H抗原缺乏血型的表型频率及分子遗传学分析

目的了解福建省人群中H抗原缺乏血型的表型频率,研究其血清学和遗传学特征。方法用单克隆抗H试剂进行H抗原缺乏血型筛查;对经筛检出及其它来源的H抗原缺乏血型标本进行血清学分析及ABO血型初步鉴定;使用PCR-SSP进行ABO基因分型;对PCR扩增FUT1和FUT2基因的蛋白编码区产物进行测序,了解其基因型及核酸序列突变情况。结果从85390名献血者中检出10例H抗原缺乏血型,均为类孟买型(分泌型)。对14份类孟买型标本进行FUT1基因分析,检测出h1(nt547-552Δag)、h2(nt880-882Δtt)、h3(nt658c→t)和hnew-2(nt328g→a)4种隐性等位基因。这些个体的基因型分别为h1/h1(6例)、h1/h2(7例)和h3/hnew-2(1例),其中h1等位基因占67.85%,h2等位基因占25.00%。共检测12例类孟买型标本的FUT2基因,发现均存在纯合的nt357c→t突变,在FUT1基因型为h1/h2的个体中还检出nt716g→a突变,均为杂合子。未发现其它FUT2无效基因。血清学分析发现所有个体的不规则抗-A或抗-B在37℃中均无活性,而有7份标本血清中存在37℃具有活性的抗-H或抗-HI。结论福建省人群中类孟买型的表型频率估计约为1∶8 500。在福建省类孟买型个体中h1和h2等位基因具有一定的地域流行特征,存在h1-Se357和h2-Se357,716的单元型连锁遗传。

AB亚型细胞上H抗原强度的探讨

目的探讨H抗原在AB亚型中分布的规律,对AB亚型的正确鉴定提供帮助。方法用血清学试验与分子生物学相结合的方法确定各种AB亚型,对检出的39例A2B和45例其它AB亚型做H抗原检测,并与正常O型、B型细胞比较,判断其H抗原的强度。当AB亚型的H抗原凝集评分高于B型红细胞2分或2分以上时,认为该AB亚型上存在较多的H抗原。结果只在CisAB(100%),B(A)(100%),AxB(46.2%)以及A2B(43.6%)上发现了大量H抗原,而在其它众多的AB亚型中,H抗原与B型红细胞比较没有明显增强。结论大多数H抗原的增强现象可以用“3型H抗原”的残留来解释,但是对于53.8%AxB、56.4%A2B以及A3B、AmB中H抗原不增强的现象尚无合理的解释。

抗人红细胞H抗原单链抗体基因克隆和表达

目的克隆抗人红细胞H抗原单克隆抗体轻、重链可变区(VH、VL)基因并构建单链抗体(ScFv)基因及其表达载体,实现其在原核细胞中的表达。方法从分泌抗人红细胞H抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E8中提取总RNA,采用RT-PCR法获得抗人红细胞H抗原单克隆抗体的VH、VL基因;利用重叠引物延伸法(splicing by overlap extension,SOE)将轻重链可变区基因连接,并引入连接肽(Linker)编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体(ScFv)基因,将其克隆到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,IPTG诱导表达;获得的目的蛋白经纯化后,用SDS-PAGE与Western blotting对目的蛋白进行鉴定,间接ELISA、竞争ELISA和免疫荧光法检测目的蛋白的活性。结果克隆的VH基因长度为351bp,属于鼠抗体可变区重链基因家族I(B)亚群;VL基因长度为339bp,属于鼠抗体可变区轻链基因家族I亚群;SOE法克隆的单链抗体基因为750bp;构建的含原核表达载体的菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE及Western blotting法检测到Mr32000的目的蛋白(表达的ScFv);ScFv纯化后,经免疫荧光法、间接与竞争ELISA法检测到该ScFv蛋白具有生物结合活性。结论成功地克隆了抗人红细胞H抗原单克隆抗体VH与VL基因和ScFv基因,构建ScFv基因的表达载体,实现了ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)plysS细胞中的活性表达,为基于红细胞H抗原的免疫检测技术建立奠定了基础。

