麻疹野病毒H1基因型在中国流行的分析

为确定现阶段中国流行的麻疹野病毒本土基因型别 ,在 1995～ 2 0 0 2年用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞 )从河南、山东、安徽、上海等 19个省 (自治区、直辖市 ,下同 )的麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子或尿液标本中分离到麻疹病毒 15 6株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)从 15 6株麻疹病毒中扩增出核蛋白 (N)基因碳末端 4 5 0个核苷酸片段。通过对扩增产物的核苷酸序列测定和分析证明 ,15 4株为麻疹病毒H1基因型 ;2株属于A基因型 ,为沪191疫苗株。由此证实 ,H1基因型已在中国广泛流行 ,为中国麻疹病毒的优势基因型。H1是麻疹病毒型内变异最大的基因型。这 15 4株H1基因型麻疹病毒 ,除外Shanxi0 0 - 6和Hunan95 - 2 3株 ,可进一步划分为H1a和H1b两个亚组。H1a的 4 5 0个核苷酸和H1b的差异在 2 0 0 %～ 4 0 0 %。H1基因型的 4 5 0个核苷酸和A基因型代表株Edmonston的基因差异在 6 0 0 %～ 7 33% ;与H2基因型代表株China94 - 1的基因差异在 5 11%～7 5 6 % ;与其它 17个基因型代表株的最大差异在 11 5 6 %。在中国开展麻疹病毒监测和建立麻疹病毒毒株库及基因数据库 ,对加速麻疹控制及未来消除麻疹都十分必要。

北京市西城区2013年麻疹病毒H1基因型的流行情况分析

目的为了加强麻疹病毒基因型的监测,2013年北京市开展了麻疹病毒的核酸检测。方法采用荧光PCR方法进行病毒核酸鉴定,然后对于核酸阳性标本进行RT-PCR（Reverse Transcription PCR,RT-PCR）扩增,扩增产物进行测序及序列比对分析。结果 2013年北京市西城区共采集麻疹疑似病例为41例,获得RT-PCR产物21例,经过序列分析比对,有16例为H1基因型。本研究获得的16例H1基因型的麻疹病毒基因片段序列与世界卫生组织H基因型代表株MVi/Hunan.CHN/0.93/7/H1,在基因亲缘性关系树上同属一个分支,核苷酸同源性为97.1%-97.6%,氨基酸同源性为95.3%-98.0%。结论 2013年北京市麻疹病例明显增多,以本土基因型病例为主,进一步加强麻疹病例控制和预防,对于实现消除麻疹的计划具有重要意义。

人类T型钙通道α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能研究

将人类T型钙通道α1H 亚单位基因 (CACNA1H)cDNA转染到HEK 2 93(humanembroyonickidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株 ,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用。RT -PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H 亚单位的过量表达。生长曲线结果表明 ,T型钙通道α1H 亚单位基因的过量表达能显著促进HEK - 2 93细胞增殖 ,将细胞群体倍增时间从对照细胞的 2 2 1± 1.1h缩短到稳定转染细胞的 14 0± 0 .4h ,细胞群体倍增时间缩短了约 8h ;流式细胞分析结果表明 ,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高 ,相反地处于G1 期的百分率比对照细胞低 ,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H 基因能促进细胞增殖。Western印迹结果提示 ,T型钙通道α1H 亚单位基因表达产物是通过某种信号途径 ,提高了与细胞周期有关基因 (CDK2、cyclinA和cyclinE)的蛋白质表达水平 ,从而刺激了细胞周期的进程。

