消癌解毒方抑制肝癌H22移植瘤的生长及其机制

目的:研究消癌解毒方(Xiaoai Jiedu Recipe,XJR)对肝癌H22细胞小鼠移植瘤的抑制作用及其可能的机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,检测各组移植瘤生长情况,H-E染色观察各组移植瘤组织的病理改变。流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,ELISA法测定各组移植瘤小鼠外周血VEGF水平。结果:与对照组比较,XJR各剂量以及顺铂对H22移植瘤的生长均具有显著的抑制作用,抑瘤率分别为24.5%、42.8%、21.1%、58.6%(P<0.05或P<0.01)。病理观察见中剂量XJP组和顺铂组移植瘤组织大片状坏死,有明显染色质固缩环。中剂量XJR和顺铂将移植瘤组织细胞阻滞于G0/G1期(P<0.05),S期细胞数明显减少(P<0.05)。中剂量XJR组移植瘤细胞的凋亡率与顺铂组相当[(60.52±6.40)%vs(71.32±16.02)%,P>0.05]。中、高剂量XJR组和顺铂组小鼠外周血VEGF水平均显著降低[(104.3±6.1)、(105.8±7.2)、(88.6±4.3)vs(120.7±12.6)ng/ml,P<0.05或P<0.01]。结论:XJR能抑制H22小鼠移植瘤的生长,促进移植瘤细胞凋亡、抑制VEGF的产生可能是其抗癌作用机制之一。

佐剂增强的肿瘤细胞裂解物疫苗抗小鼠H22肝癌作用

以鼠源肝癌H22全细胞裂解物为抗原,通过化学偶联白喉毒素(DT)和串联重复的T辅助表位mH-SP70407-426肽段,混合OK432(链球菌A群)制成肿瘤全细胞疫苗H22-DT-M2-OK432(HDTMOK)。治疗性免疫结果显示,疫苗激发的免疫应答对H22肿瘤起到了有效的抑制作用。为进一步提高该疫苗的抗肿瘤效果,用偶联的疫苗制备免疫刺激复合物(ISCOM),并验证其抑瘤效果。治疗性免疫结果显示,与PBS组相比,ISCOM疫苗组平均瘤重和瘤体积显著降低(P<0.01),同时有效地抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01);ELISA法从血清中检测到高滴度的抗体。且与HDTMOK疫苗相比,ISCOM疫苗抑瘤作用提升显著(P<0.05)。HDTMOK能有效抑制小鼠肝癌实体瘤生长,佐剂配伍后的疫苗对H22的抑制更为显著,能够有效提升肿瘤全细胞疫苗的抗肿瘤能力。

当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对血清HIF-1α和LDH的影响

目的探讨当归贝母苦参丸(当归、浙贝母和苦参)对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对血清低氧诱导因子HIF-1α和乳酸脱氢酶(LDH)的影响。方法将雌雄各32只荷H22肝癌移植瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸与顺铂联合组,另设正常对照组(n=16)。观察各组小鼠一般状况,检测有效体质量变化及抑瘤率、q值、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、和肾脏的器官指数。血常规检测白细胞计数,ELISA检测血清HIF-1α的水平,血生化检测LDH活力。结果当归贝母苦参丸组与联合组的一般状况优于模型组和顺铂组;各治疗组瘤体质量均低于模型组瘤体质量(P<0.05),联合组的抑瘤率高于单用当归贝母苦参丸或顺铂的抑瘤率,联合用药疗效具有相加效应;当归贝母苦参丸组有效体质量增加、脾脏和胸腺指数高于顺铂组(P<0.05);当归贝母苦参丸组和联合组血清HIF-1α水平低于模型组(P<0.05),两组血清LDH活性低于顺铂组(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸具有抑瘤作用和对顺铂化疗的增效减毒作用,抑瘤作用可能与降低小鼠血清中HIF-1α水平和降低顺铂引起的LDH活性升高所致的组织损伤。

