牛流行热病毒JB76H株G蛋白基因核苷酸序列分析

通过反转录_聚合酶链反应(RT_PCR),从中国北京分离株牛流行热病毒JB76H 基因组RNA中扩增出主要保护性抗原糖蛋白G的cDNA。采用Sanger’s 双脱氧末端终止法测定cDNA 片段的核苷酸序列,并推导出氨基酸序列。G基因全长为1872 个碱基,单一的开放阅读框架编码623 个氨基酸的多肽。将测得的序列与澳大利亚六个分离株进行比较,发现我国分离株与澳大利亚分离株间同源性为91% ,低于澳大利亚各分离株之间的同源性(98% ～99% ) 。同时氨基酸序列比较结果也显示,我国分离株与澳大利亚分离株间同源性(93.9% )低于澳大利亚各分离株之间的同源性(96% ～98 %) 。

丙型肝炎病毒H株包膜糖蛋白在昆虫细胞中的表达

目的利用杆状病毒表达系统，在昆虫细胞中表达了丙型肝炎病毒(HCV)H株的包膜糖蛋白E，并应用表达产物对HCV感染患者血清中抗膜蛋白抗体进行检测。方法将HCV H株E基因片段克隆到杆状病毒转移载体上，转染昆虫细胞，表达包膜糖蛋白，经免疫杂交法鉴定表达产物，并用细胞间接免疫荧光法检测患者血清抗膜蛋白抗体的水平。结果Western blot显示，表达产物中有多条分子量不同、可与HCV RNA阳性血清反应的蛋白。细胞免疫荧光染色表明，HCV包膜糖蛋白在细胞浆中表达。用表达产物分别检测HCV患者血清，发现仅11.4％血清中含有膜抗体。结论成功利用昆虫细胞表达了HCV包膜糖蛋白，为HCV疫苗的研究奠定了基础。

猪传染性胃肠炎病毒SC-H株M基因的克隆与序列分析

参照Genbank已发表的TGEV的核酸序列设计一对扩增M基因的引物,经RT-PCR扩增了SC-H株的M基因cDNA片段,插入pMD18-T构建重组质粒pMD-M,对pMD-M进行了酶切鉴定及核苷酸测序,将M基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考毒株进行了比较分析。结果表明SC-H株M基因扩增片段长度为852bp,包含789bp的M基因编码区,编码262个氨基酸;SC-H株与TS、96-1933、FS772/70、HN2002、TFI、Purdue及TO14株的M基因核苷酸序列同源性为97.8%、94.2%、97.2%、97.8%、99.7%、96.8%及98.2%,氨基酸同源性为96.6%、92.0%、95.4%、96.6%、99.2%、95.8%及97.7%,表明不同毒株的M基因高度保守,系统进化分析显示SC-H株与Prudue株有较近的亲缘关系。

丙型肝炎病毒H株包膜蛋白在昆虫细胞中的表达及意义

目的 获得丙型肝炎病毒 (HCV) H株包膜糖蛋白的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中稳定表达包膜糖蛋白 E1和 E2 ,并初步应用于丙型肝炎患者血清抗体的检测。方法 用 PCR方法自 HCV H株扩增出包膜蛋白 E基因 ,构建重组杆状病毒 ,并在昆虫细胞中稳定表达包膜糖蛋白 E1和 E2。免疫荧光及 Western blot方法鉴定表达产物。用表达的 E1和 E2蛋白与 35例丙型肝炎患者血清反应。结果 昆虫细胞中表达的 E蛋白呈现 3种分子大小 ,E1的相对分子量为 2 1× 10 3和 33× 10 3 ,E2的相对分子量为 6 0× 10 3。在 35份感染者血清中 ,有 4例 E1抗体阳性 ,其中 1例检出 E2抗体。在 9例 PCR检测 HCV RNA阳性而抗 HCV检测阴性的血清中 ,有 3例血清与表达的 E蛋白反应。结论 HCV E蛋白基因可在昆虫细胞中稳定表达 ,表达的 E1和 E2蛋白可用于

国家三类新兽药：猪圆环病毒2型灭活疫苗（WH株）

猪圆环病毒2型（PCV2）感染可以引起仔猪断奶后多系统衰竭综合症（PMWS），此病主要发生于6～15周龄的断奶仔猪，发病率和死亡率常为4％-30％和50％-90％。此外，猪圆环病毒2型感染也可以导致猪皮炎与肾病综合症、母猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤等。