2014年北京市西城区40例麻疹患者分离的麻疹病毒基因型及同源性

目的：了解北京市某城区2014年分离的麻疹病毒基因型，及时发现输入性麻疹病例。方法采用荧光聚合酶链反应（PCR）方法，对北京市西城区2014年采集的标本进行病毒核酸鉴定、RT-PCR 扩增，扩增产物进行测序及序列比对分析。结果2014年北京市西城区共采集81例麻疹疑似患者的82份标本，其中咽拭子63份，尿19份。麻疹病毒核酸检测阳性70例，RT-PCR 扩增、测序获得基因序列40份，麻疹病毒培养阳性毒株37例。种系进化树分析显示，获得的40份麻疹病毒基因序列与 H 基因簇代表株 Chin9322／H1a，以及世界卫生组织推荐的代表株 MVi／Hunan．CHN／0．93／7／H1在同一分支上，核苷酸水平上同源性分别为98％～98．9％、96．9％～97．8％；氨基酸水平上同源性分别为97．3％～99．3％、95．3％～98％。结论2014年北京市西城区麻疹病例以本土基因型（H1）病例为主，进一步加强麻疹病例病原学监测对麻疹输入性病例的控制和预防具有重要意义。

Related Study on the Nm23-H1 Gene Expression in the Model of Ovarian Carcinoma Cell Lines with High Frequent Metastasis

Objective: To select the ovarian carcinoma cell lines with high frequent metastasis and study the association between nm23-H1 gene expression and metastasis of ovarian carcinoma. Methods: Each ovarian cancer cell line was transplanted subcutaneously into the flank of nude mice, and the metastatic behavior was evaluated by counting lung tumor foci at different time points. The metastatic tumors were cultured in vitro, then substrain was established and transplanted subcutaneously three times. The RNA level of nm23 in 8 human ovarian cancer cell lines were examined by northern-blot. Results: Of the 8 human ovarian cancer cell lines, 4 had high requent metastatic potentiality. The expression of nm23 RNA in human ovarian cancer cells was inversely related to metastatic behavior in the experimental animals (r=0.96, P=0.0001). Conclusion: The difference of the tendency of metastasis which was determined by genetic and molecular levels was significant among different type of cell lines and subtypes. The expression of nm23 mRNA in human ovarian carcinomas was correlated closely with the reduced metastatic behavior in experimental animals and may serve as a sensitive prognostic indicator for ovarian cancer.

应用限制性片段长度多态性分析方法鉴别H_1基因型麻疹野病毒感染病例和麻疹疫苗相关病例

目的在云南省应用H1基因型麻疹野病毒鉴定方法,鉴别H1基因型麻疹野病毒感染病例,应用中国麻疹疫苗株病毒鉴定方法,鉴别接种麻疹疫苗后出现的麻疹样病例是否为麻疹疫苗相关病例。方法采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法、序列分析方法鉴别8株麻疹病毒。结果应用H1基因型麻疹野病毒RT-PCR-RFLP方法对8份标本进行鉴定,其中5份标本RT-PCR产物经SalI酶切后,被切成两个片段,分别为408个碱基对(base pair,bp)和159bp,显示5个病例是由H1基因型麻疹野病毒引起的。应用中国麻疹疫苗株病毒RT-PCR-RFLP方法对3份标本进行鉴定,其中1份标本RT-PCR产物经Af1II酶切,被切成两个片段,分别为287bp和151bp,显示该病例是由中国麻疹疫苗株病毒引起的。2份标本为非H1a基因亚型的麻疹野病毒。结论应用RT-PCR-RFLP方法对H1基因型麻疹野病毒和麻疹疫苗株病毒的鉴定结果,与麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,N)基因测序分析的结果一致,可以作为快速鉴别H1基因型麻疹野病毒和麻疹疫苗株病毒的方法。

宁夏2004-2007年流行麻疹野病毒基因特征分析

目的了解宁夏2004-2007年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据。方法用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹暴发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从分离到的麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因C末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析。结果分离的36株麻疹野病毒全部为H1基因型H1a亚型。36株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%-100.0%,氨基酸同源性为94.0%-100.0%。宁夏14株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为91.0%-92.5%,氨基酸同源性为85.4%-89.4%。结论宁夏2004-2007年流行的麻疹野病毒为H1基因型H1a亚型,未发现其它基因亚型。H1a基因亚型病毒株引起了多个传播链造成宁夏各市的麻疹流行。