红细胞H抗原缺陷型鉴定及其理化功能研究

目的研究红细胞H抗原缺陷型血清学及分子生物学分型特点及其理化功能。方法采用血型血清学鉴定H抗原缺陷型、SSP-PCR进行ABO基因分型,采用红细胞渗透脆性试验、变形性试验检测H抗原缺陷型红细胞理化功能,模拟作为受血者或供血者进行交叉配血试验。结果 6名献血者血样经血清学方法确定为H抗原缺陷型,类孟买基因分型其中3例为h3纯合子,1例为h4纯合子,1例为h1h3杂合子,1例基因分型不确定;H抗原缺陷型红细胞渗透脆性及变形性低于H抗原正常型,H抗原缺陷型作为受血者与A型或B型红细胞主側配血凝集强度强于O型,作为供血者与O型模拟受血者主側配血凝集强度各异。结论 H抗原缺陷型红细胞与抗-H无反应,血清中能检出抗-HI/H,ABO基因正常表达;H抗原缺陷型红细胞渗透脆性及变形性低于H抗原正常型,作为受血者接受O型血液比A型或B型血液安全,作为供血者时,如果交叉配血相合时,可以输给O型受血者。

沙门氏菌常见H抗原特异相的PCR快速检测

运用PCR技术检测沙门氏菌常见的H抗原特异相,甲型副伤寒、猪霍乱、鼠伤寒等常见危害人和动物的沙门氏菌因H抗原差异而分别获得特异性扩增。此技术具有快速简便、敏感性高和特异性强等优点,值得在对常见危害人和动物的沙门氏菌的快速检测中推广应用。

3例H抗原缺失血型的血清学特点及家系调查

目的:研究济宁地区H抗原缺失血型的血清学特点及家系遗传情况。方法:利用血清学方法检测3例先证者的ABO、H和Lewis血型,并测定唾液中的血型物质;通过吸收洗脱实验证实红细胞上表达弱A或弱B。结果:3例H抗原缺失血型均为类孟买型(分泌型),2例为Bh,1例为Ah,血清中均检出抗-H或抗-HI。结论:3例H抗原缺失血型均为类孟买型,其中1例先证者父母存在近亲血缘关系。

常规血型鉴定中H抗原检测3例

目的常规血型鉴定中筛查出罕见稀有血型如孟买型、类孟买型和副孟买型。方法运用血清学检测红细胞上的H抗原。结果筛查出3例类孟买型,1例为类孟买A型,2例为类孟买B型。结论血清学H抗原检测可在常规血型鉴定中应用,以筛查罕见稀有血型。

沙门氏菌H抗原位相变异血清倍比稀释法的建立和应用

沙门氏菌H抗原双相的菌株,有时仅能在一个相的因子血清中凝集,影响血清学的定型。笔者经多次实验,建立了因子血清倍比稀释法做位相变异试验,能简便快速的解离出未知一相的细菌。现将试验介绍如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1

近交培育的豫医无毛小鼠H抗原系统的同源性

目的：研究豫医无毛小鼠Ｈ 抗原系统的同源性。方法：采用近交培育２０ 代２ 月龄雌性豫医无毛小鼠皮肤异体移植法。结果：经１００ ｄ 观察，受试小鼠无急慢性排斥反应发生，移植皮片全部为永久性接受。结论：豫医无毛小鼠突变种群经２０ 代近交培育，组织相容性抗原一致。

