山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖

目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响,用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达,用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理,用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况,用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力(P<0.05),山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加(P<0.05)、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调(均P<0.05)、P62表达明显下调(P<0.05),山柰酚可明显抑制NCI-H1650细胞中Met mRNA和蛋白的表达(均P<0.05)、抑制p-PI3K p85、PI3K p85、p-Akt和p-mTOR蛋白表达(均P<0.05)。山柰酚抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)和影响其体内自噬、Met/PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:山柰酚通过影响Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导NSCLC NCI-H1650细胞发生自噬,进而抑制其增殖能力。

miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移

目的:探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelieal-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制。方法:收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、A549、H1975、PC9和人支气管上皮细胞BEAS-2B,用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用miR-142-5p模拟物(mimics)、miR-阴性对照质粒(miR-NC)转染H1650细胞后,用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p对靶基因的调控作用,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及EMT相关蛋白的表达水平。结果:肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞(均P<0.01);107例肺腺癌组织中,61例(57.01%)低表达miR-142-5p,其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关(均P<0.01)。转染miR-142-5p模拟物后,H1650细胞中miR-142-5p高表达,细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.05或P<0.01)。生物信息学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因,经双荧光素酶报告基因验证,miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水平,显著提高E-cadherin表达,降低N-cadherin和Snail的表达水平(均P<0.01)。结论:miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表达状态,其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。

扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌H1650细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究扶正抗癌方联合吉非替尼对人非小细胞肺癌细胞株H1650裸鼠移植瘤的抑制作用及其对细胞增殖的影响。方法在裸鼠上接种对吉非替尼耐药的细胞株(H1650细胞株),造模成功后随机分对照组、吉非替尼组、中药低剂量组、中药高剂量组、吉非替尼联合中药低剂量组、吉非替尼联合中药高剂量组,每组10只。各组处理依次为:生理盐水0.2 m L、吉非替尼50 mg/(kg·d)、扶正抗癌方62 mg/(kg·d)、扶正抗癌方124 mg/(kg·d)、吉非替尼50 mg/(kg·d)+扶正抗癌方62 mg/(kg·d)、吉非替尼50 mg/(kg·d)+扶正抗癌方124 mg/(kg·d)。胃内给药15 d后观察不同组别的裸鼠肿瘤生长情况、抑瘤率,用Ki-67免疫组化分析对细胞增殖的影响。结果与对照组比较,吉非替尼联合中药低剂量组及中药高剂量组的瘤体体积差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,吉非替尼联合中药高剂量组的瘤重明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞增殖率依次为对照组(63.94±8.19)%、吉非替尼组(57.11±7.58)%、中药低剂量组(54.39±8.85)%、中药高剂量组(55.94±12.26)%、吉非替尼联合中药低剂量组(50.61±8.81)%及吉非替尼联合中药高剂量组(48.72±11.63)%,细胞增殖呈下降趋势,与对照组比较,各用药组差异有统计学意义。与吉非替尼组比较,吉非替尼联合中药低剂量组、吉非替尼联合中药高剂量组的细胞增殖率差异有统计学意义(P<0.05);与中药高剂量组比较,吉非替尼联合中药高剂量组细胞增殖率差异有统计学意义(P=0.029)。结论吉非替尼联合扶正抗癌方对裸鼠非小细胞肺癌H1650移植瘤的抑制优于吉非替尼或扶正抗癌方;联合用药对H1650移植瘤细胞增殖的抑制优于吉非替尼或扶正抗癌方单药治疗,两者有协同作用,吉非替尼联合中药高剂量组效果最佳。

BRCA1通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌H1650细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨人乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H1650细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用WB法和q PCR法检测NSCLC细胞系A549、H1299、H1650和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BRCA1 m RNA和蛋白的表达水平。在H1650细胞中构建稳定BRCA1过表达细胞株(LV-BRCA1),实验分为空白对照组(NC)、阴性对照组(LV-BRCA1-NC)、实验组(LV-BRCA1)和抑制剂组(LV-BRCA1+XAV-939)。用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,WB法检测细胞中BRCA1、cyclin D1、β-catenin、c-Myc和Cox2蛋白的表达水平。结果:NSCLC细胞中BRCA1 m RNA和蛋白的表达水平均显著高于BEAS-2B细胞(均P<0.01)。上调BRCA1可显著提高H1650细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),上调细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);XAV-939可显著下调过表达BRCA1细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),并降低细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:BRCA1通过激活Wnt/β-catenin通路促进NSCLC H1650细胞的增殖、迁移与侵袭,其有望成为NSCLC诊断标志物和治疗靶标。

