Colon cancer-associated B2 Escherichia coli colonize gut mucosa and promote cell proliferation

AIM: To provide further insight into the characterization of mucosa-associated Escherichia coli (E. coli) isolated from the colonic mucosa of cancer patients.

基于JAK2/STAT3信号通路探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响

目的基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路,探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞分为55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组进行实验,另设仅添加培养基的空白组(含细胞)。除空白组外,其他组给予相应浓度的对叶百部总生物碱进行干预。干预24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞增殖抑制率;干预48 h后,采用Hoechst 33258染色法观察各组细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blot检测各组细胞JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,各浓度组细胞增殖抑制率增加;经Hoechst 33258染色后在各浓度组中可观察到典型的细胞凋亡形态改变,凋亡细胞数及细胞凋亡率均增加(均P<0.05);流式细胞术检测结果显示150μg/mL组和250μg/mL组细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与空白组比较,各浓度组的p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组的细胞增殖抑制率、凋亡细胞数及细胞凋亡率依次增加,p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论对叶百部总生物碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的活化,来抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并促进其凋亡。

miR-143-3p通过靶向EZH2调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-143-3p通过靶向果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法:选用2015年3月至2017年7月昆明医科大学第一附属医院手术切除的40例结肠癌患者的癌及癌旁组织标本,以及结肠癌细胞系COLO320、RKO、CL-11和正常肠黏膜细胞株NCM460,用qPCR法检测结肠癌组织和细胞系中miR-143-3p的表达水平。分别将miR-143-3p mimics、miR-143-3p inhibitor、EZH2 shRNA及阴性对照质粒转染进RKO细胞,用CCK-8法、Transwell小室法分别检测miR-143-3p/EZH2分子轴对RKO细胞增殖、迁移和侵袭的影响,用Western blotting检测RKO细胞中EZH2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p和EZH2的靶向关系。结果:miR-143-3p在结肠癌组织和细胞系中均低表达(均P<0.01)。过表达miR-143-3p显著抑制RKO细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-143-3p靶向EZH2。同时敲降miR-143-3p和EZH2可逆转敲降EZH2对RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-143-3p通过靶向EZH2并下调其表达水平进而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

血管生成素2经PI3K/Akt途径对HCT-8细胞增殖的促进作用

目的:研究外源性血管生成素2(Ang-2)蛋白对结肠癌细胞株(HCT-8)中Tie-2、1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt基因及蛋白表达的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法:用不同浓度的Ang-2蛋白(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0、3.0mg·L-1)作用于HCT-8细胞,用MTT法检测细胞增殖活性,根据实验结果选定Ang-2蛋白的后续实验浓度。细胞分为正常对照组(C组)、无血清培养液组(SD组)、Ang-2组(SA2组)及LY294002组(SA2L组),应用RT-PCR及Western blotting技术分析Tie-2、PI3K、Akt基因及蛋白的变化。结果:加入不同浓度的外源性Ang-2蛋白,HCT-8细胞均有不同程度的增殖,当Ang-2的浓度为2mg·L-1时,细胞的增殖力最强。SA2组中Tie-2、PI3K及Akt 3种基因及蛋白的表达均较SD组增强(Tie-2:均P<0.01;PI3K:P<0.01及P>0.05;Akt:均P<0.01),而在SA2L组中3种基因及蛋白的表达均较SA2组减弱(Tie-2:P<0.05及P<0.01;PI3K:P<0.05及P<0.01;Akt:P<0.01及P<0.05)。结论:Ang-2蛋白在结肠癌细胞中有促增殖作用,且其作用机制与Ang-2/Tie-2/PI3K/Akt调节的通路有关,应用LY294002可抑制该通路,实现抗肿瘤作用。

叶黄素介导Nrf-2/ARE信号途径抑制人结肠癌HT29细胞增殖的作用机制

目的:研究叶黄素对于核因子相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf-2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,H O-1)表达的影响,从而研究叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法:用不同浓度的叶黄素(20、40、80、120、160 mg/L)和空白对照组(0 mg/L)处理HT29细胞24、48、72 h,用CCK8法检测叶黄素对该细胞增殖的抑制作用.流式细胞仪检测细胞周期.RT-PCR检测Nrf-2和HO-1RNA表达水平的变化.Western blot检测Nrf-2和HO-1的蛋白表达水平的变化.结果:叶黄素能够抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,160 mg/L叶黄素作用72 h后,抑制率可高达78.09%,且具有剂量依赖性和时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期结果显示:叶黄素作用于HT29细胞48 h后,G_0/G_1期细胞显著增加.表明叶黄素可阻滞HT29细胞生长于G_0/G_1期.RT-PCR检测和Western b l o t检测的结果共同显示,经过不同浓度的叶黄素处理后,Nrf-2和HO-1 RNA的表达水平以及蛋白的表达水平与未经叶黄素处理的对照组相比明显上调,且具有剂量依赖性(P<0.01).结论:叶黄素可显著抑制H T29细胞的增殖,使其细胞周期阻滞在G_0/G_1期.同时诱导Nrf-2和HO-1 RNA和蛋白的表达,这可能是其抑制HT29细胞增殖、发挥保护作用的重要机制.

