沙棘花青素提取物对双氧水诱导的H1299细胞损伤的保护作用及Nrf2/HO-1通路的影响

目的:研究沙棘花青素提取物(The anthocyanidin extract of Hippophae rhamnoides L.,HRAE)对双氧水诱导H1299细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:利用双氧水诱导H1299细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测HRAE对细胞活力的影响,采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的含量;采用试剂盒分别测定超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathion peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量;采用Western Blot法检测血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶-1(NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like ECH-associated protein 1,Keap1)和核转录因子E2相关因子(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)的蛋白质水平;采用相关数据库和软件对沙棘花青素提取物的关键活性成分表儿茶素和儿茶素与氧化应激关键靶点蛋白Nrf2进行分子对接验证。结果:MTT实验表明,在0~800μg/mL浓度范围内HRAE对细胞活力无显著性抑制作用(P>0.05);与模型组相比,给药组中MDA水平下降,SOD、CAT和GSH-Px等活性均有不同程度升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,给药组ROS的含量显著降低(P<0.05);Western Blot显示HRAE可显著(P<0.05)调节HO-1、NQO1、KEAP和Nrf2的蛋白质水平(P<0.05);分子对接结果表明表儿茶素和儿茶素与氧化应激关键蛋白Nrf2具有良好的自由结合活性。结论:沙棘花青素提取物以浓度依赖降低双氧水导致的H1299细胞氧化损伤,其机制可能与促进Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。

贝伐珠单抗通过调控PI3K/AKT信号通路下调肺腺癌H1299细胞PD-L1表达

目的:探讨贝伐珠单抗(Beva)对人肺腺癌H1299细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达的影响及其可能机制。方法:使用不同浓度Beva(0、5、10、20、40、80μg/ml)作用于H1299细胞36 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞PD-L1表达;实验分为:对照组(等量培养液)、Beva组、740-YP(PI3K激活剂)组、LY294002(PI3K抑制剂)组、Beva+740-YP组,流式细胞术检测细胞PD-L1表达,Western blot法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果:(1)Beva能抑制H1299细胞增殖,其作用与剂量有关(P<0.05);(2)随着Beva浓度升高、作用时间延长,H1299细胞PD-L1表达量逐渐减少(P<0.05);(3)PI3K通路抑制剂LY294002处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著减少(P<0.01),PI3K通路激活剂740-YP处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著增加(P<0.01);(4)Beva处理H1299细胞后PD-L1、p-PI3K、p-AKT的表达显著减少(P<0.05),加入740-YP后可减弱Beva对PD-L1、p-PI3K、p-AKT的抑制作用(P<0.01)。结论:Beva在一定范围内以剂量依赖方式抑制H1299细胞增殖,以时间-剂量依赖方式下调H1299细胞中PD-L1的表达,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

EGCG抑制Nicotine诱导肺腺癌H1299细胞JAK2/STAT3 mRNA的表达研究

为探索EGCG对Nicotine诱导肺癌细胞增殖的抑制作用,本研究通过MTT实验筛选出EGCG、Nicotine对肺腺癌细胞H1299的最佳作用浓度,利用实时荧光定量PCR技术检测EGCG、Nicotine对H1299细胞中Bax、Bcl-2、Jak2和Stat3基因mRNA相对表达量的变化。实验结果表明,EGCG对H1299细胞的半抑制浓度IC50值约为32μmol·L-1(24 h)、15μmol·L-1(48 h);1μmol·L-1的Nicotine对H1299细胞促增殖作用明显;以15μmol·L-1的EGCG预处理H1299细胞24 h可显著下调1μmol·L-1 Nicotine的促增殖作用(P<0.05)。1μmol·L-1的Nicotine处理H1299细胞可明显降低JAK2/STAT3信号通路中Bax基因mRNA的表达,增加Bcl-2、Jak2、Stat3基因的mRNA表达;15μmol·L-1 EGCG预处理H1299细胞可反向调控Nicotine诱导所致JAK2/STAT3信号通路中Jak2、Stat3和Bax、Bcl-2基因表达量的变化,结果具有显著性差异(P<0.05)。由此可知,EGCG对Nicotine诱导的肺腺癌H1299细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路中促增殖基因mRNA的表达起抑制作用。

