H-2K^b-OVA复合物的构建及体内特异性CTL的诱导

在扩增了H 2Kb 基因后 ,将可生物素化的序列连接到其胞外区末端 ,构建成可溶性重组分子 ,进行原核表达。通过定点突变获得了高表达的融合蛋白 ,再利用 6×Histidinetag进行蛋白纯化 ,在对H 2Kb分子高亲和力的OVA2 57 2 64肽及 β2 m蛋白存在下 ,三者体外折叠成具有完整构象的H 2Kb OVA类分子复合物。用其作为免疫原诱导特异性CTL ,并构建H 2Kb OVA四聚体检测特异性CTL。应用H 2Kb OVA四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致 ,同时对胞外IFN γ进行了检测。说明H 2Kb OVA复合物可有效诱导体内特异性CTL反应 ,在体外构建MHC I类分子四聚体 。

杂环化合物DADDCI在H_2O/DMSO溶剂体系中的光谱及聚集行为

化合物6-苯胺基-5H-2,3-二硫杂-5,7-二氮杂环戊二烯并[c,d]茚-1,4-二甲酸二乙酯(DADDCI)是本实验室合成的新型硫氮杂环化合物。通过吸收、荧光光谱,结合理论计算,研究了该化合物在溶剂DMSO/H_2O中的结构和聚集性质。结果表明,在DMSO中,化合物的苯环与并噻吩共平面,易形成H-聚集体致使荧光强度相对较弱,在H2O含量为66%—70%时,化合物形成J-聚集体,吸收峰明显红移,从390nm到444nm,伴随着荧光峰强度迅速增强至7倍以上,此时可明显观察到体系呈凝胶状。结构优化证实,化合物与H_2O之间的氢键复合物取代与DMSO形成的复合物后,化合物的苯环与主平面之间发生扭转,二面角达86°。形成J-聚集体后,化合物的结构被固定,灵活性降低,分子中亚胺N接受质子的能力及胺N上的氢质子离域能力明显下降,化合物的吸收光谱受酸碱的影响程度明显降低。