莪术醇诱导H1650肺癌细胞凋亡的机制探讨

目的探究莪术醇对人肺癌H1650细胞增殖抑制与凋亡诱导的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法、Hoechst33258染色、流式细胞术和Western Blot检测莪术醇诱导H1650细胞凋亡的作用及其分子机制。结果 MTT结果显示莪术醇对H1650细胞有明显的增殖抑制作用;Hoechst33258染色后可观察到莪术醇处理后细胞出现"凋亡小体"的特征;流式细胞术检测结果证实了莪术醇能明显的引起H1650细胞凋亡并增加细胞内活性氧的产生;这可能与莪术醇下调JAK2-STAT3信号通路蛋白表达有关。结论莪术醇具有抑制H1650细胞增殖和诱导其凋亡的作用。

阿帕替尼对肺腺癌H1650细胞增殖、活性氧水平和凋亡的影响

目的:研究阿帕替尼对肺腺癌H1650细胞增殖、活性氧(ROS)水平和凋亡的影响。方法:采用不同浓度(0. 000、0. 125、0. 250、0. 500、1. 000、2. 000、4. 000、8. 000、16. 000、32. 000、64. 000μmol/L)的阿帕替尼作用于肺腺癌H1650细胞72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验观察0(对照)、2、4、8μmol/L阿帕替尼作用9 d后H1650细胞的克隆形成率; 0(对照)、8、16、32μmol/L阿帕替尼处理后,在流式细胞仪上检测H1650细胞内的ROS水平和凋亡情况,采用Western blot方法检测H1650细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:阿帕替尼作用后H1650细胞的增殖抑制率升高,组间两两比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。与对照组相比,阿帕替尼组H1650细胞克隆形成率降低,凋亡率、细胞内ROS水平、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P <0. 05)。结论:阿帕替尼可抑制H1650细胞增殖,增加细胞内ROS水平,促进凋亡。

NF-κB亚单位p50/p65激活促进肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药

目的探究NF-κB经典通路激活与人肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药的内在联系。方法选择肺腺癌HCC827和H1650亲代细胞株,吉非替尼连续处理60 d,检测细胞株生长情况和各细胞株595nm吸光度,确定各细胞株细胞存活率和H1650亲代细胞被诱导成H1650耐药细胞株。Western blot检测各细胞株P-IκBα、NF-κB P-p50和P-p65表达量,Image J灰度仪计算出胞浆和胞核P-p50和P-p65与内参蛋白灰度比值,比较吉非替尼和吉非替尼加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合用药状态下,各细胞株细胞存活率和P-IκB、P-p50和P-p65的表达。结果在无吉非替尼和吉非替尼加PDTC药物干预下,H1650耐药细胞PIκBα表达增加,胞浆和胞核P-p50和P-p65表达,H1650耐药细胞株>H1650亲本细胞株>吉非替尼敏感HCC827细胞株(P<0.05,P<0.01);单独使用吉非替尼干预,H1650耐药细胞株细胞抑制率较H1650亲本细胞株和HCC827细胞株降低(P<0.05,P<0.01),H1650耐药细胞株P-p50和P-p65表达较其他两类细胞株升高(P<0.05);与无吉非替尼干预比较,H1650亲代和耐药细胞P-p50和P-p65均有显著降低(P<0.05,P<0.01);吉非替尼联合PDTC干预,显示H1650亲代和耐药细胞存活率、胞浆和胞核Pp50和P-p65表达均较吉非替尼组降低(P<0.01,P<0.01)。结论 NF-κB经典传导通路激活是H1650亲代细胞残存和转化为吉非替尼耐药细胞的主要因素之一,吉非替尼联合PDTC用药可抑制P-IκBα生成和P-p50、P-p65的激活,从而降低H1650残存细胞生存率和耐药细胞的产生。

黄连碱经活性氧中介物-线粒体途径诱导肺癌NCI-H1650细胞凋亡

目的研究黄连碱对人非小细胞肺癌NCI-H1650细胞增殖的影响和其用于人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。方法 MTT法分析黄连碱处理对NCI-H1650细胞增殖的影响,Western blot检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞色素C的蛋白表达水平。流式细胞术分析Annexin V/PI标记的细胞凋亡。荧光酶标仪分析细胞内活性氧中介物水平。结果黄连碱能够以时间和剂量依赖性的方式显著抑制NCIH1650细胞增殖。黄连碱处理24 h诱导NCI-H1650细胞内活性氧中介物水平增加和细胞凋亡,同时细胞内Bax基因表达上调、Bcl-2基因表达下调,并发生细胞色素C从线粒体向细胞浆的转移。流式细胞术检测发现黄连碱处理导致NCI-H1650细胞凋亡发生。使用活性氧抑制物N-乙酰半胱氨酸则可显著抵抗黄连碱对NCI-H1650细胞的增殖抑制和细胞凋亡。结论黄连碱通过诱导活性氧中介物水平增加激发NCI-H1650细胞发生线粒体途径介导的细胞凋亡。黄连碱具有用于抗人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。

