TP304H/12Cr1MoV异种钢管的瞬时液相扩散连接

用FeN iCrS iB(A)合金作中间层,氩气保护,对12Cr1MoV珠光体耐热钢和TP304H奥氏体不锈钢管进行了瞬时液相扩散连接。用正交试验的方法研究了工艺参数对接头组织和性能的影响,分析了TLP连接接头的显微组织、断口形貌、力学性能和元素分布,确定出了合适的连接工艺参数。研究结果表明,连接温度1 240℃,等温凝固时间3 m in,压力4 MPa时,接头的强度最高达到590 MPa,其断口呈韧性断裂特征。

不同中间层TLP连接TP304H和12Cr1MoV钢管接头的组织和性能

选用不同的FeNiCrSiB非晶箔合金作中间层,氩气保护,对12Cr1MoV和TP304H钢管进行了瞬时液相扩散(TLP)连接,分析了不同中间层接头的显微组织、力学性能。结果表明:工艺参数为1230℃和1240℃,保温3 min,压力4 MPa时,用FeNiCrSiB(B)和FeNiCrSiB(A)中间层连接的接头,其室温下的抗拉强度等于或超过基体,而FeNiCrSiB(C)中间层连接的接头性能最差。

12Cr1MoV与TP304H异种钢管的瞬态液相连接

采用铁基非晶中间层合金,在1220℃、3min、8MPa的工艺条件下进行了12Cr1MoV与TP304H异种钢管的瞬态液相连接,以扫描电镜(SEM)、能谱(EDX)分析了接头区组织与成分分布,并与氩弧焊接头进行了比较。结果表明,与氩弧焊接头不同,瞬态液相连接接头焊缝界面不明显,晶粒跨界面连续生长,基体元素沿焊缝区连续分布,无成分突变。瞬态液相连接接头拉伸时断在12Cr1MoV母材侧,弯曲180°未断,接头性能合格。

hil-1基因通过饮食限制通路调节秀丽隐杆线虫寿命

目的揭示H1连接子组蛋白基因(H1 linker histone gene,hil-1)的生理学功能,以及其调控线虫寿命的分子机制。方法以秀丽隐杆线虫为模式生物,采用RNA干扰菌喂食、hil-1(gk229)突变体回交纯化以及过表达质粒显微注射技术来敲降、敲除以及过表达hil-1基因,然后观察线虫存活寿命及产卵情况,通过热耐受实验、百草枯应激实验和重金属Cr6+应激实验评价hil-1(gk229)突变体的抗逆性,利用实时荧光定量PCR实验以及构建双突变体线虫进一步确定hil-1调控寿命所关联的信号通路和作用靶点。结果与野生型N2线虫相比,RNA干扰后的线虫寿命以及hil-1(gk229)突变体线虫寿命明显缩短(P<0.001),而hil-1全身性过表达后线虫寿命延长(P<0.05)。与野生型N2线虫相比,hil-1(gk229)突变体线虫对热压力和氧化压力的耐受性明显降低(P<0.001,P<0.05),而对重金属的耐受能力无差异(P>0.05)。并且,相比于野生型N2线虫,hil-1(gk229)突变体线虫的发育周期缩短(P<0.001),产卵提前(P<0.001),但产卵总量没有显著变化(P>0.05)。给eat-2(ad465)突变体线虫喂食hil-1 RNA干扰菌后,hil-1表达下调不影响eat-2(ad465)突变体线虫的寿命(P>0.05)。相较于野生型N2线虫,hil-1(gk229)突变体线虫中daf-16表达水平明显下调(P<0.001),其下游基因mtl-1和ctl-1表达也下调(P<0.05,P<0.001)。与daf-2(e1370)突变体相比,daf-2(e1370),hil-1(gk229)双突变体线虫的寿命无明显变化(P>0.05),而与daf-16(mu 86)突变体相比,daf-16(mu86),hil-1(gk229)双突变线虫的寿命明显缩短(P<0.001)。与对照组相比,在表皮和肠道中RNA干扰hil-1基因表达后线虫寿命明显缩短(P<0.001)。结论hil-1基因缺失明显缩短线虫寿命,同时使线虫对热压力和氧化压力的耐受性降低。hil-1基因可能通过饮食限制信号通路调控秀丽隐杆线虫的寿命,且该作用主要在表皮和肠道。

H1oo在哺乳动物胚胎发育及其基因组重编程中的作用

染色质结构可由转录抑制状态转变为转录激活状态,从而调节早期胚胎由母型基因控制转变为合子型基因控制。作为一种特殊类型的连接组蛋白——哺乳动物特异性连接组蛋白H1oo,其表达方式具有一定的时序性,但又与其他7种连接组蛋白亚型有所不同,H1oo不但能够在卵母细胞-胚胎发育转换过程中发挥功能,而且还可能在基因组重编程过程中起到关键性作用。分析研究卵母细胞特异性连接组蛋白,有助于认识染色质重构建、基因组重编程过程以及核移植的分子机制,而且可能对克隆效率的提高有所补益。

