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异甘草素诱导NCI-H157细胞凋亡及对ERS相关基因表达的影响 被引量:4
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作者 刘丽 沈洪 +3 位作者 姜鹏君 陈劼 刘青 张旭 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期264-268,共5页
目的研究异甘草素对人非小细胞肺癌NCI-H157细胞增殖、凋亡及细胞内质网应激相关基因ATF4、DDIT3和TNFRSF10B表达的影响。方法体外培养NCI-H157细胞,给予异甘草素处理,MTT法检测不同浓度的异甘草素对NCI-H157细胞的增殖抑制率,流式细胞... 目的研究异甘草素对人非小细胞肺癌NCI-H157细胞增殖、凋亡及细胞内质网应激相关基因ATF4、DDIT3和TNFRSF10B表达的影响。方法体外培养NCI-H157细胞,给予异甘草素处理,MTT法检测不同浓度的异甘草素对NCI-H157细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测不同浓度异甘草素对肿瘤细胞的凋亡发生率,实时定量PCR检测NCI-H157细胞在不同浓度异甘草素处理后ATF4、DDIT3和TNFRSF10B基因mRNA的表达。结果在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人肺癌NCI-H157细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性。异甘草素能显著诱导NCI-H157细胞凋亡的发生,并上调ATF4、DDIT3和TNFRSF10B基因在细胞内的表达(P〈0.05-0.01)。结论异甘草素能够抑制人肺癌NCI-H157细胞的增殖,诱导凋亡发生,且与激活内质网应激反应有关。 展开更多
关键词 异甘草素 NCI-h157 增殖 凋亡 内质网应激
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RNAi抑制H157细胞Wnt5a表达 被引量:1
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作者 黄英 刘国祥 +3 位作者 熊玮 杨和平 章波 杨媛 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期325-327,共3页
目的构建抑制大鼠Wnt5a基因表达的重组质粒,达到抑制H157细胞Wnt5a表达的目的。方法根据大鼠Wnt5a的基因序列,设计合成含有发夹结构的2条寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至PAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染... 目的构建抑制大鼠Wnt5a基因表达的重组质粒,达到抑制H157细胞Wnt5a表达的目的。方法根据大鼠Wnt5a的基因序列,设计合成含有发夹结构的2条寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至PAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常H157细胞,并采用West-ern blot检测Wnt5a蛋白水平表达的变化。结果重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示Wnt5a干扰片断已克隆至PAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致。重组质粒转染H157细胞后经G418筛选,成功获得阳性克隆,Western blot结果显示Wnt5a的蛋白水平表达显著下降。结论成功构建Wnt5a基因RNA干扰表达质粒,明显抑制H157细胞中Wnt5a表达,这为深入研究该基因在非小细胞肺癌发生及侵袭转移中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 WNT5A RNAI h157 转染 表达
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Anti-miR-155反义寡核苷酸对人肺鳞癌H157细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 曹学武 安江洪 陈正堂 《西南国防医药》 CAS 2008年第3期322-324,共3页
目的:观察anti-miR-155反义寡核苷酸(AMOs)对肺鳞癌H157细胞增殖的影响。方法:将H157细胞分为对照组和AMOs处理组,AMOs处理组采用AMOs抑制H157细胞内miR-155的活性,液闪计数仪测定[3H]-TdR掺入量,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测... 目的:观察anti-miR-155反义寡核苷酸(AMOs)对肺鳞癌H157细胞增殖的影响。方法:将H157细胞分为对照组和AMOs处理组,AMOs处理组采用AMOs抑制H157细胞内miR-155的活性,液闪计数仪测定[3H]-TdR掺入量,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞周期。结果:与对照组相比,AMOs显著减少H157细胞[3H]-TdR掺入量(P<0.01),随着浓度从10 nmol/L逐渐增加至于100 nmol/L,H157细胞[3H]-TdR掺入量亦随之减少(P<0.01);AMOs显著抑制H157细胞的增殖(P<0.01),使G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:AMOs通过抑制H157细胞内高水平表达miR-155的活性,显著抑制H157细胞的增殖。 展开更多
关键词 h157 MIR-155 反义寡核苷酸 细胞增殖
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三氧化二砷在诱导非小细胞肺癌NCI-H157细胞凋亡过程中对Survivin基因表达Caspase-3的影响 被引量:2
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作者 鞠培新 石文君 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第19期1097-1100,共4页
