小鼠H-2K^b基因转染人肝癌细胞后激活免疫排斥反应的研究

目的：增强人肝癌细胞的免疫原性以激活宿主免疫细胞识别杀伤相应的肝癌细胞。方法：以脂质体介导小鼠Ｈ－２Ｋｂ基因转染肝癌细胞株，并检测Ｈ－２Ｋｂ抗原表达情况，然后用Ｈ－２Ｋｂ基因转染后的肝癌细胞体外激活效应细胞杀伤活性，再进行裸鼠动物实验。结果：Ｈ－２Ｋｂ基因转染人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２后，Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹杂交结果显示，Ｈ－２Ｋｂ基因整合于肿瘤细胞染色体中，ＲＮＡ点杂交结果显示，Ｈ－２ＫｂＤＮＡ已转录成ｍＲＮＡ。免疫组化及流式细胞仪检测显示，Ｈ－２Ｋｂ抗原已在肝癌细胞胞膜上表达。转染后肝癌细胞在体外能强烈诱发效应细胞毒性，这种细胞毒性现象在裸鼠实验中得到进一步验证。结论：异源ＭＨＧ－Ｉ类基因Ｈ－２Ｋｂ转染肝癌细胞后可增强其免疫原性并激活免疫效应细胞杀伤活性。

H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及MM45T．Li，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及MM45T．Li／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。

绿色荧光蛋白与H-2K^b融合基因的构建及表达

目的 构建GFP与H 2Kb 融合基因 ,并分析融合基因在活细胞中的表达。方法 应用基因工程技术构建H 2Kb 与绿色荧光蛋白 (GFP)的融合基因。RT PCR和Western印迹分析基因表达 ;激光共聚焦荧光显微镜观察活细胞内荧光布局。结果 RT PCR和Western印迹分析表明融合基因获得了正确表达。激光共聚焦荧光显微镜观察结果表明 ,Kb GFP融合分子象天然Kb 分子一样表达在细胞膜表面 ,且胞外区域可被Kb 分子特异性单克隆抗体所识别 ,表明Kb GFP融合分子可在细胞内正确折叠和装配。Kb GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果。结论 Kb GFP融合蛋白具有GFP的自发荧光特性 ,且不影响Kb 分子在细胞内的正确表达。