H-DNA

在真核细胞染色质中,许多基因的调节区和染色质重组的热点部位都有对S1核酸酶等高度敏感的位点。分析这些位点的DNA序列发现它们通常都含有对映重复(mirror repeat〕的高Pu-高Py序列(Pu代表嘌呤,Py代表嘧啶)。(图 I a、b)

麦田杂草节节麦与圆柱山羊草的DNA条形码鉴定

麦田恶性杂草节节麦Aegilops tauschii Coss.和圆柱山羊草Aegilops cylindrica Host.均为我国检疫性有害生物,二者形态极其相似,导致生产中难以采取针对性的防控措施。为快速、准确地进行区分鉴定,本研究利用DNA条形码技术,对采自河北、河南、山东等9省的52份样品进行了鉴定。针对4个DNA条形码序列区段rbcL、matK、trnH-psbA和ITS2,测序并计算种内、种间的双参数遗传距离,采用邻接法构建系统发育树。结果表明,matK扩增测序结果不理想;rbcL序列无差异;ITS2序列种内遗传距离0.0007,种间遗传距离0.0096;trnH-psbA序列存在15个差异位点,种内遗传距离0,种间平均遗传距离0.0051,NJ树支持率为96.0%,能明显区分二者。特异性检测中,节节麦和圆柱山羊草均存在特异性碱基,进一步证明trnH-psbA为最优鉴定序列。本研究为快速、准确鉴定这2种检疫性杂草提供了新的分子检测技术。

DNA结构研究进展

综述了DNA分子结构研究的一些新进展,包括DNA双螺旋精细结构、三股螺旋和H^-DNA、双螺旋结构的多态性,这些结构与DNA的复制、转录和基因调控等生物学功能之间有十分重要的联系。

犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答

将CDV中国分离株 (YZ0 10 1)的两囊膜糖蛋白基因F和H与pGEM_Teasy载体构建的重组质粒分别采用EcoRI和KpnI、BamHI和KpnI双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3.1(一 )中 ,DNA测序和限制性酶切分析筛选阳性克隆pcDNA_H和pcDNA_F ,以重组质粒DNA和脂质体共转染COS_7细胞 ,用间接免疫荧光试验验证转染的COS_7细胞胞浆中分别表达了CDV的H和F蛋白。以聚乙烯胺 (PEI)为佐剂 ,将犬瘟热病毒F和H基因重组质粒pcDNA_H和pcDNA_F的DNA分别或混合肌注 6周龄BABL/c小鼠 ,同时设pcDNA原载体DNA对照。以 2周为间隔共免疫 4次。最后一次免疫后 3周 ,采血分离血清 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)和病毒中和试验 (SN)分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示 :pcDNA_H和pcDNA_F试验组免疫 4次后分别激发了 10 2 .99+ 0 .13 4 、10 2 .93 + 0 .164滴度的ELISA抗体 ;两种质粒DNA混合免疫后产生了 1∶32～ 1∶12 8的抗CDV的中和抗体 ;而原载体DNA免疫后 ,用ELISA和SN未检测出特异的CDV抗体。表明犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F和H基因免疫小鼠可诱发产生特异性的体液免疫。

肝细胞生长因子的部分纯化与活性研究

报告新生牛肝细胞生长因子的提取,Sephadex G-50过柱分离、SDS—凝胶电泳及高效液相色谱分析,结果表明,新生牛肝脏中提取的肝细胞生长因子含有四种组分,分子量(u)分别为21000(Ⅰ),14400(Ⅱ),10000(Ⅲ)及10000以下(Ⅳ)含量各占8.01%,76.09%,15.72%,o.14%。生物活性测定表明,四组分中以分子量14400u(Ⅱ)者刺激肝细胞DNA合成活性最强,其次为Ⅲ,而Ⅰ,Ⅳ组分无或仅有微弱活性。