目的:研究三氧化二砷(As2O3)在诱导非小细胞肺癌NCI-H157凋亡过程中对Survivin基因表达及Caspase-3的影响,探讨As2O3诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理研究。方法:首先对NCI-H157细胞培养和增殖测定,然后采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达;We... 目的:研究三氧化二砷(As2O3)在诱导非小细胞肺癌NCI-H157凋亡过程中对Survivin基因表达及Caspase-3的影响,探讨As2O3诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理研究。方法:首先对NCI-H157细胞培养和增殖测定,然后采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达;Western Blot检测Survivin及Caspase-3蛋白。结果:RT-PCR结果显示,10μmol/L As2O3作用于NCI-H157细胞12h,24h,48h同对照组相比,Survivin mRNA表达分别降至85.7%,59.4%,22.5%,处理72h后几乎检测不到Survivin mRNA的表达。Western Blot解析结果显示,Survivin蛋白表达在5μmol/L As2O3处理后分别下调至75.2%(12h),54.3%(24h),37.5%(48h)及20.3%(72h)。分别用不同浓度的As2O35~20μmol/L作用NCI-H157细胞24h,Survivin蛋白表达随着As2O3浓度的增加逐渐下降。As2O3作用12h之内只能检测到非激活状态32KD的proCaspase-3,处理24h后出现17KD的活性亚基,直至72h。结论:As2O3以时间、剂量依赖的方式抑制NCI-H157细胞增殖,诱导细胞凋亡过程中下调Survivin mRNA及蛋白表达,并活化Caspases-3,提示As2O3诱导的NCI-H157细胞凋亡机制可能与下调Survivin基因表达及激活Caspase-3活性有关。 展开更多
关键词 AS2O3 NCI-h157细胞 细胞凋亡 SURVIVIN CASPASE-3
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TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌
5
作者 艾鹏飞 王珊 +3 位作者 高辉明 王雁伟 庞艳荣 张萌 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期373-380,共8页
建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPC... 建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 多重实时定量PCR 大肠杆菌O157:H7 单增李斯特菌 蜡样芽孢杆菌
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基于紫胶红素的靶标有色化免疫层析试纸条联检大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌
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作者 刘坤 王英林 +1 位作者 黄志强 刘箐 《工业微生物》 CAS 2024年第3期104-110,共7页
为摆脱免疫层析试纸条对配对抗体的依赖,文章设计了一种新型靶标有色化免疫层析试纸条,使用紫胶红素和十二合水硫酸铝钾媒染剂,通过先媒后染的方法,实现了免疫层析试纸条的“可视化”。验证结果显示,该试纸条对大肠杆菌O157∶H7和沙门... 为摆脱免疫层析试纸条对配对抗体的依赖,文章设计了一种新型靶标有色化免疫层析试纸条,使用紫胶红素和十二合水硫酸铝钾媒染剂,通过先媒后染的方法,实现了免疫层析试纸条的“可视化”。验证结果显示,该试纸条对大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌的检测限均达到了106 CFU/mL;同时,与常见食源性致病菌间不存在交叉反应,在鸡胸肉、鸡蛋、牛奶等食品基质中能够在增菌9 h内检出。文章成功设计了一种操作简单、检测成本低,更易国产化的快速检测免疫层析试纸条,为后续免疫层析试纸条的设计提供了新思路。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 沙门氏菌 紫胶红素 靶标有色化 免疫层析试纸条
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Antibacterial mechanism of kojic acid and tea polyphenols against Escherichia coli O157:H7 through transcriptomic analysis 被引量:1
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作者 Yilin Lin Ruifei Wang +4 位作者 Xiaoqing Li Keren Agyekumwaa Addo Meimei Fang Yehui Zhang Yigang Yu 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2024年第2期736-747,共12页
Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity ag... Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity against E.coli O157:H7 than using either alone.This study aimed to explore responses underlying the antibacterial mechanisms of kojic acid and tea polyphenols from the gene level.The functional enrichment analysis by comparing kojic acid and tea polyphenols individually or synergistically against E.coli O157:H7 found that acid resistance systems in kojic acid were activated,and the cell membrane and genomic DNA were destructed in the cells,resulting in“oxygen starvation”.The oxidative stress response triggered by tea polyphenols inhibited both sulfur uptake and the synthesis of ATP,which affected the bacteria's life metabolic process.Interestingly,we found that kojic acid combined with tea polyphenols hindered the uptake of iron that played an essential role in the synthesis of DNA,respiration,tricarboxylic acid cycle.The results suggested that the iron uptake pathways may represent a novel approach for kojic acid and tea polyphenols synergistically against E.coli O157:H7 and provided a theoretical basis for bacterial pathogen control in the food industry. 展开更多