H1foo的分子结构特征及其功能

哺乳动物细胞内存在着多种亚型的连接组蛋白,其中H1foo是首先在小鼠中发现、在卵母细胞中特异表达的一种连接组蛋白。H1foo通过与染色质的结合,改变染色质的结构,进而参与卵母细胞的成熟、受精后对精子染色质的重构及在体细胞核移植中对体细胞核的重编程等。本文就H1foo的分子结构特征、表达特点及其在受精过程、体细胞核的重编程过程中的作用作一综述。

右美托咪定预处理调控PINK1/Parkin通路对H9C2细胞缺氧/复氧损伤线粒体自噬的影响

目的 研究右美托咪定对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路介导的线粒体自噬的影响,以明确右美托咪定保护心肌细胞的相关作用机制。方法 体外培养H9C2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、右美托咪定低剂量组(0.1μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定中剂量组(1.0μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定高剂量组(10.0μmol/L右美托咪定+H/R)。采用3-2(4,5-二甲基噻唑-2)-2-四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组H9C2细胞增殖能力;检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、活性氧簇(ROS)水平;透射电镜下观察线粒体自噬情况;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP);免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、PINK1/Parkin通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,H/R组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组比较,右美托咪定低、中、高剂量组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 右美托咪定可能通过抑制H/R条件下PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬,保护H9C2细胞免受氧化应激损伤。

H1foo在哺乳动物卵子发生和早期胚胎发育中的表达及功能研究进展

H1连接组蛋白(H1 linker histone,H1)是染色质结构和功能的关键调节因子。在相邻的核小体之间,H1与连接体DNA(linker DNA)结合构成染色质的念珠状结构,以稳定染色质的高级结构、调节基因表达。研究发现一种H1亚型,命名为卵母细胞特异性连接组蛋白(oocytespecific linker histone,H1foo),在哺乳动物卵母细胞中特异性表达。文章主要针对H1foo在卵巢卵泡、卵母细胞及早期胚胎发育中的表达分布模式,H1foo在卵母细胞减数分裂恢复和早期胚胎发育中的作用,H1foo在卵母细胞受精和体细胞核移植过程中与其他成分置换、实现基因组的完全重编程、恢复全能性中的重要作用进行综述,以期为相关机制研究提供参考。

芳香分子在氧化偶联聚合中的连接方式研究

利用氧化偶联聚合反应制备了5种含均四甲苯和对二己氧基苯、蒽、芴、N-乙基咔唑以及反式对苯乙烯的共聚物。对这几种共聚物的1H NMR谱做了测试,利用均四甲苯的特殊结构,对其它几种单体的1H NMR信号做了归属,重点讨论这几种芳香分子在氧化偶联聚合反应中的连接方式,结论与氧化偶联聚合机理基本相符.

内源性表位标记的H1FX细胞系构建及其染色质分布图谱

目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)基因组编辑技术对内源性H1FX进行表位标记来执行染色质免疫共沉淀测序(ChIP-seq),探究前列腺癌22Rv1细胞中H1FX在基因组上的结合位点及分布规律。方法以质粒pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9为载体,设计特异性向导RNA(gRNA),构建pX330-H1FX重组质粒,引导Cas9核酸酶至接近H1FX终止密码子的位置处进行切割。以含有3×FLAG表位标签、自剪切多肽2A和遗传霉素耐药基因序列的质粒pFETCh_Donor为载体,序列两侧添加与双链断裂两侧区域同源的同源臂(HOMO),构建pFETCh_Donor-HOMO重组质粒。将pX330-H1FX重组质粒和pFETCh_Donor-HOMO重组质粒共转染到前列腺癌22Rv1细胞中,切割DNA并通过同源重组修复的方式整合表位标签。48 h后使用含遗传霉素的培养基筛选细胞。筛选出内源性表位标记的H1FX-FLAG细胞系后使用FLAG抗体进行ChIP。对ChIP富集的DNA和给料对照(Input)DNA进行建库,建库合格后送测序。后续对H1FX ChIP-seq数据与基因表达数据进行整合分析。结果Western blotting结果显示,筛选到只表达H1FX-FLAG融合蛋白的细胞系;聚合酶链反应结果显示,FLAG表位标签整合至基因组正确的位置;测序结果显示,插入序列及接头处序列正确,内源性表位标记的H1FX-FLAG细胞系构建成功。H1FX ChIP-seq数据与基因表达数据整合分析发现,高表达基因的启动子区域更倾向于缺乏H1FX的结合。结论成功构建了内源性表位标记的H1FX-FLAG细胞系,初步分析了前列腺癌22Rv1细胞中H1FX在基因组上的结合位点及分布规律,为进一步研究H1FX在前列腺癌中的作用提供参考。