抗红细胞H抗原单链抗体中可变区重链和轻链顺序对其活性的影响

目的探讨抗红细胞H抗原单链抗体(scFv)中可变区重链(VH)和轻链(VL)顺序对该单链抗体活性的影响。方法采用PCR方法从质粒pMD-18T-2E8scFv(VH-linker-VL型)中克隆出VL和VH可变区基因,通过重叠引物延伸法将这2种基因连接,并引入连接肽(linker)编码序列,构建VL-linker-VH型的单链抗体基因,将VL-linker-VH和原有的VH-linker-VL2种形式的单链抗体基因分别插入到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用镍亲和层析柱纯化;免疫荧光法、竞争ELISA和低离子聚凝胺法检测纯化后scFv活性。结果酶切及测序表明VL-linker-VH型单链抗体表达载体构建成功,SDS-PAGE和Western blot分析表明VL-linker-VH和VH-linker-VL2型抗人红细胞scFv均在BL21菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为27kD,表达产物以包涵体形式存在,分别占菌体总蛋白的26.8%和27.6%,纯化后获得了高纯度的scFv;免疫荧光、竞争ELISA和低离子聚凝胺试验分析证明2种单链抗体均可特异结合红细胞表面H抗原,VH-linker-VL结合活性高于VL-linker-VH。结论成功制备了VL-linker-VH型2E8scFv;VH-linker-VL型2E8scFv抗原的纯合活性高于VL-linker-VH型2E8scFv。

沙门菌常见O抗原和H抗原荧光PCR检测方法评估

目的:评估沙门菌常见A^F血清群O抗原和H抗原荧光PCR检测方法对不同血清型沙门菌的检测效果。方法:选用不同血清型沙门菌制备模板,运用沙门菌O抗原A^F群及不同H抗原荧光PCR检测试剂盒对这些菌株进行扩增检测,分别计算不同血清型检测结果的灵敏度、特异度、检测下限、假阳性率、假阴性率、Kappa值等指标并进行分析。结果:对7种不同沙门菌O抗原的检测灵敏度为85.71%~100.00%,特异度为66.67%~100.00%;对7种不同沙门菌H抗原的检测,H1,5及Hi-l的灵敏度不高,分别为35.71%及57.14%,但特异度均较高(87.50%~100.00%);经Fisher精确检验,除H1,5阳性检测的P>0.05(P=0.162),其余为P<0.05;C1、C2、D1、E、F血清群及H抗原1,6、1,7、g,s,t、g,m的检测结果与血清凝集结果的一致性较高(Kappa值均大于0.75),而H1,5及Hi-l的检测结果与血清凝集结果的一致性很差(Kappa值分别为0.302及0.492);试剂盒对不同O/H抗原核酸检测扩增效率较好,最低检出限为7~137608拷贝/反应。结论:除H1,5抗原外,该荧光PCR检测试剂盒对沙门菌O/H抗原不同血清型的检测效果较好,优于传统血清凝集方法,可显著提高血清型鉴定时效,有利于疾病或暴发的早期发现。

缓冲蛋白胨水培养法在沙门菌H抗原鉴定中应用初探

目的建立基于缓冲蛋白胨水(Buffer protein sputum water,BPW)培养法的沙门菌H抗原诱导方法。方法将H抗原缺失的沙门菌加入缓冲蛋白胨水中,通过培养离心收集菌体沉淀,直接用于H抗原缺失的沙门菌血清分型;未凝集样本再次以BPW培养诱导后鉴定;并同时采用软琼脂法诱导H抗原,进行2种方法的比对。结果采用BPW培养法和软琼脂法分别诱导40株H抗原缺失的沙门菌,BPW培养法诱导1、2次累计成功率分别为82.5%、100.0%;软琼脂法需1~5次诱导出H抗原,诱导1、2次累计成功率分别为20.0%、47.5%。诱导后H因子的凝集效价BPW培养法以"+++"或以上为主(占82.5%),软琼脂法以"++"或以上为主(占82.5%)。凝集时间BPW培养法<10s,软琼脂法为30~120s。结论BPW培养法诱导沙门菌H抗原速度快、凝集效果好,可用于H抗原缺失的沙门菌血清型鉴定。

家族伴性遗传性H抗原缺乏1例

目的探讨H抗原缺乏血型的家族遗传特点,以便更快为此类特殊血型输血患者找到适配的血源。方法用微柱凝胶法测定ABO正反血型、Rh血型及抗体筛查实验,用试管法进行H抗原检测。结果患者家族中姐妹4人红细胞上均无H抗原,而患者兄弟及患者女儿血液中可检出H抗原。结论 H抗原缺乏血型有家族性伴性遗传的特点。