关键词 Kojic acid Tea polyphenols Antibacterial mechanism Escherichia coli O157:H7 RNA-SEQ
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大肠杆菌快速检测系统设计与实现
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作者 吴学斌 庞春颖 +2 位作者 魏佳淇 郭云轩 顾峰 《长春理工大学学报(自然科学版)》 2024年第1期112-118,共7页
食品安全是民生问题之一,与人们的生活密不可分。大肠杆菌O157:H7是一种典型的致病菌,传统的大肠杆菌检测方式比较耗时且需专业的操作人员,如何能进行大范围、快速、易操作的大肠杆菌检测是亟待解决的问题。通过差分脉冲伏安法检测大肠... 食品安全是民生问题之一,与人们的生活密不可分。大肠杆菌O157:H7是一种典型的致病菌,传统的大肠杆菌检测方式比较耗时且需专业的操作人员,如何能进行大范围、快速、易操作的大肠杆菌检测是亟待解决的问题。通过差分脉冲伏安法检测大肠杆菌浓度与电流的关系,设计电化学横向流动免疫分析平台,提出基于电化学和嵌入式单片机技术的快速检测方法。经测试,该系统的检测误差小于4.5%,系统重复误差小于3.7%,最低检测浓度达到102 CFU/mL,检测时间为10 min,可有效用于大肠杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 电化学检测 生物传感器 差分脉冲伏安法 STM32
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不同提取及扩增方法检测大肠杆菌DNA的性能比较
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作者 余小妹 钱纯亘 +4 位作者 聂立波 汤建新 吴力强 黄钊 易辉 《湘潭大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第2期110-122,共13页
大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7... 大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7基因组DNA,考察了环介导等温扩增(LAMP)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)扩增法对所提取DNA的检测效果,并建立最佳的核酸快速提取样品预处理方法.结果表明,以碱加热裂解预处理提取的大肠杆菌O157∶H7基因组DNA为检测样本时,LAMP扩增及qPCR扩增法的检测性能最好,检出限达到10^(1)CFU/mL,与常规商品化试剂盒提取所得菌液基因组DNA的检测性能一致.所建立的碱加热裂解样品预处理方法耗时短、成本低,无须进行复杂的核酸提取,操作简单,可用于大肠杆菌O157∶H7的快速检测. 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 LAMP qPCR 碱加热裂解法 核酸提取
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辣木籽多糖抑菌作用及对牛肉保鲜效果研究
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作者 严亮 朱玉润 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第1期24-32,共9页
为探究辣木籽多糖的抑菌作用及保鲜效果,以大肠杆菌O157∶H7作为模型微生物研究其抑菌作用和以冷鲜牛肉作为原材料研究其保鲜效果。结果表明:辣木籽多糖对大肠杆菌O157∶H7有较好的抑菌作用,其抑菌机制是通过破坏大肠杆菌O157∶H7细胞... 为探究辣木籽多糖的抑菌作用及保鲜效果,以大肠杆菌O157∶H7作为模型微生物研究其抑菌作用和以冷鲜牛肉作为原材料研究其保鲜效果。结果表明:辣木籽多糖对大肠杆菌O157∶H7有较好的抑菌作用,其抑菌机制是通过破坏大肠杆菌O157∶H7细胞壁和细胞膜的结构,造成孔洞塌陷,使细胞的疏水性和通透性增大,使胞内物质(如DNA、电解质、酶类等)泄露从而导致其生长受阻导致死亡。辣木籽多糖对冷鲜牛肉具有一定的保鲜效果,其可以延缓牛肉的pH升高、抑制TVB-N和TBA的生成、有效抑制微生物的生长繁殖,保护牛肉的色泽以达到保鲜的目的。辣木籽多糖可以作为一种天然的抑菌剂及保鲜剂,应用于食品行业中。 展开更多
关键词 辣木籽 多糖 大肠杆菌O157∶H7 抑菌 牛肉 保鲜
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食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测技术研究进展
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作者 周炳武 于泽 +5 位作者 闫兆伦 刘雨涵 侯嘉欣 刘晓倩 谢婧宜 刘晔 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第1期303-313,共11页
近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全... 近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全问题有着重要的意义,是预防和控制食源性疾病传播的重要技术,为此本文对E.coli O157∶H7的常规检测方法、免疫学法、分子生物学法和其他方法进行论述,介绍了这些方法的优缺点,对各种方法进行了整体比较,以期为有关工作者在选择检测方法或研发新方法提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 大肠杆菌O157∶H7 食品安全 检测方法
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多重重组酶介导等温扩增技术检测食品中3种食源性致病菌