2-羟基-3-甲基蒽醌诱导结肠癌细胞凋亡机制的研究

目的探讨2-羟基-3-甲基蒽醌(HMA)对结肠癌HCT116和HT-29细胞生长的抑制的影响及其可能的机制。方法通过TCMSP数据库检索分析HMA的作用靶点。体外培养结肠癌细胞HCT116和HT-29,并给予不同浓度的HMA干预,通过CCK-8、台盼蓝计数、集落形成和Annexin V/PI双染法检测HMA对结肠癌细胞活力、生长、存活能力及凋亡的影响,Western blot法检测HMA对潜在靶点及凋亡调节蛋白表达的影响。结果TCMSP检索分析得到HMA存在于白花蛇舌草、半枝莲和巴戟天中药,含有32个潜在靶点,其中包含凋亡相关基因Caspase-3。不同浓度的HMA干预结肠癌细胞可抑制细胞活力、细胞生长、集落形成数量,同时诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,HMA可下调抗凋亡基因Bcl-2,上调促凋亡基因Bax,促进凋亡相关蛋白cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3蛋白的活化、剪切,从而促进细胞凋亡。结论HMA对大肠癌细胞有抑制生长和诱导凋亡的作用,可能是通过调控Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3等相关凋亡蛋白的表达。

人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移的影响

目的研究人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞的增殖和迁移能力的影响,为该药物的临床应用提供实验依据。方法MTT法检测人参皂苷Rg3处理的Caco-2细胞增殖情况,AnnexinV-PI流式细胞术检测Rg3处理的Caco-2细胞凋亡情况,实时RT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3基因表达情况变化,ELISA检测细胞培养上清中IL-6和VEGF质量浓度,划痕实验检测细胞迁移能力。结果人参皂苷Rg3可显著降低Caco-2细胞的增殖并诱导凋亡,Rg3处理的Caco-2细胞中Bax和caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调;Rg3可以影响细胞培养上清中IL-6和VEGF因子的分泌,Rg3处理的Caco-2细胞迁移能力。结论人参皂苷Rg3促进细胞凋亡,抑制结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移。

苦荞麸皮多酚抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖活性研究

研究了产自重庆酉阳的苦荞(Fagopyrum tartaricum L.Gaerth,FG1)麸皮和四川西昌的苦荞(Fagopyyrum tartaricum L.Gaerth,FG2)麸皮中酚类化合物的含量、抗氧化和抗增殖活性。结果表明:FG1和FG2 2种苦荞麸皮总酚含量分别为(26.40±0.41)和(27.00±0.72)mg GAE/g DW,且游离态是其酚类化合物的主要存在形式(约占其总酚含量的93%);2种苦荞麸皮酚提取物均表现出一定的抗氧化性,并且FG2的抗氧化能力强于FG1(P<0.05),FG1和FG2的DPPH自由基清除能力总IC50值分别为(39.56±2.76)和(24.69±0.33)μg·mL^(-1);还原力总EC_(50)值分别为(97.92±1.4)和(73.18±4.32)μg·mL^(-1);在抗增殖试验中,与对照组相比,FG1和FG2游离酚提取物均能明显抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖(P<0.05)。然而,在不产生细胞毒性的浓度范围内,其结合酚提取物却表现出极弱的抗增殖作用。

lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响。方法标本取自2016年1月至2018年12月南通市中医院收治的55例结肠癌门诊患者。通过体外实验研究,采集结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116和正常结肠上皮细胞系NCM460,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定lncRNA-CCAT2的表达情况。取lncRNA-CCAT2在结肠癌中相对表达量最高的细胞系,将其分为空白对照组(磷酸盐吐温缓冲液)、阴性对照组(经Lipofectamine TM 2000转染NC-siRNA序列)、CCAT2-siRNA组(经Lipofectamine TM 2000转染CCAT2-siRNA序列)。采用MTT实验检测三组细胞增殖能力,用流式细胞术检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞凋亡能力。通过蛋白印迹法检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、裂解型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及p53蛋白的表达水平。结果相比正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116中lncRNA-CCAT2相对表达量均明显上调(P<0.05),其中SW620的表达量最高。经MTT实验显示,转染后0、1、2 d,CCAT2-siRNA组与阴性对照组、空白对照组于490 nm波长处的吸光度值(OD 490 nm)比较,均无显著差异(P>0.05);转染后3、4 d,CCAT2-siRNA组OD 490 nm较阴性对照组、空白对照组明显下降(P<0.01);阴性对照组与空白对照组不同时间点OD 490 nm值的比较,均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,相比阴性对照组,CCAT2-siRNA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。CCAT2-siRNA组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,裂解型PARP和p53蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。结论lncRNA-CCAT2高表达于结肠癌细胞系,而通过敲低lncRNA-CCAT2的表达可起到阻滞结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且其作用机制与Bcl-2蛋白表达降低、裂解型PARP和p53蛋白表达升高可能存在密切关系。