某地区麻疹病毒核蛋白及血凝素基因序列分析

目的:探讨深圳市麻疹病毒的基因型别和特征。方法:采用B95a细胞分离培养麻疹病毒,通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白N末端4 5 0bp片段和H基因合序列并测序、分析和基因库Genebank中麻疹的各代表株基因序列的同源性进行比较。结果:分离到1株麻疹病毒,N基因与H1基因型代表株相比同源性为98.4%,H基因与H1基因代表株同源性达99.5 %。

乌鲁木齐成人麻疹病毒基因特征分析

目的分析新疆乌鲁木齐市2008年成人麻疹爆发流行的麻疹野病毒的基因特征。方法用Vero/slam细胞从成人麻疹暴发患者的标本中分离出麻疹野病毒,应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)对麻疹野病毒分离株扩增核蛋白N基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。并以N基因羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析。结果首批共分离到5株麻疹野病毒,这些病毒N基因450个核苷酸之间的差异为0%～0.2%,均为H1基因型中的Hla基因亚型。结论引起新疆乌鲁木齐市2008年成人麻疹流行的麻疹野病毒为Hla基因亚型。

海南省1999-2004年流行麻疹野病毒的基因型分析

目的 为了确定海南省流行的麻疹野病毒基因型别，从分子水平揭示麻疹的流行病学特点，为控制麻疹策略的制定提供本底资料。方法 采用B95a细胞从麻疹爆发和散发病人咽拭子标本中分离麻疹病毒，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）进行基因分型并测序。结果 在57份疑似麻疹病例的咽拭子标本中，分离到14株麻疹病毒，经测序全部为H1基因型。结论 引起海南省1999-2004年麻疹爆发和散发的病原为麻疹病毒H1基因型，尚未发现有其它基因型传入引起的麻疹病例。

青海省2011年麻疹病毒基因型分析

目的分析西宁市2011年麻疹病毒流行株的基因特征。方法用Vero/slam细胞从发热伴出疹病例的咽拭子标本中分离出麻疹病毒,采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法,检测毒株。结果应用H1基因型麻疹野病毒RT-PCR-RFLP方法,对麻疹毒株进行鉴定,其RT-PCR阳性产物经Sal I酶切后被切成2个片段,分别为408个和159个核苷酸,显示该病例由H1基因型麻疹病毒引起。结论 2011年分离到的5株麻疹毒株均为H1基因型麻疹病毒,与中国其它地区的流行情况一致,无新型及传入性的其它亚型出现。

中国6省2005年麻疹病毒分离株分子特征分析

研究2005年我国6省麻疹暴发、流行的野毒株基因型特征和分子流行病学,为进一步的麻疹防治策略提供科学依据.用RT-PCR方法,从2005年6省分离的48株麻疹病毒株中扩增出核蛋白(nucleoprotein, N)基因C末端676个核苷酸片段.再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.6省分离的48株麻疹病毒均为H1基因型,其中两株为H1b亚型, 其余为H1a亚型.48株野毒株的核苷酸同源性为95.1%～100%(核苷酸差异为0～22bp),氨基酸同源性为92.7%～100%;与我国疫苗株S191的核苷酸同源性为88.7%～92.5%,氨基酸同源性为88.0%～91.2%.其中Shaanxi05-1和Yunnan05-1,Anhui05-2和Ningxia05-9的N末端456个核苷酸的同源性为100%;Hebei05-19、Anhui00-2和Liaoning02-2,Hebei05-1和Chongqing04-3的核苷酸的同源性为100%.引起2005年我国6省麻疹暴发流行的野毒株为H1基因型,并以H1a为绝对优势亚型.各省之间存在相同毒株引起的传播链,不同年份之间存在相同麻疹野毒株的持续循环传播.同时提示,有必要进一步研究由核苷酸变异引起的氨基酸变异及中和抗原位点等生物学性状的改变,可能影响麻疹病毒的毒力和传播力.