热休克蛋白70-H22肽刺激DC诱导特异性抗肝癌免疫

目的探讨热休克蛋白70(TB.HSP70)-H22肽是否能促进树突状细胞(DC)活化成熟并诱导H22特异性抗肿瘤免疫。方法取小鼠骨髓于培养第7天分为A、B、C 3组,分别给予未刺激、TB.HSP70-H22肽(10μg/mL)、TB.HSP70-H22肽(20μg/mL)干预24h,取上清液用ELISA法检测IL-12、IL-10,用FACS法检测CD40、CD80,用混合淋巴细胞反应检测淋巴细胞增殖,用MTT法检测DC活化淋巴细胞对H22和B16肿瘤细胞杀伤率。结果与A组比较,B、C组除对B16细胞杀伤率差异无统计学意义外,B、C组IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组对B16细胞杀伤率差异无统计学意义,IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TB.HSP70-H22肽能明显促进DC活化成熟,诱导H22特异性抗肿瘤免疫,为该疫苗用于肝癌免疫治疗提供了理论基础。

松生拟层孔菌提取物对肝癌细胞H22和肉瘤细胞S180的抑制作用

目的:观察松生拟层孔菌(Fomitopsis pinicola,FP)乙醇提取物Ⅰ号(简称FP-Ⅰ)的体内外抗肿瘤活性及其可能的机制。方法:以乙醇提取FP,获取乙酸乙酯相即为FP-Ⅰ。MTT法检测FP-I体外对小鼠肝癌细胞株H22及小鼠肉瘤细胞株S180增殖的抑制作用;建立S180细胞小鼠移植瘤模型,检测各组小鼠瘤质量、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、外周血白细胞数及淋巴细胞比例、肿瘤红细胞花环形成率,H-E染色观察FP-Ⅰ对各组S180移植瘤细胞凋亡的影响及心、肝、肾、胸腺和脾脏的组织学变化。结果:50、100、200、400μg/ml FP-Ⅰ对S180细胞增殖的抑制率分别为22.35%、32.49%、40.01%和74.01%,对H22细胞的抑制率分别为45.19%、51.10%、66.37%和82.40%。25、50、100 mg/kg FP-Ⅰ对小鼠S180移植瘤生长的抑瘤率分别为79.92%、66.18%和78.45%,CTX阳性对照(30 mg/kg)的抑瘤率为84.10%;中、高剂量FP-Ⅰ组S180荷瘤小鼠的淋巴细胞比例、胸腺指数及红细胞花环率均有一定程度的提高(P<0.05或P<0.01);各剂量组的S180移植瘤细胞均出现细胞凋亡的典型形态变化。结论:松生拟层孔菌提取物具有较强的抗肿瘤活性,其机制与其增强小鼠免疫功能和诱导肿瘤细胞凋亡有关。

三氧化二砷联合全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞H22及移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)在体内和体外对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用。方法建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,观察As2O3联合ATRA的体内抑瘤作用;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定As2O3联合ATRA在体外对小鼠肝癌H22细胞株的生长抑制作用。结果As2O3联合ATRA在体外能明显抑制H22细胞的生长和增殖,抑制率为52.24%;在体内对H22小鼠的肿瘤体积、重量均有明显的抑制作用,抑制率分别为66.25%、62.07%。结论As2O3和ATRA在体内和体外对H22肿瘤细胞的生长均有抑制作用,联合应用作用加强,有协同作用。

E838联合γ射线对小鼠肝癌H22抑瘤作用的实验研究

目的探讨E838药物对小鼠-肝癌H22的抑瘤效果及合用137Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用。方法取小鼠肝癌H22肿瘤组织经研磨用生理盐水稀释成约5×107/ml个肿瘤细胞,接种于小鼠腋下,0.2ml/只。实验分对照组、单放组、E838药物组(5、7.5、10mg/kg)和药物合用照射组及环磷酰胺组。E838各组每日1次ip给药,连续7d;环磷酰胺隔日1次共4次,药物合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射,每日一次,连续5d。结果E8385、7.5、10mg/kg剂量组对小鼠H22的抑瘤率分别为50.6%、62.73%和54.82%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),小鼠骨髓有核细胞的数量均高于对照组,药物合用137Cs γ射线能提高抑瘤效果,对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组,抑瘤率分别为52.98%、67.61%和59.15%,结论E838对肝癌H22肿瘤细胞具有明显的抑制作用,合用γ射线具有抑瘤增效作用。

