应用H-Y单克隆抗体鉴定小鼠和家兔胚胎性别

以C57BL/6雄性小鼠的脾细胞免疫同系雌性小鼠,选择免疫应答反应较好的雌性小鼠4只,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合后的杂交瘤细胞经过3次克隆,筛选出了2株能够分泌H-Y抗体的杂交瘤细胞系HYA1和HYA2,其分泌的相应抗体分别命名为HYa1和HYa2。琼脂双扩散试验表明,HYa1和HYa2分别属于IgM和IgG亚类。胚胎间接免疫荧光分析及胚胎细胞毒试验证明,H-Y单克隆抗体能与雄性胚胎表面的H-Y抗原结合,在有补体存在时,能够溶解雄性胚胎。在胚胎免疫荧光分析中,共分析了438枚8细胞期至桑椹期小鼠胚胎,其中特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占50.5％(219枚)和47.3％(207枚),不易分辨胚胎占2.7％(12枚)。在86枚家兔胚胎中,特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占48.8％(42枚)和45.3％(39枚),不易分辨胚胎占5.8％(5枚)。小鼠胚胎移植后,接受发特异性荧光胚胎的一组母鼠生了22只小鼠,其雌性率和雄性率分别为18.2％(4只)和81.8％(18只)。而移植无特异性荧光胚胎的一组母鼠生了19只小鼠,其雌性率和雄性率分别为89.5％(17只)和10.5％(2只)。

抗牛H-Y抗原单克隆抗体的研制试验

Ｈ－Ｙ抗原是位于Ｙ染色体上的基因位点所编码的细胞膜抗原，能直接或间接地诱导原始性腺分化为睾丸。以牛睾丸组织匀浆作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，用杂交瘤细胞技术制备的单克隆抗体６Ｆ、７Ｈ与部分牛精子呈阳性反应。

血清学检测H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆的分析

目的为分析H-Y噬菌体Fab抗体特异性,筛选用于抗体亲和力提高的H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆。方法以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有雄性特异性结合活性的阳性克隆A6、A8、E6为基础,通过C57BL/6鼠脾细胞为抗原的ELISA分析3株阳性克隆的特异性,镜下观察亲和力较好的A8阳性克隆ELISA结果,利用生物信息学方法预测分析该克隆的抗体基因可变区序列和结构。结果 ELISA分析显示3株阳性克隆具有雄性特异性,其中A8阳性克隆具备较好的雄性特异性。A8克隆具有免疫球蛋白轻链和重链可变区结构,其重链、轻链可变区分别属于VH I和VκIV基因家族。结论 A8阳性克隆可用于后续的导向筛选和抗体基因改造等研究工作。

妊娠浓度雌、孕激素对小鼠H-Y皮肤移植物存活的影响及机制研究

目的:探讨妊娠浓度雌激素(E2)、孕激素(P4)对小鼠H-Y皮肤移植的影响及其机制。方法:建立小鼠去势模型,每天分别注射E2、P4及E2+P4联合注射,14 d后受鼠行H-Y皮肤移植并继续给药。检测移植前及移植后72 h外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)变化及外周血细胞因子水平;观察H-Y皮肤移植物的存活情况。结果:E2可提高外周血Treg的比例(P<0.05),移植后Treg的比例进一步升高(P<0.05);P4对Treg没有显著影响(P>0.05),而E2+P4联合对Treg的影响与单独应用E2结果相似(P>0.05)。移植后P4对Treg仍无明显影响(P>0.05),而E2+P4联合亦不能进一步提高Treg的比例。细胞因子检测显示,E2、P4均能减少促炎因子分泌,并提高抗炎因子分泌(P<0.05)。两者均能有效延长H-Y皮肤移植物存活(P<0.05),且具有协同效应。结论:P4可通过诱导免疫偏移促进H-Y皮肤移植物的存活。而E2除诱导免疫偏移外,还通过提高Treg水平而延长移植物的存活时间。

