精子中H-Y抗原的蛋白和mRNA表达背离

目的:进一步验证成熟精子中是否存在H-Y抗原的mRNA,并探讨精子mRNA的保留机制。方法:采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。提取成熟精子总RNA,用RT-PCR的方法观察精子mRNA中是否含有H-Y抗原的mRNA。结果:免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光;流式细胞仪检测显示49.86%精子为H-Y抗原阳性。RT-PCR结果显示,未扩增到H-Y抗原的mRNA特异性条带。结论:成熟精子表面存在有H-Y抗原,但未检测到H-Y抗原的mRNA。

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

利用雄鼠脾细胞免疫6-7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×10^7,3.2×10^11pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。

生殖免疫技术在动物繁殖中的应用

根据近年来在生殖免疫方面取得的研究进展,介绍了激素免疫技术的应用,H-Y精子免疫法性别化精液技术、早期胚胎性别控制免疫技术等在提高动物繁殖力方面的重要作用。