中国红树类海桑属植物DNA条形码研究

目的对中国的6种红树类海桑属植物进行DNA条形码研究,为该属植物鉴定、资源保护、合理开发等提供参考依据。方法以核基因ITS2片段及叶绿体基因片段psbA-trnH作为DNA条形码,对分布在中国的海桑属植物进行基因组DNA提取、PCR扩增和双向测序。所得序列经CodonCode Aligner拼接获得叶绿体psbA-trnH基因间区序列和核ITS2序列,用软件MEGA6.0进行相关数据分析,构建NJ(邻接)树。结果我国6种红树类海桑属植物的ITS2序列间存在明显差异,psbA-trnH序列间也存在一定的碱基差异,表明6种海桑属植物具有其各自独特的DNA条形码,可以相互区别,同时基于ITS2序列及psbA-trnH序列构建的邻接(NJ)树可以看出6种海桑属植物具有或近或远的亲缘关系。结论核ITS2和叶绿体psbA-trnH序列作为DNA条形码可以有效地区分和鉴别我国6种红树类海桑属植物,为后续药用资源开发等相关研究提供了参考。

节瓜基因组AFLP体系建立的研究

以节瓜雌性系K36和强雄系G为材料,从DNA提取、酶切连接、预扩和选扩等方面进行选择优化,建立高效稳定的AFLP分析体系,同时从64对AFLP引物组合筛选出多态性好的引物组合6对,并以该体系开展节瓜雌性性状分子标记和图谱构建等遗传分析研究。

头颈部鳞癌抑癌基因nm23-H_1的表达、DNA倍体与淋巴结转移的关系

目的 :研究头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC)nm2 3 H1基因的表达、DNA含量与淋巴结转移的关系。方法 :选择 3 0例未经治疗的HNSCC患者术后新鲜肿瘤标本 ,应用免疫组化ABC技术和流式细胞术 (FCM )检测瘤细胞nm 2 3 -H1基因表达、异倍体 (aneuploid)和S期细胞比例 (S phasefraction ,SPF) ,探索这 3个参数与淋巴结转移之间的关系。结果 :nm 2 3 H1的阳性率为 60 % ,异倍体检出率为 66.7%。nm 2 3 H1表达、DNA倍体和SPF与淋巴结转移有关 (均为P <0 .0 1)。nm 2 3 H1表达与DNA倍体无关 (P >0 .0 5 ) ,nm 2 3 H1表达与SPF有关 (P <0 .0 5 )。结论 :对nm2 3 H1表达、DNA倍体和SPF的检测可预测HNSCC淋巴结转移趋势和预后 。

土壤Cd胁迫对三七生长和根系DNA损伤及抗氧化酶活性的影响

采用盆栽实验法，研究了土壤中添加0．0（对照）、0．1、0．3、0．6、1．0、3．0、6．0、10．0和30．0mg·kg-1Cd对三七[Panaxnotoginseng（Burk．）F．H．Chen]生长和抗氧化酶活性的影响，并采用彗星实验对cd胁迫条件下三七根尖细胞的DNA损伤进行了分析。结果显示：随土壤cd添加量增加，三七的成活率、株高、单株复叶数和单株叶面积以及单株根、茎和叶片的干质量及鲜质量总体上呈先升高后降低的趋势；其中，各处理组三七植株的成活率和单株复叶数均高于对照，而株高和单株叶面积则在cd添加量较低的条件下高于对照、在Cd添加量较高的条件下低于对照；单株根、茎和叶的鲜质量及干质量在Cd添加量30mg·kg-1条件下均小于对照但差异不显著。随cd添加量的提高，三七根系中SOD和CAT活性呈先上升后下降、再上升再下降的变化趋势，而POD活性总体上逐渐升高；其中，cd添加量0．6、1．0、3．0和30．0mg·kg-1。处理组的SOD活性极显著或显著低于对照，而各处理组的POD和CAT活性总体上均高于对照且在Cd添加量1．0～30．0mg·kg。条件下与对照有极显著差异。彗星实验结果表明：各处理组三七根尖细胞的彗尾长、尾部DNA相对含量和Olive尾矩均有差异，其中，在Cd添加量较高的条件下各指标均高于对照但差异均不显著。研究结果显示：在较低水平的土壤Cd胁迫条件下，三七的生长、抗氧化酶活性和根系DNA均没有受到明显伤害，而较高水平的Cd胁迫则对其生长和抗氧化酶活性有抑制作用，且根尖细胞DNA损伤也较严重。