黄鳝(Monopterus albus)H-Y抗原的研究

利用自制的抗Ｈ－Ｙ血清，对黄鳝进行脾淋巴细胞毒性试验，检测各发育时期的性腺、脑、脾及肌肉组织，结果如下：（１）雄性有Ｈ－Ｙ抗原存在，雌性无；（２）性逆转过程中，Ｈ－Ｙ抗原从雌性到雄性是从无到有逐渐递增的；（３）黄鳝经１７α－甲基睾酮（１７α－ＭＴ）处理后，雌性、间性、雄性三个发育阶段Ｈ－Ｙ抗原的存在状况并未发现显著改变。

抗小鼠雄性特异性抗原(H-Y抗原)单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合，以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选，共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。

附植前小鼠胚胎上H-Y抗原表达的研究

用 8～ 1 2周龄 BALB/c公鼠采取皮肤移植和脾细胞腹腔注射 2种方式免疫同日龄纯系 BALB/c母鼠 ,制备 H-Y抗血清。经精子微量细胞毒性试验 ,筛选的抗血清用于胚胎体外培养 ,以鉴定附植前小鼠胚胎上 H-Y抗原的表达。选用 8cell-早期囊胚进行体外培养 ,分别于 5～ 6、1 8和 2 4 h观察胚胎发育情况。 5～ 6h后 ,H-Y抗血清培养的胚胎退化率高达 4 0 %,且发育迟缓 ,与自然性比例差异不明显 ( P>0 .0 5)。正常血清培养的胚胎 2 4 h左右 。

H-Y抗原候选基因的研究进展

雄性特异性组织相容性抗原(male specific minor histompatibility antigens,H-Y抗原)是由Y染色体上的基因编码,在雄性动物细胞中普遍表达(包括胚胎和滋养层细胞)。H-Y抗原不仅能引起基因型相同的雌性动物排斥雄性组织,也能导致人白细胞抗原匹配干细胞移植术后出现移植抗宿主性疾病(GVH)。细胞毒性T淋巴细胞检测到几个不同的H-Y抗原表位,这些肽是从胞内蛋白分离出来,由主要组织相容性复合分子结合呈递在细胞表面。H-Y抗原肽与人白细胞抗原Ⅰ类和Ⅱ类分子特异结合参与免疫反应,从而影响移植结果。近年来越来越多的文献报道了H-Y抗原的相关研究,作者主要综述编码H-Y抗原的相关候选基因,并对它在疾病等方面的前景作出了一些展望。

精子中H-Y抗原的蛋白和mRNA表达背离

目的:进一步验证成熟精子中是否存在H-Y抗原的mRNA,并探讨精子mRNA的保留机制。方法:采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。提取成熟精子总RNA,用RT-PCR的方法观察精子mRNA中是否含有H-Y抗原的mRNA。结果:免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光;流式细胞仪检测显示49.86%精子为H-Y抗原阳性。RT-PCR结果显示,未扩增到H-Y抗原的mRNA特异性条带。结论:成熟精子表面存在有H-Y抗原,但未检测到H-Y抗原的mRNA。

H-Y抗血清的制备及其在小鼠胚胎性别鉴定上的应用

建立了完善的检测H-Y抗体的CELISA法。首次获得了C57BL/6小鼠对H-Y抗原的抗体应答曲线。高效价的H-Y抗血清明显地提高了小鼠胚胎性别鉴定的准确率。

泥鳅和大鳞副泥鳅性腺细胞H－Y抗原的检测

以雄性小鼠脾细胞为抗原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得了高滴度的抗Ｈ－Ｙ抗原抗体．在此基础上，利用细胞毒性实验，对泥鳅和大鳞副泥鳅的性腺细胞进行了Ｈ－Ｙ抗原的检测．结果表明，泥鳅中雌雄性腺细胞均含有Ｈ－Ｙ抗原；大鳞副泥鳅中，Ｈ－Ｙ抗原仅存在于雌性性腺细胞中，提示其为ＺＺ／ＺＷ型性别决定．