OSU-03012对人结肠癌LoVo细胞增殖侵袭及COX-2、VEGF、MMP-2表达的影响

目的:探讨OSU-03012对人结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法:分别使用0μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的化合物OSU-03012处理人结肠癌LoVo细胞作为研究对象.MTT法检测各组细胞的增殖能力,Transwell法检测各组细胞的侵袭能力,qRT-PCR法和Western Blot法检测各组细胞COX-2、VEGF、MMP-2的表达情况.结果:OSU-03012作用结肠癌LoVo细胞24h、48h和72h,随着药物浓度的增加LoVo细胞的增殖能力逐渐降低,相同时间点不同浓度间两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05).不同浓度OSU-03012作用LoVo细胞24h,穿过基底膜的LoVo细胞数量,LoVo细胞COX-2、VEGF、MMP-2 mRNA和蛋白的表达明显降低,不同浓度间两两比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:OSU-03012可抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖与侵袭,其作用的分子机制可能与下调COX-2、VEGF和MMP-2的表达有关.

苹果酸对结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是当今最常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率仅次于肺癌及胃癌,位列恶性肿瘤第3位。目前CRC的治疗强调以手术为主,辅以放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗等手段。“药食同源”中药既是食品又是药品,具有饱腹之功、疗病之效[1],对降低CRC的发病率和死亡率具有重要的意义。

FOLFOX6方案对患者结肠癌细胞生物特性影响的研究

目的探究新辅助放化疗对患者结肠癌细胞生物特性的影响.方法选取2012-01/2015-12期间嘉兴市第二医院收治的68例结肠癌为研究对象,将患者采用随机数表法分为对照组和观察组,各34例.给予对照组患者结肠癌根治手术和常规术后放化疗,观察组患者在此基础上进行术前新辅助放化疗.对比2组患者癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的阳性表达率,2组患者治疗后20 mo的复发率和生存率.结果观察组与对照组患者的CEA阳性表达率分别为58.83%和85.30%,VEGFR2阳性表达率分别为44.10%和67.63%,PCNA阳性表达率分别为47.04%和73.54%,差异具有统计学意义(P<0.05).术后20 mo观察组患者的复发率和生存率分别为14.70%和70.58%,对照组患者的复发率和生存率分别为38.23%和47.05%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论术前新辅助放化疗能够降低结肠癌患者癌组织中CEA、VEGFR2和PCNA的表达,抑制结肠癌肿瘤细胞的增殖、转移,促进结肠癌肿瘤细胞凋亡,降低复发率,提高生存率.

紫草素通过激活活性氧自由基诱导大肠癌细胞的凋亡

目的:研究紫草素通过激活活性氧(ROS)自由基诱导大肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:通过MTT测定法检测紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力的影响,结合Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Caspase 3/9活性测定试剂盒检测半胱天冬酶活性,使用ROS检测试剂盒检测紫草素处理对HCT116和SW480细胞中ROS水平的影响,并借助Western Blotting检测Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达情况。结果:细胞活力检测结果显示,人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460对紫草素干预不敏感,而紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力表现出显著的抑制作用(均P<0.05)。在紫草素干预后,Western Blotting分析检测到细胞周期蛋白D、c-Myc、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达水平显著下调(均P<0.05)。同时,紫草素以剂量依赖性方式上调了Caspase3和Caspase9蛋白表达水平(均P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,经10μmol/L紫草素处理24 h后,HCT116和SW480细胞凋亡率增加至59.2%和65.6%,而几乎没有坏死细胞(Annexin V-,PI+);并检测到HCT116和SW480细胞线粒体膜电位被去极化。ROS水平检测结果显示,紫草素以剂量依赖性方式上调了HCT116和SW480细胞ROS水平。结论:紫草素通过线粒体介导途径诱导结肠癌细胞凋亡,Bcl-2蛋白家族和细胞内ROS水平升高在该过程中发挥重要作用。

