应激状态下大鼠胃壁细胞H^+-K^+-ATP酶活性测定及电镜酶细胞化学研究

目的:探讨应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性及电镜酶细胞化学染色的变化。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、应激组和应激+奥美拉唑(OM)组,采用水浸-束缚应激(WRS)动物模型,检测胃粘膜溃疡指数(UI)和壁细胞H+-K+-ATP酶活性,观察壁细胞超微结构变化及H+-K+-ATP酶细胞化学染色结果。结果:应激组胃粘膜UI和壁细胞H+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P<0.01和P<0.05),而应激+OM组UI和H+-K+-ATP酶活性明显低于应激组(P<0.01);电镜下对照组壁细胞呈静息状态,应激组壁细胞内分泌小管密集呈激活状态,而应激+OM组分泌小管明显扩张,绒毛稀少;酶细胞化学染色显示对照组壁细胞的分泌小管和顶部质膜有少量黑色点状酶反应产物沉积,应激组壁细胞的分泌小管可见多量的、密集分布的黑色点状酶反应产物,而应激+OM组分泌小管上几乎无反应产物沉积。结论:应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性升高,且与壁细胞超微结构改变相一致,提示胃酸是应激性溃疡发生的重要因素之一。

奥美拉唑体内外给药对壁细胞H^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的观察奥美拉唑体内外给药对壁细胞H+-K+-ATP酶活性的影响。方法体内给药:大鼠分为空白对照组、奥美拉唑组,奥美拉唑组体内给予奥美拉唑5 mg·kg-1,连续3 d,提取分离壁细胞,检测H+-K+-ATP酶活性;体外给药:分离纯化大鼠壁细胞,进行裂解后,随机分为空白对照组、奥美拉唑组,奥美拉唑组给予奥美拉唑4μg·mL-1,水浴孵育30 min,检测H+-K+-ATP酶活性。结果奥美拉唑体内给药未见明显抑制壁细胞H+-K+-ATP酶活性的作用,体外给药可明显抑制壁细胞H+-K+-ATP酶活性。结论分离纯化壁细胞后进行药物干预效果更明显,可作为药物筛选的方法之一。

半胱胺对断奶前后仔猪胃粘膜H^-+K^+-ATPase表达和活性的影响

实验选取新生仔猪18窝, 随机分为实验组和对照组各9窝, 自12日龄起, 对照组饲喂基础乳猪料, 实验组在基础饲料中添加半胱胺120 mg/kg饲料, 仔猪均于35日龄断奶。分别于断奶前1 周、断奶当天、断奶后36 h、72 h、1周以及断奶后10 d屠宰仔猪取样, 每个时间点随机选取对照组和试验组各6头仔猪, 用相对定量RT PCR方法测定不同日龄仔猪胃组织中H+ K+ ATPase mRNA 表达的相对含量, 并同时测定H+ K+ ATPase的活性。结果表明: (1) 对照组仔猪在断奶前1 周至断奶后10 d, H+ K+ ATPase mRNA相对含量和H+ K+ ATPase活性有上升趋势, 两组仔猪在断奶后10 d H+ K+ ATPase mRNA相对含量和活性均达到最高水平, 但总体不表现显著的年龄差异; (2) 半胱胺能明显提高仔猪胃粘膜中H+ K+ ATPase mRNA的表达, 在断奶前1 周、断奶当天、断奶后1周和断奶后10 d均出现显著差异。半胱胺也能明显提高H+ K+ ATPase 的活性, 在断奶当天和断奶后10 d, H+ K+ ATPase 的活性分别被提高32 3%和18 3%; (3) 观察期内对照组和实验组H+ K+ ATPase mRNA水平和H+ K+ ATPase活性之间未发现显著的相关性。以上结果说明: 断奶前后仔猪H+ K+ ATPase的mRNA相对含量和活性没有明显的发育性变化, 断奶对H+ K+ ATPase mRNA表达和活性没有影响。

原代培养家兔肾脏内髓集合管细胞单层H^+/K^+交换测定

目的建立 ＩＭＣＤ细胞单层 Ｈ＋ ／Ｋ＋交换的测定方法。方法采用ＢＣＥＣＦ／ＡＭ荧光探针法，测定不同浓度ＣＯ２培养的ＩＭＣＤ细胞Ｈ＋／Ｋ＋交换。结果呼酸组的酸负荷后［ｐＨ］；恢复率为０．０６２０±０．０１２，高于对照组（０．０５０４±０．００９，Ｐ＜０．０５）。呼碱组为０．０４７６±０．００７，与对照组相比差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论荧光探针法测定原代培养家兔肾脏ＩＭＣＤ细胞Ｈ＋／Ｋ＋交换，具有操作简便、稳定可靠、经济安全等优点。