参归丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的减毒增效作用及其机制

目的探讨参归丸的抑瘤作用及对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的增效减毒作用。方法建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组、参归丸组、参归丸加顺铂联合组,另设正常对照组。观察各组小鼠一般状况,计算有效体重变化;检测各给药组的抑瘤率、q值、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、肾脏的器官指数。血常规检测白细胞计数,ELISA检测血清低氧诱导因子(HIF1α)的浓度,血生化检测乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果参归丸组和联合组的一般状况优于模型组和顺铂组;各治疗组的瘤体质量皆小于模型组的瘤体质量(P<0.05),联合组的抑瘤率高于单用参归丸或顺铂组的抑瘤率,联合用药疗效具有相加效应;参归丸组有效体重增加、脾脏和胸腺指数高于顺铂组(P<0.05);参归丸组和联合组血清HIF1α浓度低于模型组(P<0.05);顺铂组血清LDH活性高于其他治疗组(P<0.05)。结论参归丸具有抑瘤作用和对顺铂化疗的增效减毒作用,其机制可能在一定程度上与降低小鼠血清中HIF1α浓度和LDH活性有关。

枸杞多糖对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响

目的:观察枸杞多糖(LBP)对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响。方法:昆明小鼠40只,分成4组(n=10),腹腔注射200μL的H22肝腹水瘤细胞(106mL-1),24h后分别以5、10或20mg/(kg·d)的LBP和等体积生理盐水灌胃,记录各组小鼠成瘤期和生存期。另取40只,随机分成4组(n=10),同上处理,连续喂养14d后处死小鼠,分别计算胸腺指数和脾指数;分离小鼠骨髓树突状细胞(DC),流式细胞术检测CD86、CD11a的表达,Westernblot检测白介素12(IL-12)P40的表达;诱导培养小鼠脾脏T淋巴细胞,MTT法检测分别以4组小鼠骨髓DC致敏的T淋巴细胞对H22肿瘤细胞的杀伤活性。结果:LBP可延缓荷瘤小鼠的成瘤期,延长其生存期(χ2=28.808和35.410,P均<0.001);提高其胸腺指数和脾指数(F=262.396和126.976,P均<0.001);使骨髓DCCD86、CD11a和IL-12P40的表达升高(F=3122.694,1469.946和252.590,P均<0.001);DC致敏的T淋巴细胞杀伤活性增强(F=122.539,P<0.001)。结论:LBP可以促进荷H22肝腹水瘤小鼠骨髓DC的成熟。

培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长的抑制作用

目的:观察培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长抑制作用以及对癌相关成纤维细胞(CAFs)调节作用和对细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8的影响。方法:制备H22肝癌细胞腹水型瘤株悬液,在健康小鼠腋下接种瘤细胞悬液造模,造模成功后随机分为模型组、替加氟组、中西结合组,分别予0.9%的氯化钠溶液、替加氟、培元抗癌汤联合替加氟进行药物干预。观察各组小鼠一般情况,连续用药两周后处死小鼠取瘤组织称重,并计算抑瘤率;Western blot法检测转移瘤中α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达水平。结果:干预后,中西结合组较其他两组比较,一般情况较好,小鼠进食、饮水状况良好,体重有所增加,对外部刺激反应敏感,活动无明显异常。替加氟组、中西结合组的瘤体重量明显低于模型组;中西结合组瘤体重量较替加氟组低,差异有统计学意义(P<0.05)。替加氟组、中西结合组小鼠α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05);中西结合组的上述指标均低于替加氟组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:培元抗癌汤联合替加氟能调节肿瘤微环境中CAFs及细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8,抑制小鼠H22肝癌细胞生长。

