNPG)浓度5 mmol/L为PNPG比色法的最佳反应条件。以此优化条件进行比色,当JY25多糖质量浓度为6.15 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率达到最大(68.21%);JY25多糖的半数抑制浓度(IC_(50))为(2.46±0.42)mg/mL,抑制常数Ki为1.15 mg/mL,JY25多糖为竞争性抑制剂。在JY25多糖质量浓度为10.00 mg/mL时,对培养16 d的Caco-2细胞所产α-葡萄糖苷酶的抑制率达到16.48%。结论:体外实验证实JY25多糖具有竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的作用。

绞股蓝多糖对2型糖尿病大鼠血糖的影响及其机制初步研究

为研究绞股蓝多糖对实验性2型糖尿病大鼠血糖、血脂的影响及其可能的机制,采用Wistar大鼠高脂高糖饲料结合小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。通过测定空腹血糖(FBG)和葡萄糖耐量,观察灌胃给予绞股蓝多糖对糖尿病大鼠的治疗作用,同时测定大鼠的血清胰岛素(Ins)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及部分抗氧化系统相关指标。结果给予绞股蓝多糖后FBG明显降低,葡萄糖耐量曲线明显降低。此外,绞股蓝多糖可明显降低2型糖尿病大鼠的血清TC、TG、LDL和丙二醛水平,提高模型鼠的血清Ins、HDL、超氧化物歧化酶活性。说明绞股蓝多糖对实验性糖尿病大鼠有明显的降血糖、降血脂作用,其作用可能与增加Ins水平,增强抗氧化能力有关。

绞股蓝多糖的分离纯化及其对神经细胞谷氨酸损伤的保护作用

本文对绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino(GP)中的多糖成分进行了分离纯化,得到了两个均一多糖:GPS-2和GPS-3,并对GPS-3进行了纯度分析、分子量测定,结果表明:GPS-3的糖含量为78.10%,分子量为9100Dal。然后在细胞水平研究了这两种多糖对神经细胞谷氨酸损伤的保护作用。结果显示,不同浓度绞股蓝多糖试验组神经细胞损伤有不同程度的减轻,与谷氨酸损伤组相比有显著性差异(P<0.01)。

绞股蓝多糖提取工艺优化及咀嚼片的研制

通过单因素料液比、提取温度、提取时间和提取次数对提取率的影响和正交实验设计方法对绞股蓝多糖水提醇沉法的工艺进行了优化及绞股蓝多糖咀嚼片研制。实验结果表明,水提醇沉法提取多糖最佳工艺条件为料液比1:16,100℃提取2次,每次1 h。绞股蓝多糖咀嚼片最佳配方为绞股蓝多糖粉20.00%、淀粉9.75%、蔗糖粉40.00%、奶粉12.30%、甘露醇14.95%、柠檬酸0.50%。

绞股蓝多糖对断奶仔猪肠道微生物区系的影响

为探讨绞股蓝多糖(GPS)在断奶仔猪生产中的饲喂效果,分析在日粮中添加不同水平的GPS对断奶仔猪肠道pH值、肠道微生物菌群及肠道组织形态的影响。将60头(28±3)日龄体质量相近的三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪随机分为6组,空白对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.2%、0.4%、0.6%的GPS,试验Ⅳ、Ⅴ组分别在基础日粮中添加0.4%的中药复方多糖、0.01%的抗生素。结果显示,与空白对照组相比,在仔猪日粮中添加GPS,可有效降低小肠各段内容物的pH值,以试验Ⅱ组效果最佳,其十二指肠、空肠和回肠内容物的pH值分别显著下降5.2%、3.6%和7.9%;试验组肠管中的大肠杆菌数均降低,试验Ⅱ组回肠、盲肠和结肠大肠杆菌数分别显著降低14.6%、19.9%和12.8%;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组盲肠中的双歧杆菌数分别极显著提高31.7%、33.8%、33.3%、31.0%,回肠中乳酸杆菌数分别显著提高10.8%、13.9%、13.5%、10.5%,盲肠中乳酸杆菌数分别显著提高12.8%、15.5%、13.9%、14.2%,结肠中乳酸杆菌数分别显著提高11.0%、13.5%、11.3%、11.0%;试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组十二指肠绒毛长度分别显著提高24.8%、25.5%、24.9%,小肠的隐窝深度均降低。综上,日粮中添加GPS,能降低肠道内容物的pH值,抑制大肠杆菌的繁殖,改善断奶仔猪肠道的形态结构,以添加0.4%的GPS效果最好。

绞股蓝多糖的组成分析及其对质粒DNA的保护作用

目的:提取分离从陕西省平利县采集的绞股蓝中的多糖成分,分析其组成和对质粒DNA的保护作用。方法:绞股蓝经水提醇沉、透析和脱蛋白后得多糖,将多糖酸水解并用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化后进行高效液相色谱分析;同时,观察绞股蓝多糖体外对过氧化氢(H2O2)光解反应诱导质粒DNA损伤的保护作用。结果:绞股蓝多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖8种单糖组成;绞股蓝多糖能保护DNA免受损伤,这种保护作用呈浓度依赖关系。结论:本试验方法简便灵敏,结果准确可靠,为综合开发利用绞股蓝提供了科学依据。