维胃方对胃溃疡大鼠胃黏膜MPO、H^+-K^+-ATP酶活性的影响

[目的]观察维胃方对胃溃疡大鼠胃黏膜髓过氧化物酶(MPO)和H+-K+-ATP酶的影响,探讨维胃方治疗胃黏膜损伤的可能机制。[方法]采用乙酸烧灼法,建立胃溃疡模型,用比色法测定胃黏膜MPO和H+-K+-ATP酶活性,并观察胃黏膜组织病理学变化。[结果]从胃黏膜大体标本、切片观察,维胃方中剂量组疗效最佳。与自愈组和模型组比较,维胃方各组胃黏膜MPO活性显著降低(P<0.01或P<0.05),其中以维胃方中剂量组值最小。维胃方各剂量组的H+-K+-ATP酶活性均高于自愈组(P<0.01或P<0.05),接近正常组(P>0.05),表明维胃方能恢复其活性。[结论]维胃方对大鼠实验性胃溃疡具有明显的保护作用,其机制可能是通过降低大鼠胃黏膜MPO活性,进而减轻炎症介质对胃黏膜的损伤。同时其能修复已损伤的胃黏膜,故能恢复H+-K+-ATP酶活性。

奥美拉唑对家兔肾脏内髓集合管细胞H^+/K^+交换功能的影响

目的 探讨奥美拉唑对家兔肾脏IMCD细胞H+ K+ 交换的影响 ,以及经洗涤处理是否解除这种影响。方法 原代培养家兔肾脏IMCD细胞单层 ,在 10 0 μmol L奥美拉唑缓冲液中孵育 2 5min ,洗涤组则在奥美拉唑缓冲液孵育后 ,用不含奥美拉唑的缓冲液洗涤IMCD细胞 ;对照组在不含奥美拉唑的缓冲液孵育 2 5min ;CECF AM荧光探针法测定各组IMCD细胞H+ K+ 交换。结果奥美拉唑组的H+ K+ 交换为 ( 0 0 16± 0 0 0 6)dpHi min(n =8) ;与对照组的 ( 0 0 5 3± 0 0 0 8)dpHi min(n =8)相比 ,相差非常显著 (P<0 0 0 1) ;洗涤组的H+ K+ 交换为 ( 0 0 16± 0 0 0 6)dpHi min(n =6) ,与对照组 (n =6)的 ( 0 0 5 2± 0 0 0 9)dpHi min相比 ,相差非常显著(P <0 0 0 1)。结论 10 0mol L的奥美拉唑对家兔IMCD细胞的H+ K+ 交换有显著影响 ,而且洗涤处理不能解除这种抑制。因而 ,肺心病合并上消化道出血患者使用奥美拉唑时 。

幽门螺杆菌阳性胃炎患者杀菌治疗前后胃壁细胞形态及H^+-K^+ATP酶mRNA基因表达情况的变化

目的 观察幽门螺杆菌 (Hp)阳性胃窦炎患者杀菌治疗前、后胃壁细胞形态及H+- K+- ATP酶mR NA基因表达情况的变化。方法 经内镜检查诊断为Hp阳性胃炎患者 10例 ,男 6例 ,女 4例 ,予奥美拉唑 (2 0mg/次 ,每日 2次 ) +克拉霉素 (2 5 0mg/次 ,每日 2次 ) +阿莫西林 (5 0 0mg/次 ,每日 4次 )三联疗法治疗 7d ,1个月后复查胃镜 ,分别取杀菌治疗前、后胃体大弯侧黏膜 ,观察胃壁细胞形态 ;应用图像分析软件分别计算出杀菌治疗前、后分泌小管面积分数 ;采用RT PCR法测定H+ K+- ATP酶mRNA基因表达的情况。结果 杀菌前分泌小管面积分数为 0 .0 92± 0 .0 16 ,杀菌后为 0 .14 7± 0 .0 19(P =0 .0 0 0 2 ) ;杀菌前H+ K+ ATP酶mRNA基因表达为 0 .71± 0 .16 ,杀菌后为 0 .96± 0 .19(P =0 .0 0 6 )。结论 在Hp相关的胃炎患者中 ,Hp能通过下调H+- K+- ATP酶mRNA基因表达 ,减少H+ - K+- ATP酶的合成 ,达到减少胃酸分泌的目的。