猪细小病毒H株ST细胞系高敏感性细胞的克隆

利用有限稀释法和单细胞显微操作法从现有ST细胞系中克隆出一株对猪细小病毒H株具有高敏感性的细胞克隆株ST-5,初步研究该克隆株对猪细小病毒H株增殖的特性及稳定性。该克隆株连续传代20代后对猪细小病毒H株感染性不变,病毒滴度最高可达107.0TCID50/mL。这一研究结果将有利于开发高效价的猪细小病毒H株灭活疫苗。

烟芽夜蛾囊泡病毒3h株3h-122基因于棉铃虫幼虫体内的转录表达分析

本文构建了烟芽夜蛾囊泡病毒3h株(HvAV-3h)第122个基因(3h-122)的原核表达载体并制备多克隆抗体。利用蛋白免疫印迹、RT-PCR、免疫组织化学染色等技术检测3h-122的转录表达时相以及组织特异性。结果表明,3h-122编码大小16.1 kD的结构蛋白(3H-122)。HvAV-3h感染棉铃虫幼虫后3 h开始检测到3h-122的转录并稳定持续至第168 h。3H-122在棉铃虫感毒后24 h至168 h可持续检测到其表达。此外,3H-122主要在脂肪体组织中表达。本研究为阐明囊泡病毒结构蛋白的功能及其在囊泡病毒致病机制中的作用奠定了基础。

丙型肝炎病毒H株包膜糖蛋白在昆早细胞中的表达

目的：利用杆状病毒表达系统，在昆虫细胞中表达了丙型肝炎病毒（HCV）H株的包膜糖蛋白E，并应用表达产物对HCV感染患者血清中抗膜蛋白抗体进行检测。方法：将HCV H株E基因片段克隆到杆状病毒转移载体上，转染昆虫细胞，表达包膜糖蛋白，经免疫杂交法鉴定表达产物，并用细胞间接免疫荧光法检测患者血清抗膜蛋白抗体的水平。结果：Western blot显示，表达产物中有多条分子量不同、可与HCV RNA阳性血清反应的蛋白。细胞免疫荧光染色表明，HCV包膜糖蛋白在细胞浆中表达。用表达产物分别检测HCV患者血清，发现仅11.4%血清中含有膜抗体。结论：成功利用昆虫细胞表达了HCV包膜糖蛋白，为HCV疫苗的研究奠定了基础。

南农高科SH株圆环苗升级版获三类新兽药

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经审查,批准江苏南农高科技股份有限公司等12家单位申报的猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株,Ⅱ）、利福昔明乳房注入剂（干乳期）、盐酸恩诺沙星可溶性粉（蚕用）3钟兽药产品为新兽药,核发《新兽药注册证书》,并发布产品试行规程、质量标准、说明书和标自8月25日起执行.

猪细小病毒H株在不同细胞上增殖特性的比较

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引发猪细小病毒病的病原体,可引起胚胎的感染、死亡,母猪不表现比较明显临床症状的繁殖障碍性疾病。目前接种疫苗仍是解决本病的最好方案。为生产出优质的疫苗,需要摸索PPV毒株在不同细胞系上的增殖情况,如不能掌握其规律,生产出足够的抗原,将难以用于生产。PPV只能在猪的细胞和人的某些传代细胞中增殖,且在不同细胞上的生物学特性也不尽相同。通过培养比较,获得培养该病毒滴度高、病变明显的细胞及培养条件,为生产高水平疫苗提供实验数据。1材料和方法1.1材料1.1.1病毒PPV H株,实验室鉴定、保管和供应,经PK15细胞增殖,-70℃保存备用。

猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)—圆克清

我国自2000年报道和明确猪群中存在猪圆环病毒2型（PCV2）感染以来,各地区陆续报道,流行范围已波及全国,在病死猪组织样本中检出率几乎达100%。

农业部批准猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株，Ⅱ）等3种兽药产品为新兽药

9月7日，农业部发布第2442号公告，公告显示，根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准江苏南农高科技股份有限公司等12家单位，申报的猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株，Ⅱ）等3种兽药产品为新兽药，核发《新兽药注册证书》，并发布产品试行规程、质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行。