中国流行的麻疹病毒基因型和亚型趋势分析

目的分析中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)1993～2006年本土麻疹病毒基因型和基因亚型的流行趋势。方法依据全国麻疹实验室网络监测数据库、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室病毒学监测数据库,分析中国麻疹病毒分子流行病学资料。结果1993～2006年,从29个省(自治区、直辖市,下同)分离到748株麻疹病毒,其中743株为H1基因型,1株为H2基因型,1株为A基因型,3株为疫苗相关A基因型。在H1基因型中,684株为H1a基因亚型,50株为H1b基因亚型,9株为H1c基因亚型。从29个省分离到H1a基因亚型(西藏、湖北省未开展),H1b基因亚型只从10个省分离到,H1c基因亚型在1993～1994年从4个省分离到。自2000年以来,H1a基因亚型逐年成为优势流行亚型,并呈上升趋势;H1b基因亚型逐年转为弱势,其传播于2006年被阻断;而H1c基因亚型的流行自1995年已经消失。结论通过对1993～2006年中国29个省流行的麻疹病毒分子流行病学的系统研究,阐明了在麻疹控制和加速控制阶段中国流行的麻疹野病毒的基因变异规律,以及病毒基因型别在地域和年代上的分布,证实H1基因型是中国近14年麻疹病毒流行的绝对优势本土基因型,其中H1a逐渐成为中国近几年流行的绝对优势基因亚型。

云南省麻疹野病毒不同基因型的流行分布状况

目的了解云南省麻疹野病毒不同基因型的流行分布状况。方法用B95a细胞[Epstein-Barr(EB) Virus-Transformed,Marmoset B Lymphoblastoid Cell Line;埃泼斯坦-巴尔病毒转化的绒猴淋巴母细胞]和Vero/SLAM细胞[Vero Cell Transfected to Express the Human Signaling Lymphocyte Activation Molecule(SLAM),淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞]从麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹野病毒,用逆转录-聚合酶链反应扩增核蛋白(Nucleoprotein,N)基因羧基末端的676个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定。并以N基因羧基末端450个核苷酸序列构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析。结果云南省2004～2011年共分离和检测到46株麻疹病毒及2株病毒核酸,43株为H1基因型,分布于14个县(区)及四川省普格县;4株为d11基因型,分布于边境孟连县及缅甸的班康市;1株为A基因型,来自龙陵县。结论麻疹病毒H1基因型是云南省优势本土基因型,d11基因型是从缅甸输入后连续两年于缅甸接壤的地区发现的麻疹野病毒,A基因型为中国沪191疫苗株相似株。

辽宁省2001～2006年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的 了解辽宁省2001～2006年流行的麻疹野病毒的基因特征，为消除麻疹提供依据。方法用B95a和Veto／Slam细胞从麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹野病毒，用逆转录聚合酶链反应扩增麻疹野病毒分离株的核蛋白（N）基因羧基末端676个核苷酸片段，再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。并以N基因羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树，进行核苷酸变异分析。结果辽宁省2001～2006年共分离到93株麻疹野病毒，38株经过测序后均为H1基因型的H1a。基因亚型。38株麻疹野病毒450个核苷酸差异为0％～4．8％，与H2基因型代表株Chin937的差异为1．5％～5％，与H。。基因亚型的代表株Chin9322同源性为96％～99．5％。结论辽宁省2001～2006年流行的麻疹野病毒以H1a为优势基因亚型。