复方半枝莲抑制人结肠癌COLO205细胞增殖

目的:探讨复方半枝莲对人结肠癌细胞COLO205体内外生长的抑制作用及机制。方法:体外培养COLO205细胞,分为空白组,顺铂(0.15 g·L^(-1))组,复方半枝莲高、中、低剂量(0.60,0.30,0.15 g·L^(-1))组。利用噻唑蓝(MTT)法检测复方半枝莲对COLO205细胞增殖抑制率的影响。采用免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达情况。选用SPF级裸鼠,于背部接种结肠癌COLO205细胞,待瘤体长到肉眼可见时,测量瘤体大小,根据瘤体大小区间随机分为复方半枝莲高、低浓度组,紫杉醇组和空白组,应用结肠癌移植瘤裸鼠模型体内实验检测复方半枝莲对COLO205细胞体内生长的影响。结果:体外细胞实验表明,经复方半枝莲作用后的人结肠癌细胞COLO205细胞出现了变形,并有细胞膜破损,细胞数逐渐减少,脱落而死亡的现象。48 h时复方半枝莲对COLO205细胞的抑制作用最强。其高、中、低剂量组抑制率分别为68.46%,63.11%,54.91%;且经复方半枝莲干预,COLO205细胞内的Bax,PUMA表达上调,Bcl-2表达下调;体内移植瘤实验显示,与空白组肿瘤体积比较,给药组的肿瘤体积明显减小。结论:复方半枝莲在体外内对人结肠癌细胞COLO205的生长均具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

磷脂酰肌醇3激酶抑制药(LY294002)对结肠癌细胞的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制药—2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)对HCT116结肠癌细胞增殖、凋亡、黏附和侵袭的影响和其机制。方法以6个浓度(1.25,2.50,5.00,0.00,20.00,40.00μmol·L^(-1))的LY294002处理HCT116细胞,以四甲基偶氮唑盐实验测定半抑制率(IC50)。将细胞随机分为2组:对照组和LY294002组。以烟酸己可碱/碘化丙啶实验检测细胞凋亡;黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell检测细胞侵袭情况;蛋白质印迹法检测PI3K蛋白相对表达水平和蛋白激酶B(Akt)、肿瘤坏死因子-κB(NF-κB)的磷酸化水平。结果 LY294002处理HCT116细胞IC50为13.55μmol·L^(-1)。对照组、LY294002组的细胞凋亡率分别为(3.56±0.37)%和(36.47±3.89)%;细胞黏附率分别为(98.59±9.27)%和(58.36±5.86)%;细胞侵袭数目分别为(173.82±12.48)和(59.60±5.96)个;PI3K蛋白相对表达水平分别为0.98±0.10和0.19±0.01;p-Akt相对表达水平分别为0.99±0.10和0.08±0.01;p-NF-κB p65相对表达水平分别为0.82±0.08和0.16±0.01。组间比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论 LY294002能显著地抑制HCT116细胞增殖、黏附和侵袭,并诱导细胞凋亡,与阻断PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

二氢杨梅素通过调控鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2对结肠癌生长的抑制作用

目的研究二氢杨梅素(DHM)对结肠癌生长的抑制作用及其可能机制。方法 (1)细胞实验:实验分4组:对照组(以2%胎牛血清处理SW480结肠癌细胞)、低、中、高3个剂量实验组(分别以10,20,40μmol·L^(-1)DHM处理SW480结肠癌细胞);以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法检测SW480结肠癌细胞的增殖;以免疫印迹法检测SW480结肠癌细胞中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)蛋白的表达。(2)动物实验:在Balb/c裸小鼠右下肢皮下接种SW480结肠癌细胞悬液0. 2 mL构建移植瘤模型;按照体重将模型小鼠随机分4组:模型组、对照组(顺铂3 mg·kg^(-1))和低、高2个剂量实验组(20,60 mg·kg^(-1)DHM),每组5只;以免疫组化法检测结肠癌组织中RhoGDI2蛋白的表达。结果 (1)细胞实验:处理SW480结肠癌细胞1 d后,对照组和低、中、高3个剂量实验组对结肠癌细胞的抑制率分别为(2. 17±0. 53)%,(5. 83±1. 91)%,(16. 2±2. 82)%和(34. 51±1. 74)%;这4组的RhoGDI2灰度值分别为72. 16±2. 73,61. 39±3. 81,48. 76±3. 92和32. 39±3. 17。3个剂量实验组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。(2)动物实验:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组的RhoGDI2表达强度分别为8053. 60±236. 21,2791. 39±189. 72,6521. 28±172. 89和4381. 86±226. 33,低、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。结论 DHM能够抑制SW480结肠癌细胞的增殖和体内生长,其作用机制可能为抑制RhoGDI2蛋白的表达有关。