比利时杜鹃花类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因克隆及功能分析

【目的】类黄酮3’-羟化酶(flavanone 3’-hydroxylase,F3’H)是植物花青素合成过程中的关键酶,探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort)F3’H基因的功能及表达特性。【方法】以比利时杜鹃花不同发育时期的花瓣及盛花期的根、茎、叶为实验材料,从比利时杜鹃花转录本数据库中筛选类黄酮生物合成通路关键酶类黄酮3’-羟化酶基因序列信息并进行生物信息学分析,利用反转录(RT-PCR)技术克隆RhF3’H基因;利用紫外分光光度计测定了比利时杜鹃花花瓣不同时期的花青素含量,利用RT-qPCR技术对不同发育时期花瓣和成熟期的不同组织进行RhF3’H基因表达量分析;采用Gateway技术构建过表达载体35S:RhF3’H-GFP重组载体进行亚细胞定位验证;构建p1302-RhF3’H过表达载体对比利时杜鹃花花瓣进行侵染。【结果】成功获得比利时杜鹃花RhF3’H基因长度为1557 bp,编码518个氨基酸,具有保守的F3’H结构域,属于P450超家族;系统进化树分析显示,比利时杜鹃花RhF3’H与龙眼和荔枝F3’H蛋白亲缘关系最近;RT-qPCR结果显示,RhF3’H在比利时杜鹃花不同花瓣时期和根、茎、叶组织中均有表达,在不同花瓣发育时期中,盛开期和衰败期中RhF3’H基因的表达量较高,与花青素含量结果相一致;亚细胞定位分析显示,RhF3’H主要存在于细胞膜上;成功构建P1302-RhF3’H瞬时过表达载体,相较于CK和p1302,p1302-RhF3’H在杜鹃花花瓣中显著高表达,其花青素含量也显著增加。【结论】RhF3’H基因在花瓣细胞膜中表达,表达模式与花青素积累趋势一致;过表达RhF3’H基因促进了花青素的合成。

对比常规护理与“SBAR-H-F交接班”在ICU护理床边交接班的实施价值

目的分析在ICU护理床边交接班中实施“SBAR-H-F交接班”的应用价值。方法选择2022年1月至2022年12月我院ICU患者200例,通过双盲法分为试验组与对照组,各100例,对照组接受常规护理,试验组接受“SBAR-H-F交接班”,比较两组患者相关评分、护士对患者整体情况知晓评分、护理措施落实情况、质量合格率。结果试验组护士对患者整体情况知晓评分、护理措施落实情况以及相关评分均高于对照组(P<0.05)。试验组护士的质量不合格率低于对照组(P<0.05)。结论在ICU护理床边交接班中实施SBAR-H-F交接班能帮助护士全面掌握患者的一般情况,也能促进护理措施落实到位,提升护理质量合格率。

F-H-调和映照的刘维尔型定理

该文研究了从黎曼流形出发到叶状黎曼流形的光滑映照和相应的F-水平能量泛函,称此类能量变分的临界点为F-H-调和映照,利用F-水平应力能量张量建立了关于F-水平能量增长性条件下F-H-调和映照的刘维尔型定理.

C-F-S-H/PCE纳米晶核对矿粉水泥水化和力学性能的影响

研究了水化铁硅酸钙/聚羧酸减水剂(C-F-S-H/PCE)纳米晶核对矿粉水泥水化和力学性能的影响.采用力学性能测试、等温量热分析、X射线衍射仪和压汞法测试了大矿粉掺量(50%、70%、90%)矿粉水泥的抗压强度、水化放热、水化产物和孔隙率.结果表明:C-F-S-H/PCE纳米晶核的掺入能够显著提升矿粉水泥的抗压强度,50%矿粉掺量的矿粉水泥1 d强度提升60%;C-F-S-H/PCE纳米晶核对矿粉水泥的水化反应具有调控作用,通过加速水泥的早期水化及氢氧化钙的形成激发了矿粉反应活性,从而推动了矿粉反应的持续进行.

磁暴期内夜间h’F的突增现象

用3个经度链上电离层垂测站资料分析磁暴时夜间h＇F的同时突增现象提出了电动耦合在夜间出现东向电场从而使F层抬升的物理机制同时也解释了突增现象在午夜后更多，且增幅更强的事实．

犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。

犬瘟热病毒小熊猫株H、F和N基因的克隆及表达

根据G enB ank中发表的犬瘟热病毒(CDV)的核苷酸序列,设计并合成了扩增CDV H、F和N基因的3对引物,经RT-PCR分别扩增获得了CDV小熊猫株(LP株)H、F和N基因,并对H、F及N基因进行了克隆和序列测定。序列分析表明,CDV LP株属于强毒谱系,与CDV流行株的亲缘关系近,H基因含有较多潜在的糖基化位点,F和N基因相对比较保守。将CDV LP株H、F和N基因克隆入真核表达载体pVAX 1的CM V启动子下游,构建了CDV基因疫苗表达载体pVAXLPH、pVAXLPF、pVAXLPN,体外转染BHK-21细胞,用间接EL ISA方法检测到目的蛋白的表达。用构建的3个表达质粒免疫小鼠,从小鼠血清中检测到了抗CDV抗体,初步证实用CDVH、F和N基因作为核酸疫苗免疫动物,可以激活机体的免疫应答。