济南市2013年麻疹病毒流行病学及基因特征分析

目的监测济南市2013年麻疹病毒的流行情况及遗传变异特点,为控制和消除麻疹提供实验室依据。方法采集麻疹疑似病例的血清、咽拭子,对疑似麻疹病例的血清采用ELISA方法进行IgM抗体检测,对咽拭子进行实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测,阳性咽拭子样本通过RT-PCR扩增麻疹病毒N基因序列,进行麻疹病毒的流行特点及种系分析。结果 2013年济南市共报告麻疹疑似病例856例,采集疑似病例血清样本817例,IgM阳性样本447例,阳性率为54.71%。麻疹全年均有发病,其中以3月份发病最高,占40.80%（122/299）,发病人群主要集中在1岁以下的儿童,占发病总数的54.85%（164/299）,各年龄组中性别差异无统计学意义。21份麻疹阳性咽拭子样本经序列分析为H1a基因型,核苷酸、氨基酸差异平均为98.2%-100.0%,97.4%-99.3%。结论济南市麻疹病毒春季高发,病毒主要侵犯1岁以下的儿童。H1a是济南市本土流行野毒株的优势亚型,优势病毒的持续传播与麻疹的发病有密切联系。

限制性片段长度多态性分析方法应用于中国麻疹野病毒基因型别的鉴定

目的 建立和应用麻疹野病毒基因型快速诊断方法 ,及时监测麻疹流行株基因型动态 ,尽早发现异型输入病例。方法 应用一种适用于我国现流行麻疹野病毒的基因型别筛查、定型的分析方法 ,即逆转录 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析方法 (RT PCR RFLP) ,对吉林省 2 0 0 1～ 2 0 0 3年分离到、经中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室用脱氧核糖核酸 (DNA)序列分析证实为H1基因型的 9株野病毒进行验证。结果 9株麻疹病毒分离阳性株的RT PCR-RFLP基因分型结果与核酸序列分析结果完全一致 ,均为H1基因型。并应用该方法对吉林省 2 0 0 3年分离的 2株麻疹病毒进行基因型别鉴定 ,亦为H1基因型。同时对 2 0 0 1～ 2 0 0 3年的 46份麻疹病例的临床标本 ,应用新建立的RT-PCR-RFLP方法直接进行麻疹病毒核糖核酸 (RNA)提取、RT-PCR反应及基因型别鉴定。 46例临床标本经直接RT-PCR扩增后的 31例RT-PCR阳性产物 ,经RFLP法酶切、电泳结果均为H1基因型。结论 RFLP分析方法是一种快速、简便又经济实用的中国麻疹野病毒基因定型筛查方法 ,对快速掌握麻疹病毒基因型流行动态及地理分布 ,以及麻疹野病毒的输入、变异情况 。

海南省麻疹野病毒的分离与血清学初步研究

目的 为了解海南省麻疹暴发病例中,现行麻疹野病毒流行状况,以及本土麻疹病毒的基因型。方法来集麻疹疑似病例咽试子标本,应用B95a细胞进行病毒分离培养。结果 在5例疑似病例中分离到2株麻疹病毒,阳性率为40％。经 RT-PCR和其产物的基因序列分析,属H1基因型,为中国本土麻疹野毒株。同时采用麻疹疫苗初免儿童血清中和新分离麻疹病毒,结果中和抗体滴度为1:10、1:20,说明我国生产的麻疹疫苗对我省现流行的麻疹野病毒能起到保护作用。结论 这是海南省首次用B95a细胞成功分离到麻疹野病毒,并通过基因分型证实为中国本土野病毒,填补了海南省麻疹病毒分离的空白。

宁夏2004—2007年麻疹监测分析

为了客观评价宁夏麻疹监测系统现状,探讨控制和消除麻疹的策略。对宁夏2004—2007年麻疹流行病学和实验室监测工作进行分析。结果显示,宁夏麻疹监测系统的灵敏性较高,疑似麻疹病例标本采集率和血清学诊断率等主要监测指标已达较高水平。同时,对监测到的36株麻疹野病毒基因型进行了探讨,全部为H1基因型H1a亚型,未发现其它基因亚型。因此,宁夏亟需加速控制麻疹,应继续做好麻疹监测和麻疹疫苗免疫接种。