复方苦参注射液增加肺癌H1299细胞放射敏感度的研究

目的观察复方苦参注射液对肺癌H1299细胞放射敏感度的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐法检测放射对H1299细胞增殖的影响;采用流式细胞法检测H1299细胞凋亡率;克隆形成试验检测各组H1299细胞的存活率。结果不同浓度复方苦参注射液处理H1299细胞24、48、72 h的IC50分别为14.46、8.51、3.52 mg/mL,对H1299细胞的毒性有一定的剂量和时间依赖性。苦参放射组H1299细胞增殖抑制率分别为33.03%、34.00%,单纯放射组抑制率分别为12.73%、15.44%,差异有统计学意义(P<0.05)。苦参放射组H1299细胞的凋亡率为11.0%,单纯放射组凋亡率为6.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯放射组H1299细胞的存活率为16.3%,复方苦参注射液联合放射可使H1299细胞存活率降为12.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论复方苦参注射液能增加放射线诱导的肺癌H1299细胞凋亡,从而提高肺癌H1299细胞的放射敏感度。

噬菌体肽库与NCI-H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究

目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物信息学分析、比对;利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果:经过三轮减性筛选发现,随机挑选的9个单克隆中,其中1个对NCI-H1299和A549均具有较高亲和力,将其命名为ZS-9,测序结果为CAT AAT AAG CAT CTT CCG TCT ACG CAG CCT CTT GCG,根据测序结果推导出ZS-9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA,生物信息学分析表明ZS-9的氨基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论:利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞NCI-H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS-9,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。

H1299细胞中Plk3对p73转录活性的影响

背景与目的:研究表明蛋白激酶Plk3可以增加肿瘤抑制因子p53的转录活性,但对p73转录活性的影响尚不清楚,因此本实验旨在研究蛋白激酶Plk3对p73转录活性的影响。方法:选用p53缺失型人类肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告剂分析、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及克隆形成实验的方法研究蛋白激酶Plk3及激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p73转录活性的影响。结果:荧光素酶报告剂分析结果显示,单独转染p73基因可以增加p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达(P<0.05);共转染p73基因和Plk3基因,p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达与单独转染p73基因组相比显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性;而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达没有显著影响(P>0.05)。RT-PCR检测结果也显示,p73诱导p21WAF1和Bax的mRNA表达(P<0.05),Plk3降低了p73诱导的p21WAF1和Bax的mRNA表达水平(P<0.05);而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p73诱导的p21WAF1和Bax的mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。克隆形成实验结果显示,p73抑制了H1299细胞克隆的形成(P<0.05),Plk3降低了p73对H1299细胞克隆形成的抑制(P<0.05),而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p73抑制H1299细胞克隆形成无显著影响(P>0.05)。结论:Plk3可以抑制p73的转录活性,而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p73的转录活性无明显影响。

BH3诱导肺癌H1299细胞凋亡的试验研究

目的研究肽BH3抗人非小细胞肺癌细胞株H1299的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养H1299细胞,取10μM、100μM和1000μM浓度的BH3作用于H1299细胞,72h后,用RT-PCR检测Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达变化、测定Capase3和Capase9的活性并观察体内外细胞生长的抑制情况。结果 RT-PCR结果显示,不同浓度的BH3作用后,Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达表现出相应变化,Capase3和9的活性也有增高的趋势。BH3对细胞有明显的抑制作用,24h后,抑制率分别为2.34%、17.5%、24.46%;48h后,抑制率分别为8.72%、20.33%、45.17%;72h后,抑制率分别为13.11%、38.90%、50.24%。BH3(10μM、100μM和1000μM)对裸鼠移植性非小细胞肺癌细胞株H1299也有抑制作用,3个剂量组的抑瘤率分别为43.85%,54.92%和59.02%。结论肽BH3有促进H1299细胞凋亡的作用。降低高表达的Bcl-2和Bcl-xL基因,升高Ca-pase3基因,可能是BH3抗人非小细胞肺癌的机制之一。

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌H1299细胞凋亡机理研究

目的:研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及细胞周期阻滞对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法:MTT法检测细胞活性、Hoechst 33258染色法计数凋亡细胞、流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布。结果:与未处理的对照组相比,DADS可诱导H1299细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,并呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;较高浓度的DADS能诱导G2/M期细胞百分率显著升高。结论:DADS能诱导H1299细胞发生细胞凋亡,并诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞。