半胱胺盐酸盐对仔猪胃黏膜细胞H^+-K^+-ATPase活性和生长抑素表达的影响

将分离的仔猪胃粘膜细胞分为4组,在含10%胎牛血清的DM EM高糖培养液中培养24 h后,分别在新鲜的基础培养液中添加0(对照组)、0.001(低水平组)、0.01(中水平组)和0.1(高水平组)g/L的半胱胺盐酸盐,继续培养20 h后收集细胞,测定细胞H+-K+-ATPase活性,同时用相对定量RT-PCR法测定细胞H+-K+-ATPase和生长抑素(SS)mRNA的相对丰度。结果表明:(1)低水平的半胱胺盐酸盐对H+-K+-ATPase的表达和活性没有影响(P>0.05),但中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了H+-K+-ATPase的表达和活性(P<0.05),其中H+-K+-ATPase mRNA的相对丰度分别提高了36%和44%,H+-K+-ATPase活性分别提高了57%和53%。(2)低水平半胱胺盐酸盐对SS mRNA的表达没有影响(P>0.05),中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了SS mRNA的相对丰度(P<0.05),提高幅度均为52%。以上结果提示半胱胺盐酸盐可增强体外培养的仔猪胃黏膜细胞H+-K+-ATPase的表达及活性,而这一作用可能由SS所介导。

健脾活血中药对胃溃疡大鼠H^+,K^+-ATP酶及壁细胞胃泌素受体作用的影响

目的观察健脾活血中药对胃溃疡大鼠H+,K+-ATP酶及壁细胞胃泌素受体作用的影响。方法采用放射配基受体结合测定技术分别检测各组壁细胞胃泌素受体结合位点数,同时分别检测各组大鼠H+,K+-ATP酶活性及胃液总酸度。结果健脾活血组壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常大鼠(P<0.05),胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性升高(P<0.05);奥美拉唑组壁细胞胃泌素受体结合位点数明显高于正常大鼠(P<0.05),胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性明显降低(P<0.05);中西药组壁细胞胃泌素受体结合位点数、胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性与正常大鼠比较无显著性差异(P>0.05)。结论健脾活血中药平缓地抑制胃壁细胞的H+,K+-ATP酶活性,降低胃酸的分泌;同时,不影响胃泌素受体结合位点数,防止停药后反跳性过多泌酸。

呼吸性酸碱失衡家兔肾脏内髓集合管细胞单层H^+/K^+交换功能及cH-K-ATP酶mRNA表达的实验研究

为了研究呼吸性酸碱失衡时内髓集合管 (IMCD)细胞病理生理学改变 ,分别以 3%CO2 和 10 %CO2 模拟慢性呼碱和慢性呼酸家兔肾脏IMCD细胞培养模型 ,对照组用 5 %CO2 。荧光探针法测定IMCD细胞H+ /K+ 交换功能 ,原位杂交和RT PCR检测IMCD细胞cH K ATP酶mRNA表达。结果显示 ,呼酸组H+ /K+ 交换显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,呼酸组cH K ATP酶mRNA原位杂交积分光密度和RT PCR积分光密度比值均非常显著地高于对照组 (P <0 0 1) ;而这三项指标 ,对照组与呼碱组之间差异均无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示慢性呼酸显著增加IMCD细胞H+ /K+ 交换和cH K ATP酶mRNA表达 ,慢性呼碱有抑制和下调趋势 ,但差异无显著性意义 。

K^+营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬生长及叶片液泡膜V-H^+-ATPase和V-H^+-PPase活性的影响(英文)

对溶液培养的盐地碱蓬 (SuaedasalsaL .)幼苗进行不同浓度NaCl胁迫并改变培养液中K+ 浓度 ,以了解K+营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬幼苗生长及叶片液泡膜V_H+ _ATPase、V_H+ _PPase活性的影响。提高培养液K+ 浓度可明显增加盐胁迫下碱蓬植株的鲜重、干重 ,促进盐地碱蓬叶片及根部组织K+ 积累。盐地碱蓬叶片液泡膜V_H+ _ATPase至少由A、B、C、D、E及c亚基组成 ,其表达量在缺K+ 处理 (12 μmol/LK+ )下随盐胁迫浓度的增加而减小 ,而在正常K+ (6mmol/L)培养下则随盐胁迫浓度的增加而增加 ;盐地碱蓬叶片液泡膜V_H+ _PPase分子量为 72kD ,在缺K+ 和正常K+ 供应情况下 ,V_H+ _PPase均有较高表达。V_H+ _ATPase及V_H+ _PPase活性变化与其亚基表达量变化基本成正相关。结果表明 :K+ 对盐生植物碱蓬的耐盐性有重要作用 ,盐胁迫下 ,K+ 可能参与了V_H+ _ATPase和V_H+