CiF3H基因克隆及功能分析

黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是类黄酮合成途径的中枢位点,调控代谢途径中黄酮醇和花青素合成。文章根据转录组数据库中F3H基因中间片段设计特异引物,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到CiF3H基因全长,通过序列分析、系统进化分析加以确认。qRT-PCR检测分析发现,中间锦鸡儿CiF3H基因受紫外、NaCl和ABA等胁迫诱导时表达模式具有相同规律。CiF3H基因在叶和根中表达量相当,茎中较少。异源表达CiF3H基因拟南芥的总黄酮含量少量增加,花青素含量降低。

大鼠后肢肌电图H反射和F波的研究

为探讨正常大鼠后肢肌电图H反射和F波的测定方法及其波型特点，采用两种不同的方式（显露与不显露坐骨神经）对大鼠双侧后肢腓肠肌进行诱发肌电图检查，观察波型特点．测定其潜伏时及振幅，并进行比较。结果：两种方法均可引出H反射和F波，H波为单相或二捆波，其潜伏时为6．6±0．5ms，最大振幅3．9±0．4mV；F波为单相波．潜伏时为6．4±0．6ms，振幅为1．0±0．2mV。手术显露坐骨神经后测定H反射和F波成功率高．稳定性好，干扰较小。提示夭鼠后肢可引出与人类类似的H反射和F波，显露坐骨神经后进行测定效果较好。

脊髓损伤患者下肢胫神经H反射和F波的临床观察

目的 :观察脊髓损伤 (SCI)患者不同时期下肢胫神经H反射和F波的变化与临床神经体征之间的关系及电生理评定方面的意义。方法 :对同一时期在我科住院的 2 4例SCI患者进行双下肢胫神经H反射和F波检查 ,同时采用Ashworth痉挛评定方法评定及记录患肢肌张力、腱反射等。观察H反射和F波的特征表现与临床体征之间的关系。结果 :SCI患者临床不同时期 ,下肢H反射和F波的表现不同 ,H反射和F波的表现特征受神经体征严重程度的影响。结论 :H反射和F波有可能做为临床评定痉挛的客观电生理指标 ,它优于主观的Ashworth等痉挛评定方法 。

犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达

将克隆质粒pMD-18T-H和pMD-18T-F分别进行双酶切,获得纯化的H基因和F基因,在T4DNA连接酶的作用下,亚克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得原核重组质粒pET28a-H和pET28a-F.将原核重组质粒转化大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta2(DE3)中进行表达,SDS-PAGE结果显示H基因和F基因分别表达相对分子质量约为31 400和38 200的融合蛋白,Western-blot检测结果显示,表达蛋白均可与CDV标准阳性血清呈阳性反应,表明原核表达的CDV H蛋白和F蛋白在反应原性上具有与天然H蛋白和F蛋白同样的特性,可作为CDV诊断用抗原,为CDV的免疫预防研究奠定基础.

F波、H反射在卒中后肢体痉挛疗效评估中的研究进展

卒中后肢体痉挛是上运动神经元损伤导致高级中枢失去对脊髓牵张反射的抑制,脊髓反射性增高引起以牵张反射增强为特征的肌肉张力异常。肢体痉挛是卒中后常见并发症之一,严重影响了卒中患者功能康复。近年来涌现出各类改善卒中后肢体痉挛的治疗方法,但其疗效评价标准不一,其中以主观性量表评价为主。笔者搜集了近些年国内外卒中后肢体痉挛治疗的临床研究文献,发现F波、H反射相关参数等客观评价指标被越来越多地与主观评价量表相结合,运用到各类临床研究的疗效评价中。相对于H反射,F波具有更加灵敏的特点,能更好反映肢体肌张力的变化,常与改良Ashworth痉挛量表一起作为缺血性卒中后肢体痉挛疗效的评价指标。

小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。

基于CEH∞ F的移动机器人SLAM算法研究

针对移动机器人同时定位与地图创建(SLAM)面对噪声干扰时估计精度低、鲁棒性差的缺点,提出一种基于容积扩展H∞滤波(CEH∞F)的SLAM算法。首先,通过线性误差传播特性将容积变换嵌入到扩展H∞滤波框架中,利用得到的CEH∞F计算SLAM条件转移概率密度,避免雅克比矩阵的计算和线性化误差积累的同时增强了算法的鲁棒性;另外,在每次迭代中更新调节因子γ,将噪声干扰到估计误差最大能量增益控制在较小范围内,进一步增强算法鲁棒性。实验部分将所提算法与扩展卡尔曼滤波SLAM(EKF-SLAM)、无迹卡尔曼滤波SLAM(UKF-SLAM)、容积卡尔曼滤波SLAM(CKF-SLAM)在不同噪声环境下进行了对比。结果表明,CEH∞F-SLAM算法具有良好的稳定性与精度,是一种有效的SLAM算法。