ULF基因沉默对依托泊苷引起的非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰靶向抑制ULF的表达对化疗药物依托泊苷(etoposide)引起的非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的影响。方法设计3条针对ULF基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段及1条阴性对照siRNA,分别在慢病毒载体介导下感染H1299细胞。用real-time PCR及Western印迹法筛选出1条抑制效率最高的ULF序列,对有效干扰组和对照干扰组细胞进行etoposide处理,干扰对照细胞或沉默ULF的H1299细胞,用c-PARP做标记物检测H1299细胞的凋亡程度,MTT法检测H1299细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果经感染ULF-shRNA-1序列的H1299细胞中ULFmRNA及蛋白表达降低最为明显,抑制率达80%,选择该条siRNA作为有效干扰组进行后续实验。Western blot结果显示etoposide处理后,有效干扰组H1299细胞凋亡水平显著增加,细胞增殖抑制率显著高于对照干扰组,并与etoposide剂量呈正相关,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流武结果显示有效干扰组G0/G1期细胞较对照组增加,S期细胞减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 etoposide处理后通过干扰ULF蛋白表达可诱导H1299细胞的凋亡,抑制细胞增殖,使细胞出现S期阻滞,推测ULF基因可能成为癌症基因治疗的一个新靶点。

藻蓝色素蛋白诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的机制

藻蓝色素蛋白是一种被广泛认可的天然食品着色剂,也是一种重要的功能性食品,具有优良的抗炎、抗氧化及抗肿瘤特性。前期试验表明:藻蓝蛋白能够诱导非小细胞肺癌H1299细胞的凋亡。本研究以高通量转录组技术为手段,对藻蓝蛋白处理前、后的H1299细胞进行差异基因的筛选,探究藻蓝蛋白在非小细胞肺癌中的调控机制。转录组分析显示:藻蓝蛋白能够显著降低H1299细胞内toll-白介素1受体域接头蛋白(TIRAP)基因的表达;采用siRNA干预TIRAP的表达后,H1299细胞出现凋亡,细胞形态发生非正常改变,细胞增殖能力显著降低,促凋亡蛋白Bax表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-xL表达下调;同时,沉默TIRAP的表达能够显著降低H1299细胞中NF-κB信号通路的活性。本研究表明:藻蓝蛋白能够抑制TIRAP的表达,通过降低NF-κB信号通路的活性而诱导H1299细胞的凋亡。此结果揭示了藻蓝蛋白在非小细胞肺癌中的作用机制,为肺癌的潜在治疗和藻蓝类功能性食品添加剂的开发和利用提供一定的理论依据。

杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响,筛选杜仲抗肿瘤的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮,以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度分别加入H1299细胞中,用MTT法检测H1299细胞的增殖情况。结果杜仲总黄酮为25μg、50μg、100μg、200μg/ml剂量组的OD490吸光值均降低,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05)。结论杜仲总黄酮能直接抑制体外培养的人肺腺癌细胞H1299细胞增殖。

STAT1对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及IFN-β敏感性的影响

目的:探讨信号转导及转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及人重组干扰素β(interferon-β,IFN-β)敏感性的影响。方法:构建STAT1基因慢病毒过表达载体Lenti-STAT1,转染H1299细胞,建立稳定表达STAT1的细胞株,EGFP转染组作为对照,观察各组细胞生长情况。用不同浓度的IFN-β处理各组细胞,观察对细胞的生长抑制作用。Western blot法检测各组细胞内p-STAT1、ICAM-1和PCNA的蛋白水平。结果:成功构建稳定过表达STAT1及对照EGFP的H1299细胞株。过表达STAT1的H1299细胞的增殖活性明显低于EGFP对照组(P<0.05),其对IFN-β的敏感性显著高于EGFP对照组(P<0.05)。过表达STAT1上调活化的STAT1磷酸化水平,下调ICAM-1表达。并且,STAT1增强IFN-β诱导的STAT1磷酸化水平,下调PCNA表达。结论:过表达STAT1可抑制H1299细胞增殖,增强细胞对IFN-β的敏感性,为STAT1基因联合IFN-β治疗非小细胞肺癌提供了实验基础。