熊果酸对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节作用

目的探讨熊果酸(UA)对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用及免疫功能的影响。方法皮下移植建立H22荷瘤小鼠模型,腹腔注射不同剂量UA,检测抑瘤率和免疫器官指数,MTT法检测脾脏T、B淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞亚群含量及比例,ELISA法检测血清细胞因子IL-2、IL-4和TNF-α的表达量。结果 UA对小鼠皮下移植性肿瘤H22有显著的抑制作用,可降低免疫器官中异常增大的脾指数,增强脾脏中T、B淋巴细胞增殖能力,提高淋巴细胞亚群CD4+T细胞表达及CD4+/CD8+T细胞亚群比例,促进血清IL-2、TNF-α表达,降低IL-4表达。结论 UA可抑制小鼠肝癌H22肿瘤生长,体内可以提高荷瘤小鼠的免疫能力,其抗肿瘤作用可能与机体的免疫调节作用相关。

sCD40L联合TB.HSP70-H22肽刺激树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的探讨受sCD40L与结核杆菌HSP70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,TB.HSP70)-H22肽联合刺激的树突状细胞(dendritic cell,DC)在体内外的特异性抗肿瘤免疫。方法取小鼠骨髓于培养第7天分为未刺激组、sCD40L组、TB.HSP70-H22肽组、sCD40L+TB.HSP70-H22肽组,共4组,分别给予相应干预,24 h后取上清,ELISA法检测IL-12、IL-10,流式细胞术检测CD40、CD80,混合淋巴细胞反应(MRL)检测淋巴细胞增殖,MTT法检测对肿瘤细胞的杀伤率;建立小鼠肝癌模型,完全随机分为5组(分别给予生理盐水和以上4种干预获得的DC干预),Ⅰ组:生理盐水对照组,Ⅱ组:未刺激DC治疗组,Ⅲ组:sCD40L DC治疗组,Ⅳ组:TB.HSP70-H22肽DC治疗组,Ⅴ组:sCD40L+TB.HSP70-H22肽DC治疗组,于第21天测瘤质量,ELISA法测血清IL-10、IFN-γ。结果sCD40L+TB.HSP70-H22肽组的各项指标与其他各组相比,IL-10显著降低,其他指标均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅴ组与其他各组相比,IL-10和瘤质量均显著降低,IFN-γ显著上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论受sCD40L与TB.HSP70-H22肽复合物联合刺激后的DC被充分激活,能诱导强有力的特异性抗肿瘤细胞免疫,对H22瘤细胞产生强大的杀伤作用,显著抑制肿瘤的生长。

TIM2基因修饰的H22细胞体内成瘤作用的研究

目的观察小鼠TIM2基因修饰的H22肝癌细胞在小鼠体内的成瘤作用,初步研究TIM2基因在肿瘤生物治疗中的作用。方法构建TIM2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,体外筛选得到稳定表达TIM2基因的阳性单克隆H22细胞株,用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,同时以转染了pIRES2-EGFP空载体的H22-EGFP细胞和H22细胞做为对照,观察不同处理的H22细胞对小鼠的成瘤情况。结果重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2转染H22细胞后,经体外筛选和鉴定,得到稳定表达EGFP和TIM2基因的阳性单克隆细胞株H22-TIM2,免疫接种小鼠后可明显抑制小鼠肿瘤的发生和发展,小鼠肿瘤组织块的体积明显小于接种H22-EGFP细胞和H22细胞组。此外,接种H22-TIM2细胞组小鼠的生长情况也明显好于其他各组。结论TIM2基因转染H22细胞后可显著降低小鼠H22肝癌细胞的成瘤性,抑制小鼠体内肿瘤的生长。本研究为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

褪黑素上调H22细胞P53的表达

目的研究MLT对肿瘤细胞抑癌基因P53表达的影响。方法(1)建立荷瘤小鼠模型并给予褪黑素处理,取肿瘤组织进行P53水平的免疫组化分析;(2)褪黑素体外培养小鼠肝癌H22细胞,免疫组化法分析培养细胞P53的蛋白水平;以及采用RT-PCR方法检测P53 mRNA的水平。结果免疫组化分析显示MLT使体内和体外P53蛋白水平显著增高(P<0.01),RT-PCR方法显示P53mRNA水平增高。结论MLT能促进H22细胞抑癌基因P53的表达。