10,11-二氢-5H-二苯并[b,f]氮杂的合成

以邻硝基甲苯为起始原料 ,经缩合、加氢还原、磷酸成盐得 2 ,2′-二氨基联苄二磷酸盐 ,再经环合制得 10 ,11-二氢 - 5 H -二苯并 [b,f]氮杂。总收率 6 3.5 %。

基于叶绿体psbA-trnH序列和trnL-F序列的牡丹野生种间关系

对牡丹组全部9个野生种15个居群及凤丹的叶绿体psb A-trn H和trn L-F序列进行测序,并采用邻位相连法分别构建了psb A-trn H序列和trn L-F序列的系统发育树。结果显示:1)两段序列的基因树均支持牡丹组划分为两个亚组的分类方法,与前人的研究结果一致。2)psb A-trn H序列基因树表明大花黄牡丹与黄牡丹的亲缘关系最近,这与大花黄牡丹曾被确定为黄牡丹的一个变种的历史一致。3)革质花盘亚组内,基于psb A-trn H和trn L-F序列的研究结果大体一致,分歧主要在四川牡丹的地位问题。4)psb A-trn H序列和trn L-F序列基因树分别表明杨山牡丹与凤丹具有最近或较近的亲缘关系。

硼烷缺电子多中心桥键的H-F力研究

Hellmann-Feynman静电力表现了分子中电荷分布及对各原子核的作用。H-F力的方向性可描述电子电荷的数量和位置,具有定量、形象和直观的特点,已在弯键的研究中显示出来。这一方法尚可用于多中心缺电子桥键的研究。1理论与方法按LCAO-MO理论对H-F力进行分解,除有重叠力、极化力和屏蔽力外.

狐源犬瘟热病毒H基因和F基因的克隆与序列分析

根据GenBank发表的犬瘟热病毒(CDV)核酸序列[CDV5804(AY386315)、CDV01-2689(AY649446)、CDV A75-17(AF164967)、CDV 00-2601(AY443350)、CDV 98-2645(AY445077)、CDV 98-2654(AY466011)和CDV Onderstepoort(AF378705)],分别设计合成扩增CDVH基因和F基因的引物。采用RT-PCR技术扩增狐源CDV泰安株(CDV-FOX-TA)H基因和F基因,分别将H基因与F基因克隆进pMD18-T载体,进行序列分析。结果表明,CDV-FOX-TA株H基因有1个ORF,全长1824bp,编码607个氨基酸,与CDV Onderstpeort、CDV Convac的同源性分别为89.2%和90.6%,与CDV A75-17的同源性为98.6%,与CDV LP的同源性为98.7%。CDV-FOX-TA F基因有1个ORF,全长1889bp,编码662个氨基酸,CDV F蛋白信号肽区域易发生突变,但F0蛋白裂解点(RRQRR)、13个半胱氨酸残基、4个潜在的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区都高度保守。CDV H基因和F基因系统发生分析表明,CDV-FOX-TA与CDV A75-17和CDV LP亲源关系较为密切。

C_nH_(2n)(n=2,3,4)与BX_3(X=H,F,Cl)作用的DFT研究

用量子化学的密度泛函理论方法对BX3(X=H,F,Cl)与烯烃CnH2n(n=2,3,4)形成的复合物进行了研究,结果表明,复合物的构型皆为BX3位于烯烃π键的上方,并且偏向氢原子数较多的碳原子一侧。C-C双键中的π电子通过向BH3中B的空p轨道转移电子而形成复合物,但BF3和BCl3与烯烃分子只是通过微弱的分子间作用力结合,复合物的形成使分子的振动光谱随作用的强弱而出现一定的红移现象。

串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达

为了研发犬瘟热乳酸杆菌载体疫苗,更好地预防犬瘟热,试验采用重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增IL2-F-H融合基因,将IL2-F-H融合基因亚克隆至穿梭载体pSIP409上,构建pSIP-IL2-F-H重组表达载体,并电转化至植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建串联水貂白细胞介素-2(IL-2)的犬瘟热病毒(CDV)F-H融合基因重组乳酸杆菌;利用SDS-PAGE和Western-blot检测IL2-F-H融合蛋白的表达情况。检测表明,重组乳酸杆菌表达了分子量约为80.16kDa的IL2-F-H融合蛋白,且该融合蛋白能与CDV抗体发生反应,具有反应原性。