蛋白激酶H11基因在小鼠子宫中的表达及其性激素调节

为研究蛋白激酶H11基因在生殖系统中的作用,我们采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了蛋白激酶H11基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和胎盘以及正常动情周期子宫中的表达及其受性激素的调节。结果发现:蛋白激酶H11基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢及子宫等一些生殖相关的组织中表达水平较高;妊娠初始期,蛋白激酶H11基因在小鼠子宫内膜植入位点处有明显的高表达,其mRNA定位于腔上皮细胞和基质细胞中。在动情周期中,蛋白激酶H11基因在动情前期子宫中表达水平较低;卵巢切除模型显示雌激素和孕激素均可显著上调蛋白激酶H11基因的表达。以上结果提示蛋白激酶H11可能参与了胚胎植入过程中腔上皮细胞凋亡和基质细胞增殖与蜕膜化以及动情周期小鼠子宫内膜细胞的功能调节[动物学报51(3):462-468,2005]。

应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫H11基因研究

【目的】为了检测RNAi沉默H11基因能否模拟H11疫苗免疫效果。【方法】针对H11基因序列设计并合成特异性dsRNA,通过浸泡方式分别将dsRNA导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析H11基因在L3期幼虫中的转录抑制效果,同时,将H11-dsRNA浸泡L3期幼虫24 h后感染绵羊,定期采集绵羊粪便检查虫卵数,第30 d后剖检绵羊皱胃,检查荷虫数的变化。研究H11基因的沉默对捻转血矛线虫减虫率和减卵率的疫苗免疫效果。【结果】实时荧光定量PCR检测表明:试验组中H11基因的相对含量显著低于对照组(P<0.01),在浸泡72 h后,H11-dsRNA组基因的表达量仅为对照组的21.33%。绵羊体内干扰沉默效果显示,试验组H11干扰组虫卵减少率为41.02%,减虫率为39.6%。【结论】研究通过浸泡法导入的dsRNA能有效抑制H11基因的转录,同时H11基因的沉默与幼虫的发育密切相关,为捻转血矛线虫及其它寄生线虫的基因功能研究提供一种新的方法。

H11蛋白基因对p38MAPK磷酸化的影响及其对烧伤后心肌损伤的保护作用

目的探讨H11蛋白基因对p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化的影响及其对烧伤后心肌损伤的保护作用。方法选取36只雄性Wistar大鼠,建立大鼠重度烧伤模型,随机抽取24只纳入烧伤组,对烧伤组进行1～18 h的缺氧刺激,缺氧6～18 h的纳入D1组（12例）,缺氧1～6 h的纳入D2组（12例）,正常大鼠纳入D3组（12例）。烧伤处理后提取心肌细胞RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测法分析烧伤后1 h、3 h、6 h、12 h、18 h各时间点H11蛋白基因mRNA表达情况,同时采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测缺氧刺激后5h D1、D2组血清p38MAPK磷酸化水平、核因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 D1、D2组H11蛋白基因mRNA水平随时间延长较D3组显著增加（P〈0.05）,烧伤后6～12 h时H11蛋白基因mRNA水平达峰值;D1组刺激后p38MAPK磷酸化水平（0.21±0.12）μg/L、NF-κB（0.14±0.12）μg/L、TNF-α（0.28±0.04）μg/L水平显著低于D2组（P〈0.05）。结论 H11蛋白基因可抑制p38MAPK磷酸化,且能减轻烧伤后心肌损伤,具有保护心肌作用。

捻转血矛线虫疫苗候选抗原H11亚型基因的序列结构及启动子活性分析

捻转血矛线虫微粒体氨肽酶H11是有效的疫苗候选抗原,其重组蛋白免疫保护效果可能与基因亚型相关。为分析H11亚型基因的序列结构及启动子活性,本研究扩增并鉴定了H11-1、H11-2亚型基因的开放阅读框(2 937,299 bp),发现其与已知H11 (H11-3)、H11-4亚型氨基酸序列高度同源,具有保守的糖基化位点、跨膜区及微粒体氨肽酶活性中心锌指基序。分段扩增获得了H11-1、H11-2、H11-4亚型基因DNA序列(11 698,17 995,19 804 bp),比对分析发现,与H11(H11-3)基因结构相似,H11-1、H11-2亚型基因均含25个外显子和24个内含子,通过典型的GT…AG结构剪接,对应的外显子大小基本一致,内含子大小各异,同源性低;推测各亚型不是由同一基因选择性剪接形成,但剪接模式相同。运用基因步移技术扩增鉴定了H11-1、H11-2、H11-4亚型基因5′侧翼区(4 606,3 465,2 361 bp),利用pPD95.77载体构建了重组表达载体,通过显微注射将其导入秀丽线虫观察其启动转录活性,结果表明H11-4 5′侧翼区可启动GFP在秀丽线虫除胚胎以外的各时期表达,且表达集中于虫体肠道起始和末端;未检测到H11-1或H11-2 5′侧翼区启动的GFP表达,推测其转录活性或GFP表达较弱。本研究为后续探明H11基因各亚型生物学功能、参与免疫保护机制及高效重组疫苗研究奠定了基础。