浅谈猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)

一、猪圆环病毒病当前主要流行危害表现 猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的仔猪断奶多系统衰竭综合征、猪呼吸道病综合征、猪皮炎与肾病综合征等疾病的总称，同时还可引发新生仔猪先天性震颤、增生性坏死性肺炎和肠炎等疾病。

烟芽夜蛾囊泡病毒3h株编码的3H-117蛋白能干扰AcMNPV的口服活性

【目的】囊泡病毒是一类体液传播的昆虫病毒,具有特殊的致病历程和良好的生防应用潜力。烟芽夜蛾囊泡病毒3h株(Heliothis virescens ascovirus 3h,HvAV-3h)是我国分离的第一株囊泡病毒,其编码的3H-117蛋白被报道为HvAV-3h病毒粒子的结构蛋白。【方法】为了进一步探究3h-117基因的功能,本研究以Bac-to-Bac昆虫表达系统为研究平台,将3h-117插入到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclepolyhedrovirus,AcMNPV)的基因组中,成功构建了具有口服活性的重组病毒AcMNPV-117。【结果】通过与野生型病毒(AcMNPV-Egfp)的比较,证实在感染Sf9细胞72–96 h后,AcMNPV-117的出芽型病毒粒子产量以及病毒DNA的拷贝数显著降低,且AcMNPV-117的多角体明显增大。进一步的生测结果表明,AcMNPV-117对三龄甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的90%致死浓度明显高于AcMNPV-Egfp。此外,被病毒感染的甜菜夜蛾幼虫生长相对健康幼虫明显减缓,且试虫的日均取食量也因病毒的感染而被抑制。共聚焦结果表明,3H-117与AcMNPV-117感染后宿主细胞核骨架的聚集过程相关,提示3H-117在囊泡病毒感染过程中可能具有瓦解宿主细胞核的功能。【结论】本研究的结果进一步验证了3h-117的功能,为囊泡病毒的分子生物学研究奠定了基础。

茶树内生真菌H8菌株的鉴定及其产红色色素培养条件

对茶树内生真菌H8菌株的形态、种类以及产红色色素的培养条件进行了研究。结果表明,H8菌株是一种镰刀菌属(Fusarium)真菌,其有性型为子囊菌(Ascomycete)。该菌株菌丝在生长发育过程中可产生红色色素,其菌丝在以葡萄糖为碳源,以蛋白胨为氮源,碳氮比为40∶1,pH值为5的培养条件下,有利于菌丝产红色色素。

汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达

目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因 。

鸡传染性支气管炎病毒H120疫苗株全长cDNA感染性克隆的构建

根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法对其基因组分10个片段进行扩增,并克隆至pMD19-T载体中进行测序。经BsaⅠ限制性内切酶酶切后,采用优化的连接策略将各DNA片段进行连接,获取H120株的基因组全长cDNA,其5′端具有完整的T7RNA聚合酶启动子的核心序列,3′端具有polyA尾巴结构。通过T7RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA,转染BHK-21细胞并进行病毒拯救。采用RT-PCR、测序及鸡胚传代对拯救出的病毒株进行鉴定。结果表明成功地从H120株的基因组全长cDNA拯救出病毒H120-R株,为进一步开展该病毒的分子致病机理研究、新型疫苗的研制等奠定了基础。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)保护效果的研究

目的 观察国产甲型肝炎减毒活疫苗 (H2 株 )在甲型肝炎流行情况下 ,其保护发病与保护感染效果。方法 在某乡甲肝流行情况下 ,采用病例对照研究方法 ,调查病例组与对照组甲肝疫苗免疫史 ,估计疫苗保护发病效果 ;选择该乡发病率较高的 13个村小学学生 ,进行血清学及甲肝疫苗接种史调查 ,计算疫苗保护感染效果。结果 甲肝减毒活疫苗保护率为98 1%,95 %可信限下限为 83 5 %。隐性感染率在接种组与未接种组分别为 10 2 3%和 11 5 9%,两者无统计学差异。结论 国产甲型肝炎减毒活疫苗 (H2 株 )具有很好的保护发病效果 ,可以同国外灭活疫苗相媲美 ,其保护感染效果不及保护发病效果。