大鼠实验性胃溃疡自愈过程中HDC和H^+,K^+-ATP酶的表达

目的探讨胃黏膜内组氨酸脱羧酶(histidine decarboxylase,HDC)和H+,K+-ATP酶的表达与大鼠实验性胃溃疡自愈过程的关系。方法制备大鼠乙酸性胃体溃疡模型,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot技术,观察溃疡自愈过程中大鼠胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶mRNA及蛋白表达的动态变化。结果制模术后1d大鼠胃体出现明显溃疡,3d溃疡最为明显,12d溃疡基本愈合。HDC和H+,K+-ATP酶mRNA表达在制模术后1d即开始降低,术后9d恢复正常。HDC和H+,K+-ATP酶蛋白表达在制模术后也出现降低,术后6d达到最低,术后12d基本恢复正常。结论在胃溃疡自愈过程中,胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶mRNA和蛋白表达下调,其作用是抑制胃酸分泌以促进溃疡愈合。

胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶活性的增龄变化

背景:研究表明人胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶表达随增龄有增高的趋势,但目前对H^+-K^+-ATP酶活性的增龄变化尚不明确。目的:探讨增龄对H^+-K^+-ATP酶活性的影响。方法:选择不同月龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠15只(分别为4月龄、21月龄、24月龄、27月龄、30月龄)以及不同年龄的比格犬19只(分为中青年组、低龄老年组和高龄老年组),测定胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶活性。结果:4月龄、21月龄、24月龄、27月龄、30月龄的SD大鼠胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶活性分别为(4.850±0.312)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(5.466±0.379)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(6.068±0.228)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(5.733±0.767)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(6.223±0.428)μmol·mg^(-1)·h^(-1),活性随增龄呈增高趋势(F=4.519,P=0.031)。中青年组、低龄老年组和高龄老年组比格犬胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶活性分别为(11.087±4.320)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(8.549±3.250)μmol·mg^(-1)·h^(-1)、(12.071±2.820)μmol·mg^(-1)·h^(-1),组间酶活性差异无统计学意义(F=1.339,P=0.290)。结论:大鼠以及比格犬胃底黏膜H^+-K^+-ATP酶活性随增龄无下降,甚至有增高的趋势。

肉碱对不同强度运动大鼠骨骼肌线粒体呼吸链H^+-K^+-ATPase活性的影响

目的:观察左旋肉碱对不同强度递增负荷跑台运动后大鼠骨骼肌线粒体H^+-K^+-ATPase活性的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为8组(n=5):对照组(A)、肉碱组(L)、运动组(E1、E2、E3)和运动结合肉碱组(LE1、LE2、LE3)。差速离心法提取骨骼肌线粒体,分光光度计测定骨骼肌线粒体H^+-K^+-ATPase活性。结果:与A组相比,L组大鼠H^+-K^+-ATPase活性升高31.18%;E1组提高44.46%(P<0.05);LE1组提高64.50%(P<0.01);E2、LE2组分别提高了63.65%、71.15%(P<0.01);E3组活性下降21.68%;LE3组提高57.81%(P<0.05)。与L组比较,LE1、LE2组提高了48.42%、58.08%(P<0.05);LE3组提高38.70%。与E1组相比,LE1组提高了36.07%;与E2相比,LE2组提高了20.65%;,与E3组相比,LE3组提高66.96%(P<0.01)。结论:肉碱干预后大鼠骨骼肌线粒体H^+-K^+-ATPase活性明显增强,大鼠运动能力明显提高。

Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞中H^＋ -K^＋ -ATP酶基因表达和活性的影响

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L、1×10-2μmol/L和1×10-1μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h后,收集培养液和细胞,分别测定细胞中H+-K+-ATPasemRNA表达和活性。结果表明:1×10-3μmol/LGhrelin可显著增加细胞中H+-K+-ATPasemRNA的表达(P<0.05),1×10-4μmol/L、1×10-3μmol/L和1×10-2μmol/L Ghrelin明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase的活性。这表明Ghrelin体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃酸的分泌。