胸腺五肽的NMR研究

应用改进的DPFGSE1D-TOCSY和1D-NOESY核磁共振方法测定胸腺五肽的氨基酸残基,从重叠的1H谱中分离出各自旋系统内氢的亚谱信号;继而由DPFGSE1D-NOE技术测定肽链氨基酸残基的连接顺序.结合二维相关谱对胸腺五肽的碳、氢信号做了全归属.并进行了计算机分子模拟,结果与NOESY实验相符.

基金会现场总线概述与总线仪表应用

文章通过引入基金会(FF)现场总线的技术概述和应用,包括H1、Controlnet连接,结合焙烧车间A-B系统中FF总线主站1788-CN2FFR(1788-EN2FFR)的调试实例,以及焙烧炉鼓风机电动阀门智能执行机构的应用与改进意见,介绍实际工矿条件下FF总线仪表在生产稳定与延长设备使用寿命方面的优势,推动FF总线技术与H1仪表的应用技术。

30nm染色质纤维的结构及调控

真核细胞中,基因组DNA缠绕组蛋白八聚体形成核小体,核小体再经过多层次折叠压缩形成具有高级结构的染色质.过去30多年,科学家对30 nm染色质纤维的结构进行了大量的研究,然而关于30 nm染色质纤维的精细结构仍然存在很大的争议.本文综述了近年来对30 nm染色质纤维结构的最新研究进展,并重点阐述了最近解析的30 nm染色质纤维左手双螺旋结构.同时,我们还进一步讨论了一些对30 nm染色质纤维结构起调控作用的因子及其作用机制.最后,我们对30 nm染色质纤维结构与功能领域所面临的挑战和问题进行了展望.

抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH)，并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA，通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+)，在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定，阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段，大小约为370bp，重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp，编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因，并成功构建其原核表达载体。

X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析及其致DNA双链断裂的动态变化

目的 比较DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs^＋/＋）和DNA-PKcs^-/-小鼠胚胎成纤维细胞（MEF） X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析,并对鼻咽癌SUNE-1细胞进行X射线致DNA DSB动态变化。方法 采用蛋白印迹检测DNA-PKcs蛋白表达情况,细胞免疫荧光检测X射线5 Gy诱导的γH2AX焦点形成,通过ImageJ软件分析γH2AX焦点形成数量的差异。结果 DNA-PKcs在DNA-PKcs^-/-和DNA-PKcs^＋/＋ MEF细胞中分别表达缺失和正常。应用γH2AX焦点/细胞和γH2AX焦点/mm2分析方法动态分析X射线诱导的DNA-PKcs^＋/＋、DNA-PKcs^-/-MEF细胞和SUNE-1细胞DSB形成的总体趋势一致;照后 0.5~1.0 h大量γH2AX焦点形成,DNA-PKcs^＋/＋ MEF细胞于照后6.0 h完成修复,DNA-PKcs^-/-MEF和SUNE-1细胞X射线后于照后24.0 h完成修复。γH2AX焦点/细胞的峰值出现在照后1.0 h,γH2AX焦点/mm2的峰值则出现在照后0.5 h。对于DNA-PKcs^＋/＋和DNA-PKcs^-/-MEF细胞,γH2AX焦点/细胞在照后0.5、1.0、3.0、6.0、12.0 h的不同,而γH2AX焦点/mm2在照后3.0、6.0、12.0 h不同。结论 利用细胞免疫荧光动态检测照后致γH2AX焦点/细胞或γH2AX焦点/mm2的分析方法为动态定量研究DSB损伤及修复提供了新的思路。

30nm染色质纤维结构与表观遗传调控

真核生物的DNA以染色质形式通过逐级折叠压缩形成高级结构存在于细胞核中。染色质高级结构直接参与了真核基因的转录调控和其它与DNA相关的生物学事件,因此研究染色质高级结构对了解表观遗传学分子机制有着至关重要的作用。近些年,研究者们针对30 nm染色质高级结构提出了两个模型:螺线管模型和Zig-Zag模型。2014年,我们利用体外染色质组装体系重建了30 nm染色质纤维,运用高精度冷冻电镜技术得到了分辨率为11?的30 nm染色质纤维的精细结构,提出了30 nm染色质高级结构的左手双螺旋Zig-Zag模型。本文综述了30 nm染色质纤维结构研究方面的相关进展,并对30 nm染色质高级结构的表观遗传调控机理以及单分子成像和操纵技术在研究30 nm染色质高级结构中潜在的应用作出讨论和展望。