H抗原缺失患者抗H抗体血型血清学检测及结果分析

目的分析H抗原缺失患者抗H抗体血型血清学检测结果及其对输血相容性检测的影响。方法采用血型血清学方法对出现正反定型不符及交叉配血不合的3例患者血标本,进行抗体筛选及特异性鉴定,唾液血型物质测定,对患者红细胞进行H抗原检测及直接抗人球蛋白试验。结果患者中A型1例, AB型2例, RhD为阳性。输血相容性检测在4℃、 22℃及37℃出现4+～±的凝集反应,引起ABO血型正反定型不符或交叉配血不合,患者红细胞H抗原及直接抗人球蛋白试验阴性。经血型血清学鉴定为抗H抗体,抗体类型为IgM型,抗体效价4℃为1∶64～1∶128, 22℃为1∶4～1∶32, 37℃为1∶1～1∶2。抗体效价及凝集强度随温度上升而降低。结论 22℃有反应活性的抗H抗体,可干扰输血相容性检测结果, 37℃有反应活性的抗H抗体可能引起输血反应。含有抗H抗体的患者应输同型血,如紧急抢救无同型血而需输O型红细胞时,应用输注盐水法和抗人球蛋白法交叉配血均相合的血液。

H抗原缺陷型的研究进展

H抗原与ABO、Lewis血型密切相关，早期曾被划归于ABO血型系统。目前，H抗原已被国际红细胞血型命名委员会命名为一个新的独立的血型系统，即ISBT（国际输血协会，International Society of Blood Transfusion）018-Hh血型系统，其系统符号为H，只有一个抗原即H抗原。自从1952年报道了第1例H基因缺陷型后，研究者们对于H抗原缺陷血型做了大量的研究。

云南拉祜族人群H抗原缺陷型表现频率调查

目的了解拉祜族人群中H抗原缺陷型的表现频率,掌握拉祜族人群医学遗传学特征,为临床研究、安全输血及应用提供资料。方法随机抽取拉祜族人群无关个体,进行ABH血型血清学鉴定分析。结果从319名拉祜族人群中检出6例H抗原缺陷血型。结论拉祜族人群中H抗原缺陷型的表现频率1.88%,存在明显的种族多态性和民族差异性。

α-1,2-L-岩藻糖苷酶处理人红细胞H抗原的实验研究

目的通过对α-1,2-L-岩藻糖苷酶处理人红细胞H抗原的研究,明确岩藻糖苷酶对H抗原处理的效果及对红细胞的影响,确保经酶处理的红细胞可以成为指导H抗原自身抗体检测的试剂红细胞,为输血安全性提供进一步的保障。方法用20 000 U/mL的α-1,2-L-岩藻糖苷酶处理人红细胞,然后用单克隆抗-H在血清学及流式细胞术方面检测H抗原的酶处理效果,用其它相关的单克隆抗体检测岩藻糖苷酶处理后红细胞相关抗原的变化,在显微镜下观察红细胞的形态变化以及用流式细胞术检测经酶处理红细胞膜电位的变化。结果经α-1,2-L-岩藻糖苷酶处理的红细胞H抗原被清除,红细胞的形态、膜电位及红细胞上其它相关抗原与处理前无明显变化。结论α-1,2-L-岩藻糖苷酶处理的红细胞可以作为检测H抗原自身抗体的试剂红细胞,为孟买血型及类孟买血型人的输血提供进一步的保障。

伤寒杆菌H抗原检测、肥达反应与细菌培养对伤寒诊断的对照观察

目的 提高伤寒患者的诊断阳性符合率。方法 该文采用细菌培养、肥达反应、伤寒杆菌H抗原酶联免疫检测检查 5 2例伤寒患者 ,2 0例正常人 ,进行对照观察。结果 细菌培养、肥达反应、伤寒杆菌H抗原的酶免疫检测对伤寒患者的诊断的阳性符合率分别为 34.6 % ,5 9.6 %和 86 %。结论 伤寒杆菌H抗原酶联免疫检测快速、特异、敏感为实验室检测的首选方法。