沉默肌球蛋白轻链9基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响

目的探讨沉默肌球蛋白调节轻链9(MYL9)基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响。方法将H1299细胞株分为对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)和敲减组(KD组),CON组细胞不进行转染,NC组、KD组分别转染空载短发夹RNA慢病毒和沉默MYL9基因表达的短发夹RNA慢病毒。检测3组细胞MYL9 mRNA表达水平、增殖能力及迁移能力。结果与CON组和NC组比较,KD组MYL9的mRNA相对表达水平、细胞增殖及细胞迁移能力均更低(均P <0. 05)。结论沉默MYL9基因可下调非小细胞肺癌H1299细胞株MYL9基因的mRNA表达水平,降低其增殖和迁移能力。

亲环素A过表达对高温、紫外线和顺铂引起的H1299细胞凋亡的影响

目的:探讨人肺癌细胞株H1299过表达亲环素A(Cy PA)后对高温、紫外线和顺铂作用引起的细胞凋亡的影响。方法:采用重组慢病毒介导构建CyPA过表达H1299细胞株H1299 CyPA OE,并用Western blot方法验证CyPA过表达细胞株是否成功构建。培养2H1299和H1299 CyPA OE细胞株,分别进行高温(44℃处理60 min)、紫外线(90μW/cm处理60 min)和顺铂(37.5、75和150μg/m L作用2h)处理后,用高内涵分析平台检测细胞的晚期凋亡。结果:H1299 CyPA OE细胞能检测到绿色荧光,且其CyPA蛋白表达较H1299细胞明显增高,表明H1299 CyPA OE细胞株构建成功。在不同顺铂浓度下,H1299 CyPA OE细胞凋亡率较H1299细胞均明显降低(P均<0.05),而在高温和紫外线作用下,H1299 CyPA OE细胞凋亡率与H1299细胞相比差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:CyPA过表达对顺铂诱导的凋亡有抵抗作用,表明CyPA可作为潜在的联合化疗的基因靶点,有望为临床个体化治疗提供新的思路。

S期H1299细胞热损伤后的延迟性DNA双链断裂

目的研究S期细胞热损伤后DNA双链断裂形成规律,以阐明S期细胞热敏感原因,并分析DNA双链断裂延迟性形成的可能机制。方法流式细胞术分析热损伤后细胞周期阻滞;Ed U掺入实验检测DNA复制能力;血清饥饿法同步H1299细胞周期;中性彗星实验动态观察热损伤后DNA双链断裂形成;台盼蓝拒染实验研究热损伤后细胞存活率;蛋白免疫印记实验检测ATM磷酸化及DNA结合RAD18情况。结果流式结果显示H1299细胞经45℃热损伤1 h后S期细胞较未加热组明显增多(P<0.01);热损伤后Ed U阳性率随时间变化趋势同S期比例变化;S期细胞热损伤后需经37℃正常孵育一定时间方可观察到"彗星拖尾"现象,且随着正常孵育时间延长,反映DNA双链断裂的尾力矩值越大;台盼蓝拒染实验显示S期细胞受热后7.5 h内死亡率保持较低水平,之后细胞死亡加速;热损伤后ATM磷酸化先增多后减少,热损伤导致DNA结合RAD18明显减少。结论细胞热损伤后可发生S期阻滞,阻滞期间因复制继续、DNA损伤修复抑制而延迟形成的致死性DNA双链断裂是S期细胞热敏感的可能原因。

鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用研究

目的:探讨鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用及其机制。方法:利用CCK-8法检测BRU对H1299细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50),将H1299细胞分为对照组、BRU组(IC50)、X射线组(2 Gy)和BRU联合X射线组(BRU+2 Gy)。应用克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测照射后24 h细胞凋亡率和胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS);Western blotting技术检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路和线粒体凋亡通路相关蛋白表达;免疫荧光技术实现Nrf2蛋白定位。结果:BRU的IC50为100 nmol/L,用该浓度处理H1299细胞24 h后,Nrf2表达量最低;100 nmol/L BRU联合2 Gy的X射线照射后,与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、Nrf2蛋白表达量降低,细胞核中Nrf2蛋白含量减少,线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高。结论:BRU联合X射线通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路,增加H1299细胞凋亡,从而增强H1299细胞的辐射敏感性。