甘肃黑猪H-FABP基因多态性筛查及蛋白功能预测

为了明确甘肃黑猪H-FABP基因的遗传特征,采用DNA池结合直接测序技术快速筛查甘肃黑猪H-FABP基因遗传多态性,并利用生物信息学方法预测其编码氨基酸的理化性质及蛋白功能。结果显示,甘肃黑猪H-FABP基因在扩增区域共发现4个突变位点,分别为C^(734)T-Intron1、T^(152)C-Exon2、G^(30)A-Intron2、T^(121)G-Intron2,各等位基因频率在突变前后存在明显差异;该基因编码区全长402 bp,共编码133个氨基酸残基,其中,编码区序列有1个T^(152)C-Exon2的错义突变,氨基酸由原来非极性的异亮氨酸(Ile)转变为极性的苏氨酸(Thr); H-FABP编码蛋白是一种稳定的亲水性蛋白,二、三级结构均为混合型,β-折叠所占比例最高。蛋白质功能预测结果显示,甘肃黑猪H-FABP编码蛋白存在19个潜在磷酸化位点和1个N-糖基化位点,可能会影响H-FABP基因调控肌内脂肪含量的增加。同源性比较和系统发育树分析表明,甘肃黑猪与偶蹄目动物亲缘关系最近。研究结果可为甘肃黑猪肌内脂肪含量沉积的分子遗传标记提供理论基础,该基因的多态性筛选已成为家畜肉质性状改良的分子研究热点。

犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。

DNA条形码序列对药食两用品花椒的品种鉴定

目的：利用DNA条形码鉴定技术,快速、准确的鉴别中药花椒,区别中药花椒及其市售香料花椒的品种来源差异。方法：采用植物DNA试剂盒提取花椒及其混伪品基因组DNA,对全部收集样品的ITS2序列进行扩增和测序,计算物种种间种内Kimura2-parameter（K2P）遗传距离。采用Blast、最近距离法及基于ITS2序列构建Neighbor-joining（NJ）系统聚类树进行鉴别分析。结果：中药花椒及香料花椒的序列长度为224~227 bp,中药花椒种间平均K2P遗传距离明显大于香料花椒种内平均K2P遗传距离;ITS2分子系统树显示,中药花椒及香料花椒均聚为一单系分枝。结论：ITS2序列作为DNA条形码能准确鉴别中药花椒及其香料花椒,为中药花椒及其香料花椒的鉴别提供了依据。

单细胞凝胶电泳技术分析过氧化氢对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用

目的 观察不同浓度过氧化氢 (2 5～ 2 0 0 μmol/L)分别作用于正常大鼠外周血淋巴细胞不同时间 (5min和 2 0 min)后细胞DNA的损伤情况。方法 利用快速、灵敏的检测细胞 DNA损伤的单细胞凝胶电泳 (SCG)技术结合激光扫描共聚焦显微镜 ,以“彗星样”淋巴细胞出现率 (计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例 )、总彗星长度 (“彗星”电泳方向上的最大长度 ,即尾长 )和尾距 (尾部 DNA占总 DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价淋巴细胞 DNA的损伤程度。结果 过氧化氢能剂量依赖性地导致大鼠外周血淋巴细胞 DNA的明显断裂损伤 ,能使“彗星样”淋巴细胞出现率、总彗星长度和尾距显著增加 ,并随着时间的延长损伤加重。结论 提示活性氧或自由基增多可能是造成体内细胞 DNA断裂损伤的重要原因。

一种新的DNA序列映射规则及其分析应用

在ＤＮＡ序列的研究中，序列的数值化是首先需要解决的问题。这里，提出了一种新的基于复域的映射规则，它以一维的形式反映了序列的多维组成：并分别从理论与实验两方面对该方法与已有的几种映射方法进行了对比与分析，论证了该方法的有效性及实用性。以此规则为基础，分析了外显子序列和内含子序列的编码结构和分形尺度特性，并以序列的编码结构—分形尺度特性—序列长度所构成的三维空间为基础，分析了外显于序列和内含子序列的可识别性。