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作者 秦爱 李根容 +3 位作者 邓方进 张明娟 周朝旭 肖昭竞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第5期97-104,共8页
目的 建立快速、灵敏的多重重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)同时检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。方法 根据大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因、沙门氏菌的invA基因以及金黄色葡... 目的 建立快速、灵敏的多重重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)同时检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。方法 根据大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因、沙门氏菌的invA基因以及金黄色葡萄球菌的nuc基因的序列保守区域设计RAA特异性引物,筛选出最优的引物组合并优化各项实验条件;通过标准菌株验证方法特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,验证方法在实际食品样本中的检测能力。结果 多重RAA方法最佳扩增温度为37℃,反应时间为50min;方法特异性良好,仅对目标菌株存在特异性扩增条带,与其他常见食源性致病菌无交叉反应;方法对基因组DNA的检测灵敏度为0.10 ng/μL;对经过简单增菌的人工污染牛奶样本和牛肉干样本中目标菌株的检出限为100 CFU/mL。结论 本研究建立的多重RAA扩增方法具有特异性好、灵敏度高、检测通量高等优势,适用于多种场景下食品样本中3种食源性致病菌的快速检测。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增技术 大肠埃希氏菌O157:H7 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌
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多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌
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作者 孙新城 李爽 +4 位作者 李侠颖 周杰 曹亚新 王宏伟 张晓根 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第9期37-43,共7页
目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大... 目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单增李斯特菌 大肠杆菌O157:H7 多重荧光定量聚合酶链反应法
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不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/HM能力验证结果比较与分析
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作者 燕妮 段鹏 杨雅珺 《甘肃科技》 2024年第1期70-73,共4页
为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃... 为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)中的第一法和实时荧光PCR方法,分别对能力验证样品进行检测。结果显示,样品23-G520中未检出大肠埃希氏菌O157∶H7;样品23-F568中检出大肠埃希氏菌O157∶H7,结果反馈为满意。在能力验证实验中,不同检测方法同时使用、综合判断,能有效提高检测能力和结果的准确性。 展开更多
关键词 能力验证 大肠埃希氏菌O157:H7 实时荧光PCR
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一种可快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器的制备与应用
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作者 王晓颖 施锦辉 +3 位作者 王金娟 戴晗祎 郭骁驹 王晓惠 《现代食品》 2024年第3期173-177,共5页
大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器... 大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器,检出限达7.5×10^(3) CFU·mL^(-1)。该传感器可同时检测3个样品,具有特异性好、操作简便和环境友好的特点,可应用于大量样品中大肠杆菌O157:H7的快速筛查。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 长余辉探针 纸基传感器 快速筛查
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基于dsDNA-CuNCs的荧光ELISA检测牛奶中的E.coli O157:H7 被引量:1
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作者 曹文凯 山珊 +3 位作者 刘道峰 彭娟 邢克宇 赖卫华 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第9期38-43,94,共7页
目的:建立了一种灵敏检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的新型荧光酶联免疫吸附方法。方法:以碱性磷酸酶水解焦磷酸盐-Cu^(2+)配位复合物,释放出Cu^(2+)形成铜纳米簇作为信号报告探针,通过对关键因素Cu^(2+)浓度、焦磷酸盐浓度、DNA模板的浓度... 目的:建立了一种灵敏检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的新型荧光酶联免疫吸附方法。方法:以碱性磷酸酶水解焦磷酸盐-Cu^(2+)配位复合物,释放出Cu^(2+)形成铜纳米簇作为信号报告探针,通过对关键因素Cu^(2+)浓度、焦磷酸盐浓度、DNA模板的浓度和长度进行优化。结果:在最优条件下,大肠杆菌O157:H7的菌数为5×10^(4)~1×10^(8)CFU/mL时,与荧光信号值有较好的线性关系(R^(2)=0.9808),最低检出限为2.4×10^(4)CFU/mL。结论:该方法成功地应用于低脂牛奶和脱脂牛奶样本中大肠杆菌O157:H7的测定,平均回收率为92.2%~10^(8).5%,相对标准偏差为4.9%~10.4%。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附 铜纳米簇 大肠杆菌O157:H7 检测