菲律宾蛤仔酶解物抗肺癌H1299细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽的制备及体外抗肺癌H1299细胞的活性。[方法]选择胰蛋白酶酶解菲律宾蛤仔,经超滤得到3kD以下的酶解多肽,应用MTT法、HE染色和AO/EB染色等方法检测其体外抗H1299细胞的活性。[结果]3 kD以下的酶解多肽作用于H1299细胞后,MTT法检测结果表明该多肽能抑制该细胞增殖,呈剂量和时间依赖;经HE染色和AO/EB染色发现H1299细胞出现凋亡的形态学改变。[结论]菲律宾蛤仔酶解多肽能明显抑制H1299细胞的增殖并诱导细胞凋亡。

雷公藤红素诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡及其机制研究

目的:研究雷公藤红素对非小细胞肺癌H1299细胞形态、线粒体膜电位及凋亡的影响。方法:用AO/PI荧光染色实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞形态的影响;用线粒体膜电位实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞线粒体膜电位变化的影响;用RT-PCR及Western blot检测不同浓度的雷公藤红素对H1299细胞中XIAP、p53 mRNA和蛋白及NF-κB信号通路的影响。结果:雷公藤红素可剂量依赖性诱导H1299细胞形态及线粒体膜电位的变化,抑制XIAP mRNA和蛋白的表达,上调p53 mRNA和蛋白的表达,同时抑制NF-κB信号通路中IKKβ、IKKα、NF-κB p65的磷酸化水平。结论:雷公藤红素能通过上调p53 mRNA和蛋白的表达以及抑制NF-κB信号通路和XIAP mRNA和蛋白的表达来诱导H1299细胞发生凋亡,即通过线粒体途径和NF-κB信号通路起到抗肿瘤作用。

PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响

目的探讨PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响。方法选取肺癌患者82例,应用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒进行样本DNA提取,采用NanoDrop1000 spectrophotometer测定样本DNA浓度与纯度,所提取的DNA采用紫外分光光度仪进行浓度检测与质量评估。采用化学发光法检测外周血血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)]。扩增产物采用western blot法进行蛋白产物的定性和定量分析。结果PTPN12表达对肺癌病情的调控作用分析结果可见,在组织分化和病理分期更严重的患者中PTPN12-mRNA表达更低,且在随访生存期更低的患者中也可见表达更低,均有统计学意义;但PTPN12蛋白表达只在不同病理分期患者中检出差别有统计学意义,且同mRNA表达规律相一致;而在不同组织分化和预后患者间差别尚未见统计学意义,与样本量等因素限制有关。PTPN12基因在肺癌组织中突变38例,突变患者血清CEA高于野生型患者,CA125、CYFRA21-1低于野生型患者(P均<0.05)。同时,PTPN12低表达与NSCLC患者的放射敏感性密切相关,而且PTPN12基因下调能明显增加H1299细胞的放射敏感性。结论PTPN12低表达同肺癌患者的放射敏感性存在关联,PTPN12下调可以有效增加H1299细胞的放射敏感性,可以考虑作为提示患者的放射敏感性的靶点,并为靶向治疗联合放疗提供更多依据。

白藜芦醇联合野生型p53质粒诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡

目的实验以非小细胞肺癌H1299细胞(简称H1299细胞)为研究对象,主要探讨白藜芦醇联合野生型p53质粒对H1299细胞凋亡作用的影响以及进一步探讨其作用机制。方法在H1299细胞中导入野生型p53质粒,加入不同浓度的白藜芦醇,通过MTT法确定白藜芦醇联合野生型p53质粒的最佳作用浓度,并检测白藜芦醇联合野生型p53质粒对细胞增殖的影响;光镜下观察细胞形态学的变化;流式细胞术检测白藜芦醇联合野生型p53质粒对H1299细胞凋亡率的影响;RT-PCR实验方法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9的表达水平。结果白藜芦醇联合野生型p53质粒能明显抑制H1299细胞的增殖,诱导H1299细胞凋亡,明显抑制Bcl-2基因的表达水平,促进Bax、caspase3、caspase9基因的表达水平。结论白藜芦醇联合野生型p53质粒能够明显抑制H1299细胞的增殖,可能通过促凋亡基因Bax、凋亡蛋白酶Caspase3,Cas⁃pase9的表达,抑制抑凋亡基因Bcl-2的表达,从而激活细胞中线粒体介导的凋亡通路,诱导H1299细胞凋亡。