泰山白花丹参干叶片高质量DNA的提取

目的为了从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较了4种DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。CTAB-freeBuffer清洗,4倍CTAB抽提和固体PVP和VC防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNAA260/A280为1.86,由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量DNA。

用~3H-TdR研究混合重金属对鲫鱼DNA合成的影响

应用3 H 胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)示踪法研究混合重金属对鲫鱼 (Carassiusaura tus)遗传毒性的影响。结果表明 ,最佳取样时间为注射3 H TdR后 6h。鱼体各组织对混合重金属的毒性反应呈现双向效应 ,即低浓度时 ,表现出损伤、修复作用 ;高浓度时 ,DNA合成受到抑制。鱼卵、鱼鳃对重金属最敏感 ,损伤浓度为 0 0 773mg L ;而大脑对混合重金属耐受性最强。DNA损伤修复作用和DNA合成作用都存在剂量效应 ,随着暴露时间的延长 ,毒性作用增大。鱼体各组织对重金属的毒性反应可由DNA损伤修复变成合成抑制。经过 72h暴露后 ,3 H TdR在肝脏、鱼鳃、鱼卵中掺入量约低于对照的 5 0 %。

H/L定向选育系线粒体DNA系统进化分析

线粒体DNA参与机体的免疫调控,介导机体免疫应答的形成与发展。为探讨线粒体DNA与异嗜性粒细胞与淋巴细胞(H/L)比值的关系,测定了鸡H/L定向选育系群体共368个有13个SNP注释到候选基因,包括ND1、MT-ND2、MT-CO1、COLL、ATP8、COX3、ND3、ND4、ND4L、CYTB和ND6。线粒体DNA在H/L定向选育的过程中未呈现遗传分化,表明遗传选育工空间与潜力。

三亚甲基苯并咪唑取代三氮环壬烷镍配合物的合成、表征、电化学性质及其与DNA的作用

本文合成了一个新的镍配合物:[Ni(tribentacn)](ClO4)2,(tribentacn为1,4,7-三亚甲基苯并咪唑-1,4,7-三氮环壬烷),用元素分析、红外光谱等手段对其进行了表征,并用X-射线衍射单晶结构分析测定了配合物的晶体结构。该配合物晶体属三斜晶系,P1空间群;中心离子镍位于6个氮原子形成的畸变八面体的中心;还研究了该配合物的电化学性质及其与DNA的作用。

川芎嗪注射液对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的 :探讨川芎嗪注射液对血管内皮细胞DNA合成的影响。方法 :采用3H -TdR掺入法 ,测定经川芎嗪注射液作用后体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的放射性强度 (CPM )值。结果 :川芎嗪注射液可显著降低血管内皮细胞的CPM值 ,且均呈剂量依赖性。结论 :川芎嗪注射液抑制肿瘤血管生成的作用可能与其抑制血管内皮细胞DNA合成有关。

食管鳞癌nm23-H_1蛋白表达及DNA倍体与淋巴结转移关系

目的 :研究食管鳞癌nm2 3 H1 蛋白表达及DNA倍体状态与区域淋巴结转移的关系。方法 :应用流式细胞仪检测食管癌患者新鲜手术标本包括食管癌组织 (癌 )、食管癌旁粘膜 (癌旁 )、食管正常粘膜 (切缘 )及食管癌区域淋巴结 (淋巴结 )中nm2 3 H1 蛋白表达水平及DNA倍体状态。结果 :无论有、无淋巴结转移 ,nm2 3 H1 蛋白表达在癌与癌旁、癌与切缘之间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,癌与淋巴结之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;DNA指数 (DI)在癌组织与癌旁、切缘、淋巴结之间比较差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,癌旁、切缘、淋巴结之间DI差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;nm2 3 H1 蛋白表达在有、无淋巴结转移两组对应组织间比较差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;两组对应组织比较DI差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;DI在不同病理分级间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,DI及nm2 3 H1 蛋白表达在性别、肿瘤部位、病理类型、浸润深度间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :nm2 3 H1 蛋白高表达对食管癌转移有一定的抑制作用 。