CO-C7H8双功能一体化固体电解质气体传感器的研制

采用溶胶-凝胶法合成NASICON固体电解质,并以NASICON为基体材料,Y2O3及ZnTiO3为敏感电极制作管式CO-C7H8双功能一体化气体传感器。研究表明,在350~450℃时,CO及C7H8浓度在（5~50）×10^-6体积分数范围内,器件的EMF值与CO和C7H8浓度的对数分别呈现较好的线性关系。器件在400℃时对CO和C7H8的灵敏度分别为-40和64mV/decade。并且器件在此温度下表现出较好的选择性和响应恢复特性。

新余市甲型H1N1流感病毒H275Y突变监测

目的分析2013年-2014年新余市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性。方法收集新余市流感监测哨点医院的流感样病例的咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,随机选择15株甲型H1N1流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒NA基因部分片段,应用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法进行酶切分析。结果新余市15株甲型H1N1流感病毒中,仅有A/江西渝水/SWL1220/2014(H1)发生了H275Y突变,它具有Oseltamivir耐药性。结论新余市绝大多数甲型H1N1流感毒株对Oseltamivir敏感,但仍有必要持续监测和防范Oseltamivir耐药毒株的出现。

溶胶-凝胶法制备Y_(0.06)Sr_(0.94)Ti_(1-x)Fe_xO_(3-δ)混合导体材料的电性能

采用溶胶-凝胶法制备Y0.06Sr0.94Ti1-xFexO3-δ（x为原子分数。x=0.2，0.3，0.4，0.5）混合导体材料，用X射线衍射（XRD）分析该材料的物相，采用交流阻抗法和电子阻塞电极法分别测定其总电导率与离子电导率，研究铁含量对Y0.06Sr0.94TiO3混合导体材料的结构及电性能的影响。结果表明该材料属于单一立方相钙钛矿结构；在测试温度范围内，Y0.06Sr0.94Ti1-xFexO3-δ的总电导率和离子电导率都随温度升高而增大；随 Fe 掺杂量增加，总电导率和离子电导率都增大。在800℃下Y0.06Sr0.94Ti1-xFexO3-δ（x=0.2，0.3，0.4，0.5）的总电导率为0.019～0.12 S/cm，离子电导率为0.0106～0.0153 S/cm。根据传导活化能可以看出，x从0.3增加到0.4时材料的传导机制发生改变。

H_（91－1）和Y_（81）G_4两株禽腺病毒人工感染鸡血清和卵黄抗体变化的

Ｈ_（９１－１）和Ｙ_（８１）Ｇ_４两株禽腺病毒人工感染鸡血清和卵黄抗体变化的检测朱国强，王永坤，王东华，张彪，郭进荣，金建（扬州大学农学院牧医系，江苏２２５００１）一、材料（一）种毒ＡＶＩ２７株由澳大利亚引进：Ｈ_９１－１毒株是１９９１年从海安发病鸡中...

用 H-抗原方法鉴定小鼠胚胎性别的研究

本试验选用纯系 C_(57)BL/6小鼠,将雄鼠脾细胞悬液经腹腔注射免疫同基因型雌鼠。加强免疫后,常规尾静脉采血制备抗 H-Y 抗血清。采用精子微量细胞毒试验和酶联免疫法(ELISA)2种方法进行抗血清检测。将特异性和效价均较好的抗H-Y 抗血清用于间接免疫荧光法鉴定小鼠胚胎性别。共鉴定桑椹胚和早期囊胚462枚,呈荧光阳性(雄性)的占47%(219/462);呈荧光阴性(雌性)的占53%(243/462),经 X^2检验,符合正常性比例(1:1,P>0.05)。将这2类胚胎分别移植给假孕受体进行验证,并对验证结果进行分析。