人参二苓汤及其水提醇沉提取物对H22荷瘤小鼠脾胸腺指数及外周血细胞的影响

目的探讨人参二苓汤及其水提醇沉提取物对H22荷瘤小鼠脾胸腺指数及外周血细胞的影响。方法将60只健康昆明小鼠分为正常组、荷瘤模型组、阳性对照组(CTX组)、水提组(RSEL)、总多糖组(PRSEL)、小分子组(SRSEL),每组10只。建立H22荷瘤小鼠模型,造模成功后分别灌服人参二苓汤水提物、总多糖、小分子,实验结束后计算小鼠脾胸腺指数,抑瘤率及外周血细胞的检测。结果人参二苓汤水提物(RSEL)组和总多糖(PRSEL)组抑瘤率分别为37.80%和50.13%;CTX组为79.62%;CTX组及人参二苓汤水提组和总多糖组平均瘤重分别为(0.7611±0.1502)g、(2.3231±0.5324)g和(1.8642±0.5740)g,与荷瘤模型组平均瘤重(3.7352±0.4851)g比较,差异有统计学意义(P<0.01),小分子组瘤重与荷瘤组比较差异无统计学意义(P>0.05);与水提组比较,总多糖组瘤重差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,人参二苓汤总多糖(PRSEL)组能显著增强荷瘤小鼠脾和胸腺指数(P<0.05或P<0.01),且较人参二苓汤水提物(RSEL)组和小分子(SRSEL)组更为显著;人参二苓汤总多糖(PRSEL)组能改善荷瘤小鼠晚期白细胞的过度增高状态(P<0.01),优于人参二苓汤水提物组(P<0.05)。结论人参二苓汤总多糖(PRSEL)可以明显延缓荷瘤小鼠晚期类白血病样反应的发生,维持血细胞在一个相对稳定的状态,且抑制肿瘤生长作用较明显,可能与其改善荷瘤小鼠免疫器官功能相关。

H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 22肿瘤细胞的亲和力。所获得的aptamer采用MACAWv2.05软件进行aptamer序列的一级结构同源序列比较,用DNASIS v2.5软件计算分析序列最低二级结构能量值,获得其二级结构模拟图。结果:本实验设计的文库序列:5′-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3′具有较高的扩增效率,适合于aptamer与以细胞为靶物质的筛选。经过11轮循环筛选,随机单链DNA文库与靶细胞结合的荧光强度从1%上升到59%,结合曲线进入平台期,表明结合已基本处于稳定状态,因此可以判断aptamer与靶细胞的结合基本已经处于饱和状态。对所获得的32个aptam er进行测序,然后进行一级结构和二级结构分析。一级结构分析获得5个保守序列:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,其余10个aptamer无同源序列。二级结构分析表明,aptamer形成的茎环、凸环结构可能是与H 22肿瘤细胞特异性结合的结构基础。亲和力检测结果表明第24号aptamer具有最强的亲和力。结论:利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer,其一级和二级结构与亲和力密切相关。