5-aza-CdR增强吉非替尼对人非小细胞肺癌细胞株H1650敏感性机制的研究

目的:探讨EGFR基因启动子甲基化水平与人非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼敏感性之间的关系。方法:5-aza-CdR和吉非替尼单独或联合用药作用于H1650细胞株后,应用甲基化特异性PCR法检测EGFR基因启动子区甲基化状态;CCK-8法检测细胞增殖率;流式细胞仪技术检测细胞凋亡率变化;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测EGFR蛋白和mRNA的表达情况。结果:5-aza-CdR可去除H1650细胞EGFR基因启动子区甲基化;CCK-8法检测结果显示,H1650对吉非替尼的敏感性较差,5-aza-CdR去甲基化后联合运用吉非替尼处理72h,联合用药组IC50为(2.93±0.95)μmol/L,与吉非替尼组(14.53±1.13)μmol/L、5-aza-CdR组(4.91±1.42)μmol/L比较显著降低,P<0.05;流式细胞仪技术结果显示,联合用药组细胞凋亡率为(83.62±4.3)%,与吉非替尼组(20.29±2.9)%、5-aza-CdR组(25.73±7.5)%比较,差异有统计学意义,P<0.05;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法结果显示,吉非替尼与5-aza-CdR联合用药干预72h后细胞EGFR蛋白和mRNA表达显著下降,与单药组相比,具有统计学意义,P<0.05。结论:EGFR基因启动子区甲基化可能是非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼获得性耐药的机制之一。

黄腐酚对顺铂诱导H1650细胞凋亡的影响

目的以顺铂为主的非小细胞肺癌化疗方案不断更新,目前研究旨在寻求疗效的放大及毒副作用的缩小。黄腐酚被证明有抗癌及保护正常细胞的作用。本实验主要探讨黄腐酚的不同给药方式对顺铂诱导人非小细胞肺癌细胞株H1650凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测黄腐酚、顺铂单用及先用低浓度黄腐酚干预,后补入顺铂对H1650细胞增殖的影响;使用流式细胞术分别分析先用黄腐酚后用顺铂、先用顺铂再补入黄腐酚2种干预方式对H1650细胞凋亡率或存活率的影响。结果 CCK-8检测结果显示,2μmol/L黄腐酚干预H1650细胞48h后,继续给予20、40和80μmol/L顺铂干预24h,抑制细胞增殖率分别为(13.16±1.06)%、(19.14±1.67)%和(28.17±2.79)%,均低于同浓度顺铂单纯干预24h组的(18.96±3.02)%、(23.28±1.43)%和(39.79±3.44)%,P<0.05。流式细胞术检测结果显示,10、20和40μmol/L顺铂干预细胞24h后,继续给予7[(85.66±3.19)%、(74.62±2.98)%和(59.55±2.70)%]或14μmol/L[(82.04±2.88)%、(76.50±3.11)%和(61.76±3.01)%]黄腐酚干预24h,其细胞存活率明显高于同浓度顺铂单纯干预48h组的(72.60±2.69)%、(56.98±3.80)%和(44.15±2.01)%,P<0.05。3μmol/L黄腐酚干预细胞24h,弃培养液,更换10、20和40μmol/L顺铂再干预24h,其细胞凋亡率分别为(29.79±3.78)%、(30.53±3.89)%和(39.48±4.98)%,明显高于顺铂单纯干预24h组的(17.21±3.01)%、(14.53±2.99)%和(18.88±4.20)%,P<0.05。结论黄腐酚直接有效保护顺铂对H1650细胞的杀伤,但低浓度黄腐酚的前期干预间接提高了顺铂对H1650细胞的凋亡率。