H－Y单克隆抗体的制备方法

用Ｂａｌｂ／ｃ雄小鼠的脾细胞和皮肤组织对同系雌小鼠脾脏作一次直接免疫和５次腹腔加强免疫，雌小鼠产生良好的免疫应答。其抗血清用未经免疫的雌小鼠脾细胞吸收后，经细胞毒性法检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价可达１：１０２４；选择免疫应答最好的２只雌小鼠，取其脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞进行融合，融合率１００％，经３次有限稀释克隆后，取４只阳性最强的杂交瘤细胞制备腹水。取其中一株的腹水采用胚胎细胞毒法进行特异性鉴定，结果其对２０个正常胚胎中的７个有杀伤溶解现象。４株细胞系分泌的抗体（腹水）以精子细胞毒法测定其效价分别为１：５１２、１：５１２、１：２５６和１：１２８。

乌鳢性腺中H──Y抗原的检测

本文对鲈形目鱼类乌鳢的性腺进行了Ｈ－Ｙ抗原的检测。结果表明，乌鳢雄性个体对Ｈ－Ｙ抗体的吸收水平显著高于雌性个体的吸收水平。故认为，在乌鳢这类高位类鱼中，Ｈ－Ｙ抗原可能只与异配性别相关联。

奶山羊DDX3Y蛋白多克隆抗体的制备

【目的】制备针对奶山羊DDX3Y蛋白的特异性多克隆抗体,为奶山羊H-Y抗原蛋白DDX3Y的功能研究奠定基础。【方法】以奶山羊睾丸组织提取的RNA反转录所得的cDNA为模板,采用PCR方法扩增得到奶山羊DDX3Y基因CDs区全序列,测序后通过生物信息学方法比对分析确定DDX3Y蛋白N端1-120氨基酸及C端570-660氨基酸为抗原片段,然后用PCR分别克隆这2个片段的基因,最后利用搭桥PCR方法得到奶山羊DDX3Y截短抗原基因序列。将DDX3Y截短抗原基因序列连接pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-DDX3Y原核表达载体,将该载体导入到大肠杆菌BL21中诱导表达。通过Ni-NTA Resin纯化重组蛋白后免疫3月龄雌性新西兰大耳兔,采用间接ELISA(iELISA)法测定抗体效价,用Western blot测定抗体特异性。【结果】PCR扩增得到1 983 bp奶山羊DDX3Y基因CDs区全长序列及CDs区5′端360 bp(1-360 bp)序列和3′端273 bp(1 710-1 983 bp)序列。搭桥PCR获得了633 bp的DDX3Y截短抗原基因序列。成功构建了pET32a(+)-DDX3Y载体,并表达出分子质量约为42 ku的重组蛋白。制备出奶山羊DDX3Y截短抗原蛋白多克隆抗体,iELISA法检测抗体效价为1∶10~5;Western blot检测表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别原核表达的奶山羊DDX3Y截短抗原蛋白以及公羊睾丸组织DDX3Y蛋白。【结论】成功制备出了奶山羊DDX3Y截短抗原蛋白多克隆抗体。

CO_2/H_2低温合成甲醇的研究

以CO2/H2为原料,Cu-Zn基催化剂,醇溶剂,低温低压(443 K、3.0 MPa)下合成甲醇.考察时间、温度、催化剂对反应的影响.结果表明,随反应时间的增加,甲醇的产量和选择性增加,随反应温度的增加,甲醇的产量和选择性也逐渐增加.当使用稀土元素La作为助剂时,并不能提高Cu-Zn基催化剂的活性,而稀土元素Y作为助剂,当使用n(Cu)/n(Zn)为1/1,且Y的摩尔分数为12.5%的Cu/ZnO/Y2O3催化剂进行甲醇合成反应时,CO2的转化率、甲醇的选择性和产量均高于使用Cu/ZnO催化剂.