绞股蓝多糖提取工艺比较及优化

目的：通过探讨热水浸提法和微波辅助提取确定提取绞股蓝多糖的最佳3T-艺。方法：采用热水浸提和微波辅助提取绞股蓝多糖，通过分别考察两种方法的单因素，确定其优化条件范围，通过正交实验L9（3^4）进一步确定绞股蓝多糖的提取工艺条件。最后通过比较两种方法多糖的提取率，得到绞股蓝多糖的优化提取工艺。结果：热水浸提法的优化工艺条件是15倍量水，90℃，2h提取2次。根据确定的工艺条件，测得绞股蓝多糖的平均提取率为4．03％。微波辅助提取的优化工艺条件是浸提70min，微波功率为70％（560W），25倍量水，处理6min。在此条件下，绞股蓝多糖的平均提取率为3．91％。结论：微波辅助提取绞股蓝多糖与热水浸提比较，虽然提取率不如前者高，但微波辅助提取能缩短提取时间，具有成本低、效率高的优点，应用前景广阔。

超声辅助提取绞股蓝多糖工艺研究

[目的]优化超声提取绞股蓝多糖的工艺。[方法]以绞股蓝多糖含量为考察指标,利用响应面法确定绞股蓝多糖的最佳超声提取条件。[结果]结果表明,超声提取的最佳工艺为:提取温度83℃,液料比26 m l/g,时间31 m in,多糖提取率为3.356%。[结论]该研究首次得到了以超声法从绞股蓝中提取多糖的工艺路线,与传统工艺比较超声法省时、节能、提取率高。

羧甲基绞股蓝多糖的制备及其抗氧化活性研究

对绞股蓝多糖(GPMP)进行羧甲基化修饰制备了羧甲基绞股蓝多糖(CM-GPMP),采用红外光谱对其结构进行了表征,并对其修饰前后体外抗氧化活性进行了初步研究。结果表明,CM-GPMP和GPMP对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,浓度为2.0 mg.mL-1时,CM-GPMP对上述三种自由基的清除率分别为25.71%、67.30%、29.95%,而GPMP对三种自由基的清除率分别为23.27%、84.93%、15.24%。由此可见,羧甲基化后,绞股蓝多糖清除超氧阴离子自由基的能力有所提高,清除羟基自由基的能力有所降低,而清除DPPH自由基的能力变化不大。

绞股蓝多糖脱蛋白工艺及相对分子质量的测定

采用Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法、TCA-Sevag法对绞股蓝粗多糖脱蛋白工艺进行研究.通过DEAE—52纤维素柱层析和葡聚糖凝胶G—200柱层析对粗多糖进行分离纯化,采用高效液相色谱分析法对精制多糖GPM—21的相对分子质量进行测定分析.结果表明:木瓜蛋白酶-Sevag法效果最佳,蛋白脱除率高且多糖损失量小,累计蛋白脱除率可达63.08%,多糖保留率为77.34%.液相渗透色谱法测定GPM—21的相对分子质量为200 576.

绞股蓝多糖保护力竭运动诱导肝细胞凋亡

为研究绞股蓝多糖(GMP)对力竭运动诱导大鼠肝细胞凋亡的影响。采用大鼠力竭运动模型,将32只雄性Wistar大鼠随机分为4组:安静对照组、运动力竭对照组、绞股蓝多糖低剂量组+运动力竭组,绞股蓝多糖高剂量组+运动力竭组;采用免疫组织化学方法检测大鼠肝组织Bax、Bcl-2蛋白的表达,对各组大鼠肝组织Bax/Bcl-2比值与肝组织细胞凋亡情况进行分析;采用以分光光度法检测肝脏主要抗氧化酶活性与丙二醛(MDA)含量。结果发现,绞股蓝多糖后能使力竭运动后大鼠肝组织Bax的表达减弱、Bcl-2的表达增强、Bax/Bcl-2比值降低;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性增加;MDA含量降低。绞股蓝多糖对力竭运动诱导肝组织氧化应激及细胞凋亡具有保护作用。

绞股蓝多糖对疲劳运动小鼠免疫能力的影响

通过建立了小鼠力竭运动模型,给小鼠灌服不同剂量的绞股蓝多糖溶液,测定其力竭游泳时间,并对小鼠的免疫器官重量、淋巴细胞转化和迟发型超敏反应程度进行了测定,旨在探讨服用绞股蓝多糖对小鼠力竭运动的影响及其机制。结果表明:绞股蓝多糖能够明显延长力竭运动时间;服用绞股蓝多糖对疲劳运动小鼠的免疫器官脾脏功能有增强作用,对小鼠特异性免疫能力有提高作用,高剂量下对于ConA诱导小鼠淋巴细胞转化能力有提高作用。

绞股蓝内生真菌产胞外多糖发酵条件的优化

药用植物绞股蓝内生真菌JY25胞外多糖具有抗癌、抗氧化等多种活性作用,对其发酵条件进行优化,以期达到高产胞外多糖的效果。以胞外多糖产量为检验指标,采用单因素和正交试验对培养时间、接种量、碳源、氮源进行优化。单因素试验结果表明,绞股蓝内生真菌JY25产胞外多糖的最佳培养周期为8 d,最佳接种量为7%,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母粉;正交试验优化后发现,产胞外多糖的最佳发酵条件为培养时间8 d、接种量5%、葡萄糖添加量40 g/L、酵母粉添加量5 g/L,在此条件下胞外多糖的产量达到271.40 mg/L。

绞股蓝多糖的药理活性及在养殖业上的应用

绞股蓝多糖[Gynostemma pentaphyllum polysaccharide(GPS)]是绞股蓝中的主要活性成分,是一种具有较强活性的免疫增强剂,不但有理想的抗肿瘤功能以及不俗的抗氧化活性,而且有显著的消炎、镇静、降血脂、平喘、催眠、抗应激、抗衰老和抗疲劳以及增强机体免疫功能等功效.本文就GPS的组成成分和生理活性及绞股蓝在养殖业的应用等方面进行了系统的总结,为进一步开发和利用绞股蓝提供理论依据.