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纳米金与纳米金花标记的免疫层析法的建立及快速检测大肠杆菌O157∶H7的比较研究
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作者 王英林 吴娅芳 +3 位作者 刘程 黄志强 刘坤 刘箐 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第22期287-294,共8页
为实现大肠杆菌O157∶H7早期现场的快速检测,该试验通过化学还原法与介导生长法制备了AuNPs与AuNFs作为标记探针,建立2种用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测的免疫层析试纸条,并对2种试纸条的的灵敏度、特异性和准确性进行检测。结果显示... 为实现大肠杆菌O157∶H7早期现场的快速检测,该试验通过化学还原法与介导生长法制备了AuNPs与AuNFs作为标记探针,建立2种用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测的免疫层析试纸条,并对2种试纸条的的灵敏度、特异性和准确性进行检测。结果显示,所建立的2种免疫层析方法均可在15 min内检出食品中的大肠杆菌O157∶H7,其中AuNP试纸条最低检出限为3.2×10^(5)CFU/mL,AuNFs试纸条最低检出限为3.2×10^(4)CFU/mL,与单增李斯特菌、沙门氏菌、坂崎肠杆菌等常见食源性致病菌没有交叉反应。对人工污染果冻、牛奶和牛肉等样品AuNPs试纸条分别在前增菌5、6、5 h时检出,AuNFs试纸条分别在前增菌5、5、4 h时检出,且不受食品复杂机制的影响。结果表明,所建立的2种免疫层析试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,适用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 新型胶体金 纳米金花 快速检测
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大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制
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作者 王晓芳 冯鑫 +4 位作者 陈艳 霍冬霞 白德奎 金涌 邹明强 《生物化工》 CAS 2023年第6期108-112,共5页
本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快... 本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 快速检测 胶体金 免疫层析试纸条
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基于抗体-适配体夹心生物传感器检测大肠杆菌O157:H7
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作者 侯炜辰 叶柯 +4 位作者 李洁 张洋子 许文涛 朱龙佼 李相阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期81-89,共9页
大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是一种重要的与公共卫生相关的食源性病原体。抗体分子是体液免疫应答中最重要的效应分子,具有多种生物学活性,最主要的生物学功能是与相应抗原特异性结合。适配体是体外合成的较短DNA序列,... 大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是一种重要的与公共卫生相关的食源性病原体。抗体分子是体液免疫应答中最重要的效应分子,具有多种生物学活性,最主要的生物学功能是与相应抗原特异性结合。适配体是体外合成的较短DNA序列,可通过识别特定区域和靶标特异性结合。利用抗体和适配体的特异性识别功能及免疫磁珠的捕获作用和磁分离,并通过多克隆抗体和裁剪得到的适配体搭建生物传感器,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)可以实现对靶标在(8×10^(3))-(8×10^(6))CFU/mL范围内的定量检测,检测限为800 CFU/mL。 展开更多
关键词 多克隆抗体 适配体 裁剪 免疫磁珠 大肠杆菌O157:H7
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基于实时荧光聚合酶链式反应快速检测食源性大肠埃希氏菌O157:H 被引量:2
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作者 任宝红 付燕峰 +5 位作者 娄亚坤 苗银萍 曾小宇 杨楠 姬建生 郭瑞 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第2期264-270,共7页
目的 建立一种快速、灵敏、特异、高效的食源性大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法 针对大肠埃希氏菌O157:H7型的O抗原特异基因rfbE保守区域设计特异性引物和探针,合成基因片... 目的 建立一种快速、灵敏、特异、高效的食源性大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法 针对大肠埃希氏菌O157:H7型的O抗原特异基因rfbE保守区域设计特异性引物和探针,合成基因片段绘制标准曲线,在菌液基因组DNA和质粒双层面调试优化以完成方法的初步建立。其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性等进行全面的质量评估验证。结果 该方法特异性100%;基因组DNA检测敏感性为7.11×10^(2)fg/μL;纯培养物水平检测敏感性为1.0×10^(2)CFU/mL;重复性变异系数在0.10%~1.00%之间;标准曲线相关系数r^(2)为0.9994。结论 成功建立了一种性能良好的大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光探针PCR快速检测方法,该方法具有灵敏度高、特异性强、扩增时间短,仅为35 min的特点,可用于疑似大肠埃希氏菌O157:H7型污染样品的快速诊断检测。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌O157:H7 rfbE保守区域 实时荧光聚合酶链式反应技术 探针 快速扩增
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