肤鲜洗剂通过T细胞介导的免疫平衡对慢性皮炎湿疹小鼠H1R、PAR-2/TRPV1痒信号通路的调控作用

目的探讨辅助性T淋巴细胞1(Th1)/辅助性T淋巴细胞2(Th2)免疫平衡在组胺受体1(histamine receptor 1,H1R)、蛋白酶激活受体2(protease activated receptor 2,PAR-2)/瞬时电位V型1受体(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1)痒信号通路信号传导中的作用及肤鲜洗剂的干预机制。方法采用BALB/c小鼠60只,适应性喂养3 d后随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组,模型对照组,肤鲜洗剂高、中、低剂量组(36,12,4 mg·cm^(−2)),阳性药物对照组(1 mg·cm^(−2)),除空白对照组外,其余各组均采用7%和0.5%2,4-二硝基氯苯丙酮橄榄油溶液多次激发致敏,空白组小鼠腹部及耳部均涂以丙酮溶液对照。激发后24 h开始用药,每天给药2次,连续10 d。测定小鼠耳肿胀度,进行耳变应反应评分,记录搔抓指数,计算小鼠脾脏指数,HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,采用ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-31(interleukin-31,IL-31)水平,实时荧光定量PCR检测上述免疫因子的mRNA水平,免疫组化法检测H1R、PAR-2、TRPV1的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠耳厚度、耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平显著升高(P<0.01),H1R、PAR-2、TRPV1含量明显增加(P<0.01),并出现明显的慢性皮炎湿疹样病理改变。与模型对照组比较,肤鲜洗剂组可有效减轻小鼠的耳廓肿胀程度、降低耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数,TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平明显降低(P<0.01);肤鲜洗剂高剂量组、肤鲜洗剂中剂量组、阳性药物对照组H1R含量明显减少(P<0.01);肤鲜洗剂各剂量组、阳性药物对照组PAR-2、TRPV1含量明显减少(P<0.01)。结论肤鲜洗剂通过调节Th1/Th2免疫平衡,下调特征性免疫因子TNF-α、IL-1β、IL-31,干预痒信号通路H1R、PAR-2/TRPV1传导,从而实现抗瘙痒和抑制炎症反应,达到治疗慢性皮炎湿疹的目的。

低分子肝素钠联合醋酸地塞米松基于PAR-2/TRPV1信号通路治疗小鼠瘙痒模型的有效性

目的基于蛋白酶激活受体2(PAR-2)/瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)信号通路探讨低分子肝素钠联合醋酸地塞米松治疗小鼠瘙痒模型的有效性。方法选取6周龄C57小鼠48只,采用随机数字表法将其中24只制成干皮症(AEW)慢性瘙痒小鼠模型,剩余24只制成DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型。将AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型均按照随机数字表法分为模型对照组、地塞米松组、肝素组、联合用药组,每组6只。模型对照组仅在小鼠脱毛部位给予0.9%氯化钠溶液;地塞米松组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏;肝素组在小鼠脱毛部位涂抹低分子肝素钠软膏;联合用药组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏、低分子肝素钠软膏。各组小鼠均持续干预7 d。比较各组小鼠干预前、干预7 d后瘙痒次数及PAR-2、TRPV1蛋白表达量。结果在AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,干预7 d后,联合用药组、肝素组、地塞米松组小鼠瘙痒次数均少于模型对照组,且联合用药组小鼠瘙痒次数少于肝素组、地塞米松组(P<0.05)。干预7 d后,在AEW慢性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05);地塞米松组、肝素组、联合用药组PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。干预7 d后,在DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1、PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。结论低分子肝素钠软膏可通过阻断PAR-2/TRPV1信号通路改善瘙痒症状,将其与醋酸地塞米松联合治疗对该通路的抑制效果更加显著。

雷公藤多苷对湿疹大鼠皮损的预防作用及机制

目的观察雷公藤多苷对湿疹大鼠皮损的预防作用,并探讨其作用机制与组胺受体H1(H1R)/瞬时感受器电位受体1(TRPV1)通路、蛋白酶激活受体2(PAR-2)/TRPV1通路及丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)通路的关系。方法取健康雄性大鼠50只,随机分为正常组、模型组和雷公藤多苷低、中、高剂量组,每组各10只。正常组正常饲养;模型组和雷公藤多苷低、中、高剂量组采用二硝基氯苯(DNCB)诱导建立湿疹模型,将大鼠腹部及背部脱毛,在腹部皮肤涂抹DNCB-丙酮橄榄油溶液进行致敏,5 d后在背部皮肤涂抹0.5%DNCB-丙酮橄榄油溶液进行激发,在右耳内外侧耳面涂抹1%DNCB-丙酮橄榄油溶液进行激发。于实验第3天开始给药,雷公藤多苷低、中、高剂量组分别给予4.5、9、18 mg/kg雷公藤多苷溶液灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续21 d。末次给药24 h后,观察大鼠背部皮肤外观情况;处死大鼠,沿耳基线剪下双耳,用打孔器在左右耳中部取圆形耳片,称取耳片质量,计算耳肿胀度和耳肿胀抑制率;取背部皮肤组织,采用HE染色法进行组织形态理学观察,采用免疫组化法检测组织中H1R、PAR-2、TRPV1蛋白水平,采用Western blotting法检测组织中p38 MAPK、p-p38MAPK蛋白的相对表达量。结果与正常组比较,模型组耳肿胀度增加(P <0.05);与模型组比较,雷公藤多苷低、中、高剂量组耳肿胀度减少(P均<0.05);与雷公藤多苷低剂量组比较,雷公藤多苷中、高剂量组耳肿胀度减少,耳肿胀抑制率增加(P均<0.05)。与正常组比较,模型组背部皮肤出现湿疹病理变化;与模型组比较,雷公藤多苷低、中、高剂量组背部皮肤湿疹病变程度减轻。与正常组比较,模型组皮损组织中H1R、PAR-2、TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平升高(P均<0.05);与模型组比较,雷公藤多苷中、高剂量组皮损组织中H1R、PAR-2、TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P均<0.05);与雷公藤多苷低剂量组比较,雷公藤多苷高剂量组皮损组织中H1R、PAR-2蛋白水平升高(P均<0.05),雷公藤多苷中剂量组TRPV1蛋白水平升高(P <0.05),雷公藤多苷中、高剂量组皮损组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P均<0.05)。结论雷公藤多苷对湿疹大鼠的皮损具有预防作用,其机制可能与抑制H1R/TRPV1、PAR-2/TRPV1和p38 MAPK通路有关。