千佛菌对H22肝癌移植瘤抑制作用的实验研究

目的探讨不同剂量千佛菌对H22肝癌移植瘤的抑制作用。方法建立H22荷瘤小鼠模型,千佛菌按300、600mg/(kg. d)分为低、高剂量,于造模次日起,按千佛菌不同剂量分别灌胃治疗;对照组给予等量生理盐水灌胃,连续给药3w,定期测量瘤块大小。末次给药12h后,麻醉小鼠,取血,流式细胞技术检测小鼠外周血淋巴细胞亚群水平;取脾脏检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性;取胸腺及脾脏称重计算脾脏、胸腺指数;剥离瘤块,称瘤重,计算肿瘤抑制率。结果不同剂量千佛菌能够显著抑制小鼠体内肿瘤的生长,高剂量尤为明显,低、高剂量抑瘤率分别为39. 28%及55. 31%;千佛菌还能增强荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力;对NK细胞的杀伤活性有显著提高,与模型组相比,差异具有显著性(P <0. 05);千佛菌能促进荷瘤小鼠T细胞,尤其CD8+T细胞的增殖,纠正荷瘤小鼠CD4/CD8的比值,大剂量尤为明显,与模型组比较,差异具有显著性(P <0. 05)。结论千佛菌能够改善荷瘤小鼠机体的免疫功能,同时具有抗肿瘤作用。千佛菌可能是通过维持荷瘤小鼠脏器指数的稳定,保护小鼠的免疫器官,控制肿瘤生长;增强荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖能力、提高NK细胞的杀伤活性及纠正荷瘤小鼠机体CD4/CD8比值的紊乱来实现的。

鸦胆子油注射液对H22细胞增殖的抑制作用及其机制探讨

目的：探讨鸦胆子油注射液在体内外对 H22细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法取 H22细胞培养，采用 MTT 法检测鸦胆子油对细胞增殖的影响；应用 H22细胞建立小鼠荷瘤模型，给予鸦胆子油治疗，计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数，采用 MTT 法检测鸦胆子油对荷瘤小鼠脾细胞增殖的影响，采用双抗体夹心ABC-ELISA 法检测荷瘤鼠血清 TNF-α水平，采用放射免疫分析法检测转化生长因子（TGF）-α水平。结果鸦胆子油在（10~160）μg/ml 浓度范围内对 H22细胞的增殖抑制率为34.1%~52.31%，与对照组比有统计学意义；给予鸦胆子油25和50 mg＆#183;kg-1灌胃后，荷瘤小鼠瘤质量分别为（1.095±0.301） g 和（0.920±0.250） g，血清 TGF-α分别为（11.172±0.639） pg/ml 和（14.438±0.587） pg/ml，均较未治疗荷瘤动物显著下降[分别为（1.867±0.554） g 和（16.354±0.762） pg/ml]，TNF-α水平分别为（28.132±2.456） pg/ml 和（26.521±3.267） pg/ml，较未治疗荷瘤动物显著升高[（20.231±2.614） pg/ml，P〈0.05]；与对照组比，无论是 Con A 还是 LPS 刺激，荷瘤动物脾细胞增殖受到抑制（P〈0.05）。与荷瘤动物比，鸦胆子油体内给药则可促进脾细胞增殖，但对脾脏指数和胸腺指数无明显影响。结论鸦胆子油体内外均能抑制肝癌 H22细胞的生长，其抗肿瘤作用可能与改善荷瘤小鼠的脾细胞功能有关。

生物可降解镁对人胆管癌细胞和小鼠H22肿瘤抑制作用研究

目的评价可降解金属镁对人胆管癌细胞(RBE)和小鼠H22肿瘤的抑制作用。方法RBE细胞分别与纯镁和钛合金第1、3、5天浸提液共培养,细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞毒性,流式细胞仪分析细胞凋亡。采用H22荷瘤小鼠模型,分别植入纯镁、钛合金后,于第3、6、9、12、15天测量肿瘤重量和体积变化,并通过钼靶X线摄影观察金属在体内降解情况。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色和免疫组化染色检测细胞凋亡和相关蛋白表达水平。结果第1、3、5天,纯镁浸提液和钛合金浸提液对RBE细胞抑制率分别为24.7%、60.2%、70.7%和-3.1%、1.3%、1.0%,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率分别为13.8%、33.8%、46.7%和6.1%、7.1%、5.6%,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着时间推移,纯镁在小鼠H22肿瘤中可部分降解。纯镁组肿瘤生长受到抑制,第9、12、15天平均体积(5.6 cm^(3)、8.2 cm^(3)、11.2 cm^(3))均显著低于钛合金组(11.4 cm^(3)、18.0 cm^(3)、21.7 cm^(3))(P<0.05)。纯镁组、钛合金组凋亡细胞比率分别为9.7%、5.3%(P<0.05),纯镁组小鼠肿瘤组织碳酸酐酶(CA)Ⅸ蛋白表达与钛合金组相比显著降低(P<0.05),其上游蛋白低氧诱导因子(HIF)-1α虽有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论可降解金属镁可抑制RBE细胞和小鼠H22肿瘤生长。