大鼠乙酸性胃溃疡自愈过程中HDC和H^+、K^+-ATP酶的表达

目的探讨胃黏膜内组氨酸脱羧酶(HDC)和H+,K+-ATP酶的表达与大鼠乙酸性胃溃疡自愈过程的关系。方法制备大鼠乙酸性胃体溃疡模型,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组化法,观察溃疡自愈过程中大鼠胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶mRNA及蛋白表达的动态变化。结果制模术后1d大鼠胃体出现明显溃疡,3d溃疡最为明显,12d溃疡基本愈合。胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶mRNA表达在制模术后1d即开始降低,术后9d恢复正常。胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶阳性细胞率及胞质平均灰度值在制模术后也出现降低,术后6d达到最低,术后12d基本恢复正常。结论在胃溃疡自愈过程中,胃黏膜内HDC和H+,K+-ATP酶表达下调,其作用是抑制胃酸分泌以促进溃疡愈合。

植物Na^+,K^+/H^+反向转运体:pH平衡与囊泡运输

细胞内pH和囊泡运输是影响细胞功能的重要影响因子,也是决定细胞是否死亡的重要因素。植物Na^+,K^+/H^+反向转运体是位于细胞膜结构上的跨膜反向转运蛋白,介导Na^+、K^+与质子(H^+)的跨膜反向转运,影响胞内pH的动态平衡。研究表明,NHX缺失造成细胞pH失衡的同时,将影响囊泡运输,从而对生长发育产生不利影响。主要对植物NHX在pH调节、囊泡运输中的功能进展进行了概述,并对其关系进行探讨。

冷水束缚应激下脾虚大鼠胃黏膜H^+,K^+-ATP酶活性及mRNA的表达变化

目的观察脾虚大鼠模型在冷水束缚应激负荷下,胃黏膜损伤程度与H+,K+-ATP酶活性及基因表达的变化。方法 SD大鼠随机分为正常组、脾虚组、应激组、脾虚应激组。采用100%大黄水煎液灌胃10 d造成脾虚模型。冷水束缚应激负荷6 h后观察各组大鼠胃黏膜损伤指数,用无机磷法测定胃黏膜H+,K+-ATP酶的活性;用RT-PCR法检测胃黏膜H+,K+-ATP酶mRNA的表达。结果脾虚大鼠胃黏膜肉眼未见明显损伤,应激及脾虚应激组大鼠胃黏膜均出现点状及条索状损伤,且脾虚应激组损伤程度更为显著。脾虚组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达率较正常组低(P均<0.05);应激及脾虚应激组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达较正常组高(P均<0.05);且脾虚应激组大鼠H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达增高幅度有所增大。结论脾虚大鼠在冷水束缚应激状态下胃黏膜易损伤性增高,其机制之一可能与脾虚应激后胃黏膜H+,K+-ATP酶功能升高有关。

消炎痛对猪胃H^+/K^+-ATP酶质子转运功能的抑制

作为猪胃H^+/K^+-ATPase的非竞争性抑制剂,消炎痛明显抑制H^+/K^+-ATPase泡囊的质子转运功能,造成质子泄漏。在0.15 mg/ml蛋白浓度下,4%的消炎痛结合于H^+/K^+-A- TPase泡囊上。它能渗入膜脂相并显著降低膜的流动性,并使H^+/K^+-ATPase内源荧光受到淬灭。从实验结果看来,消炎痛对猪胃H^+/K^+-ATPase质子转运功能的抑制来自对酶蛋白和膜结构影响两个方面,而非仅抑制酶蛋白本身的功能。

H^+/K^+-ATP酶抑制剂苯并咪唑类衍生物的研究

Ｈ＋／Ｋ＋ＡＴＰ酶是胃酸分泌的最后环节，在合成Ｈ＋／Ｋ＋ＡＴＰ酶抑制剂泮托拉唑的基础上，设计合成了１２个未见文献报道的苯并咪唑类衍生物，经红外光谱、核磁共振氢谱和元素分析确定了结构．初步药理筛选实验表明：化合物（５ｂ），（６ｂ），（６ｄ）具有抑制胃酸分泌的作用，其中化合物（６ｄ）作用最强．