应用H-Y单克隆抗体鉴定小鼠和家兔胚胎性别

以C57BL/6雄性小鼠的脾细胞免疫同系雌性小鼠,选择免疫应答反应较好的雌性小鼠4只,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合后的杂交瘤细胞经过3次克隆,筛选出了2株能够分泌H-Y抗体的杂交瘤细胞系HYA1和HYA2,其分泌的相应抗体分别命名为HYa1和HYa2。琼脂双扩散试验表明,HYa1和HYa2分别属于IgM和IgG亚类。胚胎间接免疫荧光分析及胚胎细胞毒试验证明,H-Y单克隆抗体能与雄性胚胎表面的H-Y抗原结合,在有补体存在时,能够溶解雄性胚胎。在胚胎免疫荧光分析中,共分析了438枚8细胞期至桑椹期小鼠胚胎,其中特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占50.5％(219枚)和47.3％(207枚),不易分辨胚胎占2.7％(12枚)。在86枚家兔胚胎中,特异性荧光胚胎和无特异性荧光胚胎分别占48.8％(42枚)和45.3％(39枚),不易分辨胚胎占5.8％(5枚)。小鼠胚胎移植后,接受发特异性荧光胚胎的一组母鼠生了22只小鼠,其雌性率和雄性率分别为18.2％(4只)和81.8％(18只)。而移植无特异性荧光胚胎的一组母鼠生了19只小鼠,其雌性率和雄性率分别为89.5％(17只)和10.5％(2只)。

H-Y抗血清的制备及其在小鼠胚胎性别鉴定上的应用

建立了完善的检测H-Y抗体的CELISA法。首次获得了C57BL/6小鼠对H-Y抗原的抗体应答曲线。高效价的H-Y抗血清明显地提高了小鼠胚胎性别鉴定的准确率。

H－Y单克隆抗体的制备方法

用Ｂａｌｂ／ｃ雄小鼠的脾细胞和皮肤组织对同系雌小鼠脾脏作一次直接免疫和５次腹腔加强免疫，雌小鼠产生良好的免疫应答。其抗血清用未经免疫的雌小鼠脾细胞吸收后，经细胞毒性法检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价可达１：１０２４；选择免疫应答最好的２只雌小鼠，取其脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞进行融合，融合率１００％，经３次有限稀释克隆后，取４只阳性最强的杂交瘤细胞制备腹水。取其中一株的腹水采用胚胎细胞毒法进行特异性鉴定，结果其对２０个正常胚胎中的７个有杀伤溶解现象。４株细胞系分泌的抗体（腹水）以精子细胞毒法测定其效价分别为１：５１２、１：５１２、１：２５６和１：１２８。