罗汉松实多糖对小鼠肝癌H22细胞移植瘤生长的影响及其机制

目的 观察罗汉松实多糖(PSP)对小鼠肝癌H22细胞移植瘤生长的影响,并探讨其可能机制。方法 取昆明小鼠54只,均在右腋皮下接种H22细胞建立移植瘤模型,造模成功后,将小鼠随机分为PSP高、中、低剂量组(PSP-H组、PSP-M组、PSP-L组)及环磷酰胺(CTX)组、香菇多糖(LNT)组、模型组(每组各9只),另取9只正常昆明小鼠作为对照组。PSP-H组、PSP-M组、PSP-L组分别给予480、240、120 mg/kg的PSP,CTX组给予20 mg/kg的CTX,LNT组给予100 mg/kg的LNT,对照组、模型组均给予10 mL/kg的生理盐水,各组均灌胃给药,1次/天,连续给药14 d。末次给药16 h后,摘眼球取血,处死小鼠,取肿瘤、胸腺和脾脏,称重,计算肿瘤抑制率及胸腺和脾脏脏器指数;HE染色法观察肿瘤组织病理变化;MTT法检测脾组织T、B淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测眼球血清IL-2、IL-6、TNF-α、INF-γ。结果 与模型组比较,PSP-L组、PSP-M组、PSP-H组、CTX组、LNT组肿瘤质量降低(P均<0.05);与LNT组比较,PSP-M组、PSP-H组肿瘤质量降低(P均<0.05)。与LNT组比较,PSP-H组肿瘤抑制率升高(P<0.05)。与对照组比较,PSP-H组脾脏指数及PSP-L组、PSP-M组、PSP-H组、LNT组、模型组胸腺指数升高,CTX组、模型组脾脏指数低降低(P均<0.05);与模型组比较,PSP-L组、PSP-M组、PSP-H组、LNT组脾脏指数及胸腺指数升高,CTX组脾脏指数降低(P均<0.05);与LNT组比较,CTX组胸腺指数降低(P<0.05);与CTX组比较,PSP-L组、PSP-M组、PSPH组、LNT组脾脏指数和胸腺指数升高(P均<0.05)。模型组肿瘤细胞生长状态良好,清晰可见,数量多,排列紧密,细胞核深染,坏死细胞较少;CTX组肿瘤细胞数量减少,排列松散,出现不同程度的坏死区域;LNT组和PSP各组肿瘤组织疏松,肿瘤细胞减少,细胞不同程度坏死,其中PSP-H组细胞坏死更明显。与对照组比较,其余各组(除CTX组外)T、B淋巴细胞增殖能力增强(P均<0.05);与模型组比较,PSP-H组、LNT组T淋巴细胞增殖能力和PSP-M组、PSP-H组、LNT组B淋巴细胞增殖能力增强,CTX组T、B淋巴细胞增殖能力减弱(P均<0.05);与CTX组比较,PSP-L组、PSP-M组、PSP-H组T和B淋巴细胞增殖能力增强(P均<0.05)。与对照组比较,模型组血清IL-6水平升高,血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平降低(P均<0.05);与模型组比较,PSP-L组、PSP-M组、PSP-H组、LNT组血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平和CTX组血清IL-2水平升高,CTX组血清TNF-α水平降低(P均<0.05);与LNT组比较,PSP-H组血清IL-2水平升高(P均<0.05);与CTX组比较,PSP-L组及PSP-M组血清TNF-α、INF-γ水平和PSP-H组血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平升高(P均<0.05)。结论 PSP对小鼠肝癌H22细胞移植瘤生长有抑制作用,高剂量作用尤为明显,其机制可能是提高机体T、B淋巴细胞的增殖能力,升高血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平,改善机体免疫功能。