绞股蓝次级皂苷H诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用研究

目的探讨绞股蓝次级皂苷H(Gypensapogenin H,GH)对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用。方法采用5、10、20、40、60、80μmol/L的GH处理人乳腺癌MCF-7细胞48 h后,MTT法测定GH对细胞增殖的影响;20μmol/L的GH作用细胞24 h后,相差显微镜下观察细胞的形态学变化,DAPI染色,荧光显微镜下观察凋亡小体的形成;GH作用细胞6、12、24 h后,流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法检测GH对Bcl-2、Bax、Cytochrome C、Caspase 3等蛋白表达的影响。结果 GH抑制细胞增殖作用呈明显的浓度相关性,半数抑制浓度(IC50)为(8.67±1.22)μmol/L;GH组细胞形态与对照组比较发生显著变化,主要表现为细胞皱缩、染色质浓缩、细胞核变形;细胞经DAPI染色后在荧光显微镜下可观察到有凋亡小体形成;随GH作用时间延长,细胞凋亡率明显上升,与对照组比较,GH作用12、24 h细胞早期凋亡率显著升高(P<0.05、0.01);蛋白免疫印迹显示,与对照组比较,GH作用6、24 h Bax,6、12、24 h Cleaved Caspase 3和Cytochrome C蛋白水平显著增加(P<0.05、0.01);6、12、24 h Bcl-2和12、24 h Caspase 3蛋白表达量显著减少(P<0.05、0.01)。结论 GH通过线粒体通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。