鸡传染性支气管炎病毒H120疫苗株全长cDNA感染性克隆的构建

根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法对其基因组分10个片段进行扩增,并克隆至pMD19-T载体中进行测序。经BsaⅠ限制性内切酶酶切后,采用优化的连接策略将各DNA片段进行连接,获取H120株的基因组全长cDNA,其5′端具有完整的T7RNA聚合酶启动子的核心序列,3′端具有polyA尾巴结构。通过T7RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA,转染BHK-21细胞并进行病毒拯救。采用RT-PCR、测序及鸡胚传代对拯救出的病毒株进行鉴定。结果表明成功地从H120株的基因组全长cDNA拯救出病毒H120-R株,为进一步开展该病毒的分子致病机理研究、新型疫苗的研制等奠定了基础。

H120活疫苗对部分基因型传染性支气管炎病毒的免疫保护效力

对LH、PZ、CZ-JT和JT等最新分离的传染性支气管炎病毒(IBV)进行S1基因序列分析和基因分型。结果表明:LH株和PZ株均属于QX基因型,但分属2个不同的基因亚群;CZ-JT株属于HN08基因型;JT株则属于CK/CH/LSC/99I基因型。用商品化传染性支气管炎活疫苗(H120株)对4个分离株和M41标准强毒株的免疫攻毒保护试验结果表明:H120疫苗能够对属于Mass-type的M41标准强毒株提供完全保护;对LH株和PZ株可提供临床保护,但试验鸡可检出较高比例的气管和肾脏排毒;对CZ-JT株和JT株只能提供部分临床保护,且试验鸡气管和肾脏排毒较为严重。研究结果提示Mass-type疫苗已经不能对当前流行毒株提供完全保护,迫切需要研制新的疫苗以适应生产的需要。

抚顺地区鸡传染性支气管炎病毒的分离及S1基因序列分析

为了了解抚顺地区鸡传染性支气管炎病毒的流行情况,试验对该地区规模化养鸡场内的62只疑似发病病鸡进行了样品采集,经SPF鸡胚传代后提取基因组RNA,PCR扩增病毒S1基因并进行序列测定及遗传进化分析。结果表明:从62份疑似病料中共筛查到鸡传染性支气管炎病毒28株。其中27株分离株属于同一大的进化分支,且该地区分离株与疫苗株H120分布于不同的进化分支。说明该地区鸡传染性支气管炎病毒流行概率较高,且H120株疫苗对其保护效果差。