顺铂诱导肺腺癌H1650细胞线粒体氧化应激损伤的实验研究

目的:研究顺铂诱导肺腺癌H1650细胞氧化应激致线粒体功能损伤。方法:用不同剂量的顺铂(0、0.5、1.0、2.0μg/mL)处理肺腺癌H1650细胞后,分别采用荧光探针DCFH-DA和JC-1检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,荧光素酶测定细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)浓度。结果:顺铂处理后,H1650细胞内的ROS含量在5 min时达到最高水平,之后逐渐下降,对照组(培养液不加顺铂)内的ROS含量没有变化。不同浓度顺铂处理细胞24 h后,随着顺铂浓度的增加,细胞的绿色荧光强度逐步增加,红色荧光强度逐步减弱,表明细胞内MMP水平随顺铂浓度的增加而降低。ATP含量测定显示,随着顺铂浓度增加,ATP含量逐步减少。结论:顺铂通过诱导肺腺癌H1650细胞产生ROS导致氧化应激,使MMP降低,ATP含量减少,线粒体功能受损,细胞能量供应受限而发挥抗肿瘤作用。

黄腐酚诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的初步研究

目的探索黄腐酚对人非小细胞肺癌细胞株A549与H1650凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测黄腐酚对A549与H1650细胞增殖的影响;流式细胞术分析黄腐酚对两种细胞凋亡的影响;Western Blot法检测两种细胞被不同浓度黄腐酚干预后细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-xl、pro-caspase-3的表达。结果黄腐酚能有效抑制A549与H1650细胞的增殖,其抑制强度与浓度呈正相关,对H1650细胞有更好的抑制作用;两种细胞的凋亡率随黄腐酚浓度的增大而上升,5μmol·L-1诱发的凋亡率与同浓度顺铂无差异(P>0.05);两种细胞中凋亡相关蛋白的表达与黄腐酚浓度相关。结论黄腐酚可能通过调控Bcl-xl、Bax、Caspase-3及其相关基因使非小细胞肺癌细胞发生凋亡。

新型CRM1抑制剂S109通过阻断核输出抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的:研究新型染色体区域稳定蛋白1(chromosome region maintenance 1,CRM1)抑制剂S109对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制。方法:S109作用于非小细胞肺癌细胞株H1975和H1650,以CCK-8法检测其对细胞生长的影响,以Ed U法检测细胞中对细胞增殖的影响,以集落形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响,以流式细胞术检测其对细胞周期的影响,以免疫荧光法检测对核输出标志蛋白Ran BP1细胞内定位的影响,以Western blotting检测对细胞中CRM1和Cyclin D1蛋白表达的影响。结果:S109(0.04、0.2、1、5、25和50μmol/L)可以剂量依赖方式显著抑制非小细胞肺癌H1975和H1650细胞生长(IC50值分别为1.4和1.2μmol/L);2和4μmol/L的S109均可以显著抑制非小细胞肺癌增殖[(51.3±2.8)%、(23.2±2.1)%vs(100±1.2)%,P<0.01]和克隆形成[(43.6±3.2)%、(26.8±2.8)%vs(100±1.4)%,P<0.01],并使细胞阻滞在G1期(G1期细胞数量由50.5%增加至74.9%)。S109可以特异性抑制核质转运标志蛋白Ran BP1的核输出,并诱导CRM1蛋白降解。结论:S109通过特异性抑制CRM1功能阻断核输出,从而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并阻滞细胞周期。

扶正抗癌方通过调控Bcl-2家族蛋白促肺癌细胞凋亡

【目的】探讨中药复方扶正抗癌方促非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的机制。【方法】以高效液相色谱(HPLC)法检测扶正抗癌方的稳定性。以人NSCLC细胞株H1650、A549为研究对象,采用流式细胞术检测不同剂量(0、0.5、1.0、1.5 mg/mL)扶正抗癌方处理的H1650、A549细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测不同剂量(0、0.5、1.0、1.5 mg/mL)扶正抗癌方处理的H1650、A549细胞中抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1的蛋白表达水平。【结果】扶正抗癌方可明显增加H1650、A549细胞凋亡率,抑制Bcl-2、Mcl-1的蛋白表达水平,均呈剂量依赖性。【结论】扶正抗癌方可通过调控Bcl-2家族蛋白表达促进非小细胞肺癌细胞凋亡。

Babcock双调风旋流煤粉燃烧器在1650t/h锅炉低NO_X燃烧试验研究

为实现低NOX燃烧,在配置Babcock双调风煤粉旋流燃烧器的1650t/h锅炉进行了NOX生成与排放控制燃烧试验。针对试验情况,分析燃烧中影响NOX生成浓度的主要因素。试验结果表明:这种燃烧器通过合理调整内、外二次风挡板开度,可实现低NOX燃烧。

1650t/h锅炉水冷壁爆管原因分析

针对天津国华盘山发电有限公司 165 0t/h锅炉水冷壁超温爆管问题进行了分析 。